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       【关键词】  外燥；,,桑杏汤；,,血清；,,呼吸道；,,抗体
       　摘要：目的 观察桑杏汤对温燥小鼠血清IgG（IgGS）、呼吸道液IgG(IgGR)与呼吸道黏多糖（RS）的影响。方法54只SPF级昆明小鼠随机分为常温常湿组（A组）、温燥对照组（B组）和温燥治疗组（C组），每组18只。药物处理后第5天检测IgGS，IgGR，RS（μg/ml）与脾脏及胸腺平均重量（mg）。结果 B组IgGR（2.30±0.32）明显低于A组（5.68±0.64，P<0.01），C组RS、IgGS明显高于A组，且该组IgGR接近A组，但胸腺平均重量低于其它二组（P＜0.01）。结论温燥可致小鼠气道IgGR降低而抵抗力下降；桑杏汤主要作用机理是促进肺津生成而润燥，加之增加气道IgGR，共同增强气道御邪能力。结果还为中药药物归经理论提供实验证据。
       关键词：外燥；  桑杏汤；  血清；  呼吸道；  抗体
       Effects on Antibodies of Secretion of Respiratory and Intestine of Mice in WarmDry with "SangXing Tang"
       DING Jianzhong,  GONG Quan,  ZHANG Liutong, QIU Xingfan, CHEN Gang, ZHU Huiling, ZHANG Yuan
       （1.Medical School of Yangtze University, Jingzhou  434000,China; 2.Hubei College of Traditional Chinese Medicine,Wuhan  430061, China）
       Abstract：ObjectiveTo investigate the effects on IgG in Serum(IgGS) and respiratory(IgGR)and mucus(RS)and weight of spleen and thymus(mg) in WarmDry with "SangXing Tang". Methods54 kunming mice(SPF) were divided into three groups including group A(normal mice),group B(control mice),group C(cure mice),18 mice/group.RS（μg/ml）,IgGS,IgGR and weight of spleen and thymus(mg) were measured on day 5 after treated with the herbs.ResultsIgGR of group B(2.30±0.32) was obviously lower than those of  group A(5.68±0.64,P<0.01);RS,IgGS of group C were higher than that of group B(P<0.01) and IgGR was not different significantly with that of  group A(P>0.05).ConclusionThe results were first provided evidences that the mechanism of "SangXing Tang" were greater stimulated RS and IgG-R to protected the defend function of respiratory in Warm-Dry.
       Key words：WarmDry; Sang-Xing Tang;   Serum;   Respiratory;  Antibody
   
　　“一交秋分，燥金司令，所起之风，全是一团燥烈之气，干而不润。是以无草不黄，无木不凋，人身应之，燥病生焉。凡有身热咳嗽、内烦口干一切百病，无不起于干燥。”（《医学传灯・卷上》）燥邪初伤肺气，布津失职，则见肺经燥热化火、耗劫阴液之候，温燥之证辨治应辛凉甘润，桑杏汤为之经方并沿用至今。由于燥证辨证论治文献零散，至今未见对治疗外燥经典方作用机理的实验研究［1］。呼吸道液分泌功能与气道IgG抗体是气道重要保护机制之一。在已有资料显示外燥可致实验小鼠气道炎性病变基础上，本文研究桑杏汤对温燥小鼠气道液分泌、血清与呼吸道液抗体的影响，为阐析桑杏汤作用机理与扩大临床应用提供实验依据。
       1  材料与方法
       1.1  主要仪器与试剂 LRH250人工智能气候箱（温度：30~65℃±1℃，相对湿度：30%~90%，广东）；LG风扇程控仪（MASTERK30H,韩国），低温冰箱（VXE380，85℃,法国），酶标检测仪（KHB ST360,上海），分析天平（MonoBioc AB304S,瑞士）。IgG ELISA试剂盒（华美生物工程公司，批号：200501）。主要试剂：咔唑（Singam）、D葡萄糖醛酸内酯（Singam）、四硼酸钠（上海），其余试剂均为A.R。
       1.2  实验动物SPF级昆明小鼠54只，体重(18±1)g，雌雄各半，湖北省实验动物研究中心提供，许可证号：SCXK（鄂）20032005。
       1.3  实验药物桑杏汤（《温病条辨》）组方：桑叶 9 g ，杏仁 9 g，沙参15 g ，象贝母 12 g ，香豉 6 g ，栀子皮 12 g， 梨皮 12 g。生药由湖北省荆州中药材公司提供。取1剂，加3倍水浸泡2 h后微火煎至100 ml，重复3 次，将3 次煎液过滤并混匀，水浴浓缩至200 ml，其生药量为364 g/L。按临床成人剂量计算，C组动物按0.009 g・kg1・d1生药量给予灌胃处理，1次/d，连用5 d。A组与B组用无菌生理盐水代替药物。
