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       【关键词】  提取物
        摘要：目的观察决明子提取物对CCl4所致小鼠急性肝损伤的影响。方法60只雄性昆明小鼠随机分为6组：正常对照组、模型对照组、阳性对照组、大、中、小剂量给药组。大、中、小剂量给药组按21.6，10.3，5.1 g/kg灌胃决明子提取物，阳性对照组按0.2 g/kg灌胃联苯双酯，正常对照组及模型对照组以等体积生理盐水灌胃，共7 d。第6天，模型对照组、阳性对照组和给药组按2.0 ml/kg背部皮下注射CCl4，正常对照组背部皮下注射等体积生理盐水。比较各组血清门冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase，AST）、丙氨酸氨基转移酶（alanine transaminase，ALT），超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)，并观察肝组织形态学变化。结果决明子提取物能显著降低CCl4所致小鼠血清AST 、ALT含量的升高（P<0.01），并能升高SOD的活性，降低MDA含量（P<0.05）；减轻对肝细胞的病理性损害。结论决明子提取物对CCl4所致的小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用。
        关键词：决明子；  急性肝损伤；  保护作用
        Experimental Study on Protective Effect of Semen Cassiae Extract  Against  Acute  Liver  Injury
        LIN Dongjing， JIN Zheng*
        （Yanbian University of  Basic Medical College，Yanji 133000, China）
        Abstract：ObjectiveTo observe the effect of Semen Cassiaeextract against carbon tetrachloride induced actute liver injury in mice. MethodsSixty male mice were randomly divided into normal control group，model control group，bifendate pills control group，high-dosage group，middle- dosage group and low- dosage group. The mice in the above groups were fed for 7 days. The drug groups were pretreated intragastrically with 21.6,10.3,5.1 g/kg extract，bifendate pills groups were pretreated intragastrically with 0.2 g/kg bifendate. Control animals were given the same volumn physiological saline. On the 6th day of feeding, the mice except normal control group were given 2.0 ml/kg carbon tetrachloride by subcutaneous injection. Twenty-four hours after the intoxication，the serum AST，ALT，SOD activities and MDA content were measured in each group above. ResultsSemen Cassiae extract significantly decreased carbon tetrachloride induced actue hepatic injury with increasing the activities of AST，ALT and the content of MDA ，increased the activities of SOD in serum，the severity of liver injury was slight in the high dosage group in pathological examination. ConclusionIt is revealed that Semen Cassiae extract could prevent carbon tetrachloride from inducing acute liver injury.
        Key words：Semen Cassiae extract；  Liver injury；  Protective effect
        决明子Semen Cassiae属豆科植物决明子成熟干燥种子，处方名为草决明、生决明。决明子具有降血压、降血脂、导泻、抗菌、抗血小板聚集等多种作用［1~3］。本实验研究决明子提取物对肝损伤的保护作用，并对其作用机理进行初步探讨。
           1  材料与方法
        1.1  决明子提取物 取500 g生药材加入4 000 ml（8倍量）60% 乙醇，放置1 h，在60℃水浴回流2 h，过滤，残渣加入3 000 ml（6倍量）60% 乙醇60℃水浴回流2 h，合并滤液，用旋转蒸发仪回收溶剂，得粗粉59 g（每1 g粗粉相当于生药材8.5 g）。
        1.2  试剂联苯双酯滴丸，浙江医药股份有限公司新昌制药厂生产，批准文号：国药准字H33020232；门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）均购自南京建成生物工程研究所。其他试剂为国产分析纯。
