痒安洗剂的薄层层析实验
作者:何秋月, 潘见欢, 李子鸿, 刘东文
《时珍国医国药》 2006年 第6期
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【关键词】 痒安洗剂;,,薄层色谱法;,,苦参;,,蛇床子;,,花椒
摘要:目的建立痒安洗剂的薄层层析定性鉴别方法。方法采用薄层层析法对洗剂中蛇床子、苦参、花椒3味中药进行定性鉴别。结果供试品的色谱中,在与对照品、对照药材相应的位置上,均显相同颜色的斑点,空白无干扰。结论该方法斑点清晰,重现性好,可作为该制剂的定性控制方法。
关键词:痒安洗剂; 薄层色谱法; 苦参; 蛇床子; 花椒
痒安洗剂是我院皮肤科的经验方,由苦参、蛇床子、花椒等多味中草药提取而成,具有清热燥湿、祛风止痒、杀虫之功效,临床主要用于治疗皮肤瘙痒症,特别是由神经性皮炎、疥疮等疾病所引起的皮肤瘙痒症疗效明显。本文对方中苦参、蛇床子、花椒3味中药用薄层层析法进行鉴别,以建立制剂的定性鉴别方法,控制药品质量,确保临床用药的安全有效。现报道如下。
1 材料
痒安洗剂,由本院制剂中心提供;苦参碱、蛇床子素,均由中国药品生物制品检定所提供;硅胶G,青岛海洋化工厂提供;所用试剂均为分析纯;紫外分析仪,上海顾村电光仪器厂。
2 方法
2.1 蛇床子的薄层色谱鉴别
2.1.1 蛇床子素对照品溶液的制备取蛇床子素对照品适量,加甲醇制成每毫升含1mg的溶液,作为蛇床子素对照品溶液。
2.1.2 蛇床子对照药材溶液的制备取蛇床子对照药材1 g,加乙醇10 ml,超声处理5 min,滤过,滤液作为蛇床子对照药材溶液。
2.1.3 供试品溶液的制备取痒安洗剂5 ml,浓缩成稠膏状,加5 ml乙醇,振摇后放置过夜,滤过,滤液作为供试品溶液。
2.1.4 蛇床子阴性对照液的制备按处方比例取缺蛇床子的其它药材适量,按痒安洗剂制备工艺制成蛇床子阴性样品,照供试品溶液的制备方法制得蛇床子阴性对照溶液。
2.1.5 薄层层析[1]精密吸取以上4种溶液各5 μl,分别点于同一块0.5%羧甲基纤维素钠的硅胶G薄层板上,以苯-醋酸乙酯(30∶1)为展开剂,展开约10 cm,取出,晾干,在紫外灯(365 nm)下检视,在供试品色谱中,与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点,而阴性无干扰(见图1)。
2.2 苦参的薄层色谱鉴别
2.2.1 苦参碱对照品溶液的制备取苦参碱对照品适量,加乙醇制成每毫升含1 mg的溶液,作为苦参碱对照品溶液。
2.2.2 苦参对照药材液的制备取苦参药材2 g,加氯仿30 ml,浓氨试液0.5 ml,静置过夜,滤过,滤液于水浴上蒸干,残渣加乙醇2 ml溶解,作为苦参对照药材溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备取痒安洗剂5 ml,用氨试液调节pH9~10,置分液漏斗中,氯仿萃取4次,5 ml/次。合并氯仿液,置60℃水浴上挥干,残渣用无水乙醇溶解并定容至5 ml,摇匀,离心,取上清液作为供试品溶液。
2.2.4 苦参阴性对照液的制备按处方比例取缺苦参的其它药材适量,按痒安洗剂制备工艺制成苦参阴性样品,照供试品溶液的制备方法制得苦参阴性对照溶液。
2.2.5 薄层层析[1] 精密吸取以上4种溶液各5μl,分别点于同一块0.5%羧甲基纤维素钠的硅胶G薄层板上,以苯 丙酮 甲醇(8∶3∶0.5)为展开剂,氨蒸气饱和,展开约10 cm,取出,晾干,再以甲苯 醋酸乙酯 甲醇 水(2∶4∶2∶1)10℃以下放置的上层溶液为展开剂,展开,展距同上,取出,晾干,喷以碘化铋钾溶液 无水乙醇(2∶1)试液。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的橙色斑点,而阴性无干扰(见图2)。
2.3 花椒的薄层色谱鉴别
2.3.1 花椒对照药材液的制备取花椒对照药材2 g,加乙醚20 ml,充分摇匀,浸渍过夜,滤过,滤液挥至约1 ml,作为花椒对照药材溶液。
2.3.2 供试品溶液的制备取痒安洗剂10 ml,用乙醚萃取2次,10 ml/次。合并醚层,水浴挥醚至3 ml,作为供试品溶液。
2.3.3 花椒阴性对照液的制备按处方比例取缺花椒的其它药材适量,按痒安洗剂制备工艺制成花椒阴性样品,照供试品溶液的制备方法制得花椒阴性对照溶液。
2.3.4 薄层层析精密吸取以上3种溶液各5μl,分别点于同一0.5%羧甲基纤维素钠的硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90℃) 醋酸乙酯(19∶1)为展开剂,展开,展距约10 cm,取出,晾干,喷以二硝基苯肼试液显色。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性无干扰(见图3)。
3 讨论
花椒的薄层色谱鉴别实验中,曾选用《中国药典》2000年版Ⅰ部花椒项下的薄层色谱鉴别条件,以正已烷 醋酸乙酯(4∶1)为展开剂,对花椒进行定性鉴别,结果表明斑点严重拖尾,分离效果差,且阴性实验有干扰。经3次重复实验,结果亦然。 痒安洗剂中苦参碱、百部、花椒均含有生物碱,成分复杂,给分离鉴别带来了困难,特别是以薄层层析法进行定性实验时,各组分间相互影响,使斑点拖尾,分离不完全,因此提取方法和展开剂选择是本实验定性鉴别的关键。在苦参的薄层色谱鉴别实验中,曾分别以氯仿 甲醇 浓氨试液(5∶0.6∶0.2)、苯 丙酮 甲醇(8∶3∶0.5)、醋酸乙酯 丙酮 苯 浓氨试液(4∶3∶2∶0.2)为展开剂一次展开、或以苯 丙酮 甲醇(8∶3∶0.5)和甲苯 醋酸乙酯 甲醇 水(2∶4∶2∶1)两次展开,结果发现前3种展开剂展开效果不好,第4种展开系统虽要经两次展开,操作较复杂,但分离效果好,重现性好,且阴性无干扰,可作为本制剂苦参的定性鉴别方法。
生物碱鉴别实验中显色剂的选用:实验中曾分别以碘化铋钾无水乙醇溶液(2∶1)和联用碘化铋钾试液、亚硝酸钠乙醇试液作为显色剂,前者显色时间短,放置后很快开始褪色,后者是药典方法,当先后喷以碘化铋钾试液、亚硝酸钠试液显色后,板面的颜色变得很深,掩盖了所有斑点,显色效果差。但当再喷以碘化铋钾无水乙醇试液时,斑点重现,而且经过3次显色后的斑点不容易褪色。
参考文献:
[1]国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2000:256.
1. 广东省佛山市中医医院 528000;
2. 广州中医药大学,广东 广州 510405
基金项目:广东省佛山市卫生局立项项目(No.2004154)
作者简介:何秋月(1971 ),女(汉族),广东佛山人,现任广东省佛山市中医医院主管药师,硕士学位,主要从事中药制剂研究工作.