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       【关键词】  注射
        摘要：目的：建立新鱼腥草素钠注射液静滴用药时细菌内毒素的检查方法。方法：根据中国药典2000年版Ⅱ部细菌内毒素检查法要求进行实验。结果：注射用新鱼腥草素钠的内毒素限值应定为8.75 EU・mg1，该药稀释至0.029 mg・ml1浓度时对细菌内毒素检查无干扰。结论：鲎法检测注射用新鱼腥草素钠静滴用药时的细菌内毒素可行。
        关键词：注射用新鱼腥草素钠；静脉滴注；细菌内毒素；干扰实验
        Determination of Bacterial Endotoxins While   Using Sodium New Houttuyfonate for Intravenous Injection
        YE Lin, LIU Jun, GONG Wenming
        (Department of Pharmacy，The  First People"s Hospital of  Xiangfan，Hubei 441000, China)
        Abstract:Objective:To establish a test method for bacterial endotoxins in sodium new houttuyfonate for intravenous injection.Methods:The experiment was conducted according to the request of bacterial endotoxins in testing method collected in the 2nd Edition of China Pharmacopeia，2000.Results:The delimitation of  bacterial endotoxins of this medicament should be fixed less than 8.75EU・mg1，0.029 mg・ml1 of sodium new houttuyfonate for intravenous injection did not interfere in the test.Conclusion:The TAL may be used for detection of  bacterial endotoxins in Sodium New Houttuyfonate  for intravenous injection.
        Key words:Sodium New Houttuyfonate for injection；Intravenous injection；Bacterial endotoxins；Interference experiment
        注射用新鱼腥草素钠(Sodium New Houttuyfonate Injection，简称SNH)是三百草科植物蕺菜全草挥发油中一种醛类成份的化学合成分，可提高机体非特异性免疫力，临床应用广泛。本实验根据静脉用药时细菌内毒素总限量确定SNH细菌内毒素限值，建立SNH静脉用药时的细菌内毒素检查方法。
           1试药和仪器
        鲎试剂(TAL)：灵敏度0.25EU・ml1，规格：0.1 ml/支，批号：040425， 厦门鲎试剂厂；灵敏度0.25EU・ml1，规格：0.1 ml/支，批号：040916，湛江安度斯生物有限公司；细菌内毒素工作标准品：10EU/支，批号：040622， 厦门鲎试剂厂；细菌内毒素检查用水(BET水)：2 ml/支，批号：040108，厦门鲎试剂厂；SNH ：4 mg/2 ml，批号：031128，040105，040718， 广东永康药业有限公司；5%葡萄糖注射液：250 ml：12.5 g，批号：040512，040613，040826，四川科伦药业有限公司；快速混匀器(上海沪西分析仪器厂)。
           2方法与结果
        2.1样品细菌内毒素理论限值确定
        2.1.1按人用最大剂量确定参照SNH药品说明书规定的用法用量，静脉用药时SNH一次应用最大剂量为20 mg・(60 kg)1・h1 。根据公式L′=K/M ，其中内毒素阈剂量K=5.0EU・(kg・h)1，计算得细菌内毒素理论限值L′为15EU・mg1。
        2.1.2按静脉用药时内毒素总限量确定按20 mg样品与250 ml输液静滴作为1 h最大剂量计算，人体每公斤体重每小时接受细菌内毒素可能达到的理论总量K′为7.08EU・(kg・h)1。K′值超过标准［1］给定内毒素阈剂量5.0 EU・(kg・h)1，故在静脉用药时应按混合液内毒素总量K′与人用阈剂量K值之间关系来确定样品的内毒素限值，即(20 mg×L＋250 ml×0.5 EU・ml1)/60 kg・h≤K，其中0.5 EU・ml1为葡萄糖注射液的细菌内毒素限值，计算得样品的细菌内毒素理论限值L≤8.75EU・mg1。
        2.2样品有效稀释浓度的确定市售TAL常用灵敏度(λ)在0.5 ～0.03 EU・ml1范围内，根据C=λ/L得样品有效稀释浓度为0.057～0.003 4 mg・ml1。
        2.3TAL灵敏度复核实验按标准规定［1］操作，对标示灵敏度为0.25 EU・ml-1的两批TAL进行复核。结果见表1。
        表1TAL灵敏度复核结果TAL（略）
        表2样品干扰预实验稀释浓度（略）
        2.4样品干扰预实验为确定 SNH对鲎实验不造成干扰的浓度，在干扰实验前需进行干扰预实验。用BET水将SNH稀释成0.057，0.029，0.014 mg・ml1共3种浓度，，同时在稀释浓度样品中加入2.0λ内毒素工作标准品作为阳性对照，每一浓度平行做2支，另设2支BET水阴性对照。结果见表2。由实验结果初步可知SNH 在0.029 mg・ml1时对鲎实验不造成干扰。
        2.5样品干扰实验经预试，本品0.029 mg・ml1对实验无干扰作用，故以0.029mg・ml1样品稀释液进行干扰实验，本文采用2个厂家的TAL，观察3批样品对实验有无干扰作用。
        按标准［1］规定，用BET水和0.029 mg・ml1的样品稀释液将同一支细菌内毒素工作标准品分别制成含细菌内毒素2.0，1.0，0.5，0.25 λ四种浓度的内毒素溶液，分别用上述两个厂家的TAL观察样品在0.029 mg・ml1浓度时对实验的干扰情况，每一浓度平行做四管，同时另取BET水和样品稀释液各做两支阴性对照管。实验结果见表3。按规定计算 Es和Et，判断样品稀释液对实验有无干扰作用。结果表明Es均在0.5～2.0λ之间，三批样品Et均在0.5～2.0 Es之间，表明样品在0.029 mg・ml1浓度时对实验无干扰作用。
        表3样品(0.029 mg・ml1)干扰实验TAL（略）
        2.6模拟样品静滴状态时的细菌内毒素检查选用标示灵敏度为0.25 EU・ml1TAL(批号：040425)，取样品0.029 mg・ml1浓度的稀释液(批号：031128，040105，040718)、5% 葡萄糖注射液(批号：040512  040613  040826），样品葡萄糖溶液(通过一次性输液器后的滤液)，分别进行内毒素检查，结果均为阴性。
           3讨论
        3.1实验结果表明，静脉滴注用药时SNH的内毒素限值定为8.75 EU・ml1可行。0.029 mg・ml1浓度的SNH稀释液进行细菌内毒素检查时对灵敏度为0.25 EU・ml1 TAL无干扰作用，说明用TAL可对样品的进行细菌内毒素检查。
        3.2在干扰实验前加做干扰预实验，其目的是初步判断SNH对细菌内毒素检查不构成干扰的浓度，如果预实验在0.029 mg・ml1时干扰无法排除，则应考虑使用更高灵敏度的TAL进行实验。
           参考文献：
        ［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅱ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：附录XIXF，附录XIE.
        ［2］高山，邹华生. 注射用盐酸普鲁卡因细菌内毒素检查的方法研究［J］. 中国现代应用药学，2004.8(4):319319.
        (湖北省襄樊市第一人民医院441000)