        1.3  主要仪器722型分光光度计：中国厦门分析仪器厂；低温高速离心机：美国Sigma公司；日立全自动生化检测仪：7600-010型；820型组织切片机：德国Leica Instruments公司； OLMPUS CH30型万能显微镜：日本OLMPUS光学工业株式会社。
        1.4  实验动物昆明种雄性小鼠，普通级，体重（20±2）g，由延边大学基础医学院动物科提供。
        1.5  方法
        1.5.1  动物分组及给药方法按随机数字表法将60只小鼠分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、大、中、小剂量给药组6组。大、中、小剂量给药组分别按21.6，10.3，5.1 g/kg给予灌胃决明子提取物；阳性对照组按0.2 g/kg灌胃联苯双酯混悬液；正常对照组及模型对照组以等体积生理盐水灌胃，1次/d，连续7 d，末次给药后1 h，除正常对照组外，其余各组均皮下注射0.5% CCl4 花生油溶液2.0 ml/kg，禁食，不禁水。24 h后摘除眼球取血，分离血清。
        1.5.2  生化检测及组织病理学观察按试剂盒说明测定AST、ALT、SOD活性，MDA含量。快速取大致相同部位1/2肝左叶组织置于Bouin氏液中，常规脱水，石蜡包埋，切片，HE染色进行病理形态变化观察。
        1.6  统计学处理数据以均数±标准差（±s）表示，各组样本均数间差别的假设检验用方差分析（analysis of variance，ANOVA），P＜0.05认为有统计学意义。
           2  结果
        2.1  决明子提取物对小鼠血清AST、ALT、SOD、MDA含量的影响模型对照组与正常对照组比较P<0.01，表明CCl4造模成功。给药组与模型对照组比较P<0.01，说明决明子提取物显著降低CCl4所致急性肝损伤小鼠血清AST，ALT的升高，同时大、中剂量给药组明显降低MDA的含量（P<0.05），使SOD活性明显升高（P<0.05）。
        表1  决明子提取物对CCl4所致小鼠急性肝损伤（略）
        2.2  肝组织病理形态改变 光镜下可见正常对照组肝小叶结构正常，肝索结构清晰可辨，未见肝细胞变性、坏死等病理变化。模型对照组改变明显，肝小叶失去正常结构，肝细胞不同程度的坏死伴炎细胞浸润（中性粒细胞为主），嗜酸性增强，部分可见浊肿，体积增大，呈现气球样病变。阳性对照组、大、中剂量给药组与模型对照组比较上述改变有一定减轻。大剂量给药组炎性肝细胞明显减少，肝细胞脂肪变性明显好转，正常肝细胞数目增多。小剂量给药组效果较差。
           3  讨论
        肝损伤是由多种病因引起并且可以有多种因素参与的复杂过程。四氯化碳引起肝损伤是传统的肝毒模型，它对肝损伤的毒性作用是通过脂质过氧化作用进行的。CCl4在肝微粒体细胞色素P-450酶激活下产生活性自由基CCl3・， CCl3・可进一步与氧反应，形成具有更强反应活性的CCl3Oˉ，这些自由基与肝细胞内大分子发生共价结合，也可攻击肝细胞膜不饱和脂肪酸发生脂质过氧化，损伤肝细胞膜的结构和功能，使膜通透性升高，导致细胞肿胀坏死［4,5］。本实验用CCl4造成肝损伤动物模型，其主要形态学变化与前人所见一致［6］。存在于肝细胞质中的可溶性酶AST、ALT在肝细胞损伤后释放入血，血清中两者水平高低可以反应肝细胞损伤程度，可作为早期肝损伤的指标。本实验结果显示模型对照组AST、ALT活性显著高于正常对照组，表明急性肝损伤模型成功（P<0.01）。决明子提取物显著降低CCl4所致小鼠急性肝损伤血清AST、ALT的升高（P<0.01），表明药物具有一定的作用。MDA是脂质过氧化的最终产物，可严重破坏细胞膜结构，导致细胞肿胀、坏死，含量高低可反应氧化的损伤程度［7］，大、中剂量给药组显著降低急性肝损伤小鼠血清MDA含量（P<0.01），在病理形态观察中进一步证明给药组正常肝细胞增多，变性、坏死减少。自由基是人体正常生化过程的中间产物。只有当自由基产生过多或者机体内的酶系统过少时才导致疾病，这其中主要有氧自由基和脂质自由基。SOD是细胞内主要的防御性抗氧化酶，能够清除自由基，并可抑制自由基启动的脂质过氧化反应，从而起到保护细胞膜结构与功能的完整作用。决明子提取物对此有一定的改善作用，说明决明子提取物可能通过保护细胞膜，清除氧自由基抑制脂质过氧化而对肝细胞起到保护作用。
           参考文献：
       ［1］  钟先锋，邓泽元，黄桂东.决明子用效成分的提取［J］.南昌大学学报，2004，28(1)：96.
［2］  王根生，韩哲武.甘草类黄酮对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的影响［J］.药学学报，1993，28（8）：572.
［3］  李素婷，杨鹤梅，石艳华，等.黄芩茎叶总黄酮保肝作用的实验研究［J］.中国中医药信息杂志，2004，11（7）：593.
［4］  吴东方，周本宏，罗顺德，等.银杏叶总黄酮对化学性肝损伤的影响［J］.中草药，1997，28（6）：348.
［5］  Kalt FG, Past GB, Snyder R. Sewent toxicology recent advances in the toxicology of benzene, the glycolethers, and carbon tetrachloride［J］.Ann Rev Pharmcol Toxicol，1987，27：379.
［6］  金香子，李莲花，姜逢春，等.熊胆对四氯化碳所致肝细胞损伤的保护作用［J］.中国中医药科技，1999，6（3）：169.
［7］  张学武，朴  龙，刘  超，等.珍珠梅水提物对大鼠肝损伤的保护作用［J］.世界华人消化杂志，2003，11（10）：1497.
        (延边大学基础医学院，吉林 延吉  133000)