       1.4  方法
       1.4.1  实验动物在实验室常规饲养7d后随机分为3组：常温常湿组（A组）、温燥对照组（B组）、温燥治疗组（C组），每组18只，置人工气候箱内常规饲养，按表1“温度－相对湿度－风”条件综合刺激进行造模。第7天进行药物治疗。表1  各组小鼠“温度相对湿度风”处理条件（略）
       1.4.2  呼吸道液黏多糖测定（RS,μg/ml）：咔唑比色法［2］。药物处理后第5天、各组小鼠在剖杀前4 h禁食、禁水。断颈处死小鼠并暴露气管，从喉头处行气管插管，缓慢推注37℃预温的无菌生理盐水1 ml，回抽此液并重复2次，离心取上清液检测RS。每份标本分为2 个稀释度，每个稀释度测定2 次,取均值。用3 mmol/L氯化钠稀释D葡萄糖醛酸内酯为25~300 μg/ml并制作工作曲线（n=8,r=0.899 2）。
       1.4.3  血清IgG检测（IgGS）：ELISA方法［3］。药物处理后第5天、各组小鼠在处死前4 h禁食、禁水。常规眼球取血并分离血清、置65℃备检。每份标本重复测定2 次，取均值。以包被液作空白对照，PBS pH7.4（10%小牛血清）作阴性对照。记录标本均值与阴性对照（P/N）倍数之平均值。
       1.4.4  呼吸道液IgG检测（IgGR）: 各组标本获取方式同RS测定，用ELISA方法［3］。
       1.4.5  小鼠脾脏与胸腺平均重量检测（均重，mg）：由专人常规剖取实验小鼠脾脏与胸腺后，立即经1/万分析天平重复称重3次，取均值。
       1.4.6  统计学处理：实验数据以 ±s表示，采用SSPS13.0软件，资料之间比较用ANOVA分析，显着性检验采用多个样本均数间q检验（NewmanKeuls法），P<0.05认为差异有统计学意义，检验水准为双侧α=0.05。
       　　2  结果
       2.1   小鼠一般情况：温燥组、凉燥组动物在造模处理后2~3 d饮水量增加、饮食减少；活动度明显下降，喜欢群聚、多睡，毛色粗糙，血液黏稠，温燥组动物排出的粪便明显干燥。
       2.2  桑杏汤对温燥小鼠RS、IgGS、IgGR和对脾脏与胸腺的影响结果见表2。表2  桑杏汤对温燥小鼠RS，IgGS，IgGR与脾脏与胸腺的影响（略）
       　　3  讨论
       根据气象学“候平均气温”，以平均气温10~20℃为春、秋季节，用“季平均温度”（指各季中间所在月分的月平均气温代表各季的气温）、以10月的平均气温为秋季的温度，课题组提出以平均气温15℃和相对湿度70%±2%为常温常湿气候，（22±2）℃为温燥气候，取相对湿度33%±2%模拟秋季干燥气候，人工外燥环境中风速定为2.5 m/s。以表1条件的已有研究资料显示，外燥可致小鼠气管上皮鳞状化生与浆液腺上皮黏液腺化生、中性粒细胞浸润、对细菌攻击敏感性增高等病理改变。
       与A组相比，B组RS变化似不明显，该组IgGS明显升高，但是IgGR显著降低（P<0.01），提示温燥病机之一是引起气道免疫防御屏障功能障碍。C组RS、IgGS较A组升高（P<0.01），尤其是IgGR增加并接近A组水平（P>0.05），表明气道抗体含量增加以加强免疫防御功能。抗体能特异性结合抗原如细菌、病毒，活化补体等以产生多种生物学效应。尽管分泌型IgA是呼吸道黏膜局部免疫的重要因素，但从上气道至周围气道IgA逐渐减少而IgG趋于增高，IgG大多自血循环弥散而来，多数抗菌、抗病毒抗体都属于IgG类抗体，是呼吸系统主要防御成分。呼吸道腺体以及杯状细胞分泌的黏液内含黏蛋白，主要成分为黏多糖和蛋白质，RS与呼吸道液分泌呈正相关，可覆盖于黏膜表面形成黏液毯，主要作用是湿润气道黏膜、保护上皮的纤毛运动，是气道重要保护屏障之一［4］。
       桑杏汤方中桑叶清宣肺热；杏仁宣利肺气，润燥止咳。二药配伍则清凉宣透、润燥止咳。香豉辛凉解表、助桑叶轻宣透热；象贝母清化痰热、开郁散结以助杏仁润燥止咳；沙参养阴清肺、益胃生津；栀子皮清热利湿，凉血解毒；梨皮清热润肺，止咳化痰。该方中诸药主归肺经，全方清宣燥邪、润肺止咳。结果表明桑杏汤主要机制是通过增加呼吸道液分泌而生津润燥。因为津液是包括多种营养物质、具有多种生理功能的阴（水）液之总称，是人体“正气”的组成部分而参与抗邪御体［5］；桑吉汤同时增加气道IgG以维护气道免疫功能，二者协调以促进气道黏液毯发挥局部御邪功能而达到治疗作用。同期组织病理学检查示治疗组气道上皮炎性浸润与腺体肿胀明显减轻。本结果首次为桑杏汤作用机理及中药药物归经理论提供实验资料。温燥组胸腺平均重量显著低于其它二组的现象提示，温燥对机体细胞免疫功能有一定的影响。
       测定RS，IgGR和IgGS可为临床检测患者气道防御功能和秋燥咳喘诸证辨证论治提供量化检测方法。
       　　参考文献：
       ［1］张六通，梅家俊，黄志红，等.外湿致病机理的实验研究［J］.中医杂志，1999，40（8）：496.
       ［2］徐叔云，卞如濂，陈  修.药理学实验方法，第3 版［M］.北京：人民卫生出版社，2002：1360.
       ［3］汪  谦.现代医学实验方法［M］.北京：人民卫生出版社，1998：738.
       ［4］陈灏珠.实用内科学・下册，第11版［M］.北京：人民卫生出版社，2001：1559.
       ［5］汤  毅.伤津证与生津法初探［J］.中医杂志，2005，46（8）：628.
　　
　　1.长江大学医学院，湖北 荆州  434000； 
       2.湖北中医学院，湖北 武汉   430061
       基金项目：湖北省自然科学基金资助项目（No.2004ABA185）
       作者简介：丁建中(1955)，男(汉族)，湖北利川人，现任长江大学医学院教授，硕士生导师，博士学位，主要从事医学免疫学及病原学研究工作.
       通讯作者简介：张六通(1939)，男(汉族)，江苏武晋人，现任湖北中医学院教授，博士生导师，主要从事中医基础理论研究工作.