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       【关键词】  血虚模型；,,四物汤；,,环磷酰胺；,,乙酰苯肼
       摘要：目的筛选适宜的小鼠血虚模型的制造方法。方法采用环磷酰胺250 mg/kg腹腔注射；乙酰苯肼350 mg/kg皮下注射；环磷酰胺120 mg/kg+乙酰苯肼200 mg/kg腹腔注射及环磷酰胺160 mg/kg腹腔注射+乙酰苯肼60 mg/kg皮下注射四种方法制造小鼠血虚模型，取血测定小鼠外周血象、观察小鼠一般情况的变化。结果4种方法可造成不同程度的小鼠血虚状态,应用四物汤治疗后,环磷酰胺160 ml/kg腹腔注射+乙酰苯肼60 mg/kg皮下注射所造模型组小鼠血虚状态有显著改善。结论环磷酰胺160 mg/kg腹腔注射+乙酰苯肼60 mg/kg皮下注射所造模型小鼠最能反映中医血虚证的主要特征。
       关键词：血虚模型；  四物汤；  环磷酰胺；  乙酰苯肼
        血虚证是中医常见证，血虚模型是应用较广的中医动物模型，但目前制造模型的方法不一，作者首先采用环磷酰胺250 mg/kg腹腔注射；乙酰苯肼350 mg/kg皮下注射；环磷酰胺120 mg/kg+乙酰苯肼200 mg/kg腹腔注射三种方法制造小鼠血虚模型，并以四物汤对后两组进行治疗，效果不理想，后采用环磷酰胺160 mg/kg腹腔注射+乙酰苯肼60 mg/kg皮下注射制造小鼠血虚模型，以四物汤进行治疗获得成功。实验中，部分结果与文献不尽相符。现报道如下。
       　　1  仪器和药品
       1.1  动物昆明种小鼠体重18~22 g，雌雄各半，（河北医科大学实验动物中心）。
       1.2  仪器SysmexF 800型全自动血液分析仪（日本）
       1.3  药物及试剂注射用环磷酰胺（CPA上海华联制药有限公司，批号020605）；乙酰苯肼（APH上海三爱思试剂有限公司 ，化学纯，批号20010323）；生理盐水(石家庄四药股份有限公司 批号03021227)。四物汤汤剂于实验前一天配制成高浓度药液, 生药含量为1.25 g/ml，置4℃保存。临用前用蒸馏水稀释2倍得中浓度药液，生药含量为0.625 g/ml；稀释4倍得低浓度药液，生药含量为0.313 g/ml (相当于临床有效量)。
       　2  方法
       2.1  三种造模方法的比较实验动物按体重随机分为正常组、模型Ⅰ组、模型Ⅱ组、模型Ⅲ组，每组各10只。模型Ⅰ组于第4 天腹腔注射CPA 250 mg/kg，第14 天眼底静脉丛采血测血常规。模型Ⅱ组于1，4，7 d皮下注射APH 150，100，100 mg/kg，第9天眼底静脉丛采血，测血常规。模型Ⅲ组于第4，8天腹腔注射CPA 60 mg/kg，第7、10天腹腔注射APH 100 mg/kg，第14天眼底静脉丛采血测血常规。正常组于4，7，8，10 d腹腔注射生理盐水，第14天眼底静脉丛采血测血常规［2~5］。
       2.2  四物汤对乙酰苯肼350 mg/kg及环磷酰胺120 mg/kg+乙酰苯肼200 mg/kg所致血虚小鼠的补血作用实验动物按体重随机分为9组，每组12只。1组为空白对照组，2～5组为CPA+APH（模I）模型组，6～9组为APH（模II)模型组，其中2，6组为模型对照组，其余为高、中、低剂量组，分别给予高、中、低剂量的四物汤，3～5用药组连续灌胃给药13 d，对照组给等容积煮沸消毒的自来水。7～9用药组连续灌胃给药9 d。造模及采血方法同前［1］。 
       2.3  四物汤对环磷酰胺160 mg/kg +乙酰苯肼60 mg/kg所致小鼠血虚状模型的补血作用实验动物按体重随机分为5组，每组12只。1组为空白对照组，2组为模型对照组，3～5组为给药组，分别给予高、中、低剂量的四物汤。各用药组连续灌胃给药13d，对照组给等容积煮沸消毒的自来水。2～5组分别于2，5 d皮下注射APH 20，40 mg/kg，从第5天开始连续四日每日腹腔注射CPA 40 mg/kg，空白对照组小鼠同时注射等容量的生理盐水。末次给药后1.5 h眼底静脉丛采血测血常规。
       2.4  统计处理本实验采用±s表示实验结果。统计分析使用SPSS 11.5软件。
       　　3  结果
       3.1  三种造模方法的比较
       3.1.1  小鼠一般情况
       动物于造模后，开始出现不同程度的懒动、毛色干枯、少食、及尾、耳、眼苍白，模型III组最为严重，第12天开始有动物死亡，共死亡2只，其他组没有动物死亡。
       3.1.2  小鼠外周血象的变化 
       各模型组小鼠的红细胞、血红蛋白、红细胞压积均有不同程度降低。模型Ⅲ组降低最为明显。各组动物的血小板变化不大，只有模型III组血小板上升39%（P<0.05）。除模型Ⅰ组白细胞下降外，其余二组白细胞上升（模型Ⅱ组>模型Ⅲ组）结果见表1。表1  三种造模方法的检验结果(略)
       3.2  四物汤对乙酰苯肼350 mg/kg及环磷酰胺120 mg/kg+乙酰苯肼200 mg/kg所致血虚小鼠的补血作用
       3.2.1  小鼠一般情况 
       CPA+APH模型小鼠于造模后出现懒动、闭目，尾、耳、眼苍白，各组有4～6只动物死亡，经x2检验无显著性差异。APH模型小鼠尾、耳、眼苍白，饮食、活动尚可，给药组与模型组无明显差别。
       3.2.2  四物汤对环磷酰胺160 mg/kg +乙酰苯肼60 mg/kg所致血虚小鼠的补血作用小鼠外周血象的变化  各模型组小鼠的红细胞、血红蛋白、红细胞压积均降低，与正常组相比有显著差异（P<0.01），各用药组与模型组差异不显著（P>0.05）。见表2~3。表2  四物汤对CPA120 mg/kg+APH 200 mg/kg所致血虚小鼠（模Ⅰ）的作用(略)表3  四物汤对APH 350 mg/kg所致血虚小鼠（模Ⅱ)的作用(略)
       3.3  四物汤对环磷酰胺160 mg/kg +乙酰苯肼60 mg/kg所致血虚小鼠的补血作用
       3.3.1  小鼠一般情况模型组小鼠于造模后，出现懒动、毛色干枯、少食、及尾、耳、眼苍白。给药小、中剂量组小鼠行动敏捷，毛色正常，眼、耳、尾呈粉红色，与正常组无明显差别。
       3.3.2  小鼠外周血象的变化模型组小鼠的红细胞、血红蛋白、红细胞压积均降低，与正常组相比有显著差异（P<0.01）。给药中、小剂量组与模型组比较，各指标有显著提高（P<0.01），用药大剂量组各指标数值虽有提高但与模型组差异不显著（P>0.05）。表4  四物汤对CPA 160 mg/kg+APH 60 mg/kg 所致血虚小鼠的补血作用(略)
       　　4  讨论
       有报道采用CPA+APH造成小鼠血虚状态，实验动物白细胞下降，分别应用当归补血汤，四物汤治疗后，白细胞上升，并与模型组有显著差异［1~3］。本次实验中严格按照文献记载方法造模，但白细胞显著增高，经人工计数验证，结果相同。大多数文献报道单用APH造模可致白细胞升高，但也有报道白细胞下降［6］，提示可能与APH有关，（实验所用APH均为化学纯），APH对实验动物白细胞的影响有待进一步研究。    本研究中以CPA 120 mg/kg+APH 200 mg/kg造模时实验动物死亡2只，与文献报道相同。用于研究四物汤的补血作用时，动物死亡近半，与文献报道每组死亡１~３只不符，经重复实验，结果相同，死亡动物解剖可见动物肝、脾、肾肿大，色黑，与文献报道相同［2］。
       有报道指出四物汤可显著改善以APH 350 mg/kg，CPA 120 mg/kg+APH 200 mg/kg所致小鼠的血虚状态，本次实验中采用相同方法，各用药组的各指标数值比模型组有所改善，但无统计学意义。
以CPA 160 mg/kg +APH 60 mg/kg造成小鼠血虚状态时，除白细胞外其他与文献报道相符。
       　参考文献：
       ［1］金若敏，宁  炼，陈长勋，等．血虚模型动物制备及当归补血汤的作用研究［J］.中成药，2001，23 (4)：268.
       ［2］袁久荣，卢兖伟，容  蓉，等．计算机辅助分析四物汤补血作用配伍机理的研究［J］.中国实验方剂学杂志，2000，6 (1)：37.
       ［3］袁久荣，朱建伟，李成韶，等．四物汤对两种血虚动物模型补血作用的比较［J］.山东中医药大学学报，1999，23 (5)：238.
       ［4］马增春，高  月，刘永学，等. 四物汤对环磷酰胺所致血虚证小鼠造血细胞作用的研究［J］.中国实验方剂学杂志，2001，7(5)：13.
       ［5］赍长恩. “血虚”动物模型的创建及实验研究［J］.北京实验动物科学与管理，1994，11(3)：5.
       ［6］陈明岭，万慧颖，姚  干，等. 养血止痒胶囊对小鼠血虚及瘙痒模型的影响［J］.成都中医药大学学报，2001，24(3):27.
       1.石家庄市中医医院  050051； 
       2.河北医科大学药学院，河北 石家庄  050010
       作者简介：焦立红(1968)，女(汉族)，河北栾城人，现任石家庄市中医医院副主任药师，硕士学位，主要从事医院制剂工作.