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       【关键词】  赤芍；,,芍药苷；,,高效液相色谱
       摘要：目的探讨赤芍药苷提取的最佳溶剂。方法分别用甲醇、75%乙醇、重蒸馏水提取赤药中芍药苷，用 YWG-C18（250×4.6 mm）色谱柱，以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（32：68）为流动相测定芍药苷，检测波长为230 nm。结果在所试浓度（0.010~0.200 μg/μl）范围内线性关系良好 r=0.999 8，n=5；以甲醇、75%乙醇、重蒸馏水作溶剂赤芍苷的含量分别为3.01%，3.09%，3.07%。结论结果表明，以甲醇、75%乙醇、重蒸馏水作溶剂提取赤芍中芍药苷的含量无显著性差异（P＞0.05）；使用蒸馏水作溶剂可避免甲醇较强的毒性且廉价；我们认为使用重蒸馏水做溶剂优于乙醇、甲醇。
       关键词：赤芍；  芍药苷；  高效液相色谱
       Effects of Different Solvents on the Extraction of Paeoniflorin from Radix Paeoniae Rubra
       LU Xiaoping
       (Hospital of Henan University of Finance and Economics, Zhengzhou,450002,China)
       AbstractObjectiveTo select the optimal solvent to extract paeoniflorin from Radix Paeoniae Rubra.MethodsPaeoniflorin was extracted from Radix paeoniae Rubra with methanol,75% ethanol and redistilled water ,respectively .Paeoniflorin was separated on a YWG-C18(250 mm×4.6 mm) using methanol:0.05 mol/L KH2PO4(32:68) as a mobile phase and determined at 230 nm.ResultsThe linear curve was ideal within the tested range of 0.010~0.200 μg/μl(r=0.9998,n=5);the average content of paeoniflorin extracted with methanol,75% ethanol and redistilled water was 3.01%,3.09%,3.07%,respectively.ConclusionThere was no significant difference in extraction of paeoniflorin with these three solvents(P＞0.05),whereas methanol is highly toxic,redistilled water is a low-priced and safe solvent,indicating ettraction with redistilled water is better.
       Key wordsRadix Paeonice Rubr;  Paeoniflorin;  HPLC
   
　　赤芍为毛莨科多年生草木植物赤芍或赤芍的干燥根，为中医临床常用药物，始载于《神农本草经》。本品味苦，性微寒，归肝经。芍药苷是赤芍的主要有效成分之一，为保证药效，测定芍药苷的含量具有重要意义。水煎提取是中草药传统提取方法，具有溶剂无毒、经济实用、无污染，且符合大多数人的饮用习惯等优点。乙醇是中草药制剂常用溶剂，而甲醇则是《中国药典》2000年版赤芍药苷含量测定提取用溶剂，笔者选用甲醇、75%乙醇、重蒸馏水作溶剂测定赤芍中芍药苷含量。现将结果报道如下。
       　　1  仪器与试药
       高效液相色谱仪（HP1100，美国 Agilent公司）；微量分析天平（TG-332A，上海天平仪器厂）；超声波清洗器（KQ-500B，昆明市超声仪器有限公司）。
       芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所）。甲醇为色谱纯，乙醇、磷酸二氢钾为分析纯，水为蒸馏水。赤芍购自张家口中医院研究院，并按照《中国药典》2000年版第128页赤芍项下标准进行鉴定。
       　　2  方法与结果
       2.1  色谱条件与系统适应性实验［1］色谱柱为 YWG-C18（250 mm×4.6 mm，10 μm）；流动相为甲醇-磷酸二氢钾（32：68），流速1 ml/min；检测波长230 nm；柱温25℃；进样量10 μl。理论干塔板数6400。
       2.2  对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品10.00 mg(120℃干燥恒重)置10 ml容量瓶中，加流动相溶解稀释至刻度摇匀，作为芍药苷对照品溶液备用。
       2.3   供试品溶液的制备精密称取0.50 g赤芍粉末，分别精密加甲醇、75%乙醇、重蒸馏水各50 ml，称定重量，冷浸4 h，超声30 min放冷，再称定重量，用溶剂补足重量，摇匀，过滤，即得。
       2.4  线性关系考察精密吸取上述芍药苷对照品溶液0.10,0.20,0.50,1.00,2.00 ml置10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别注入含0.01，0.02，0.05，0.10 ,0.20 μg/μl的对照品溶液10 μl进行测定。结果见表1，图1。以峰面积（A）对浓度（C）作回归计算，回归方程为A=3.43×104C-31.8，r=0.9 998。
       2.5  精密度实验精密吸取上述对照品溶液，重复进样5次，芍药苷对照品峰面积的RSD值为0.93%（n=5），表明本法精密度良好。
       2.6  重复性考察取同一批药材样品，按样品制备方法平行制备5份，依法测定，3种溶剂的芍药苷含量RSD值分别为1.00%、0.97%、1.30%，表明重现性良好。
       2.7  回收率实验采用加样回收率法，精密称取已知含量的赤芍粉末，分别定量加入芍药苷对照品，按照供试品溶液的制备方法操作，依上次色谱条件下进行测定甲醇、乙醇、水作溶剂时芍药苷平均回收率分别为99.77%，99.87%，99.16%，RSD分别为3.05%，2.47%，1.67%。结果见表2。表2  芍药苷含量测定的加样回收率（略）     
       2.9  样品测定精密吸取上述供试品溶液，稀释至合适浓度进样10 μl，依上述色谱条件下进行测定，代入回归方程计算所得含量。结果见表3，图2~4。表3  赤芍样品中芍药苷测定结果(略)
       　　3  讨论
       3.1  我们采用 HPLC法，分别用75%乙醇、重蒸馏水提取，与《中国药典》2000年版赤芍项下芍药苷含量测定的甲醇提取法进行对照，结果表明，以甲醇、75%乙醇或重蒸馏水作溶剂提取赤芍中芍药苷的含量无显著性差异（P＞0.05）。
       3.2  用重蒸馏水作溶剂采用 HPLC法直接测定赤芍提取液中芍药苷含量，具有操作简单、柱效高、分离度好、谱图清晰、无干扰、结果准确等优点，因而可作为赤芍内质量控制的方法。
       3.3  在3种溶剂中，相对《中国药典》2000年版中选用甲醇做溶剂，使用75%乙醇、重蒸馏水具有更好的安全性，可以避免甲醇较强的毒性对检测操作人员的伤害，还可以降低对环境的污染；并且重蒸馏水廉价，可以降低检测成本。所以我们认为使用重蒸馏水优于甲醇和乙醇。
       3.4  该方法还可用于复方中芍药苷含量的提取和测定，同时，本研究也为进一步探讨中药药理学和药代动力学提供了实验基础，具有重要意义。
       　　参考文献：
       ［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：125.
       ［2］郭春燕，张万明，王治宝，等.HPLC法测定桃红四物汤中芍药苷和梓醇的含量［J］.中草药，2004，35（7）：756.
       (河南财经学院医院，河南 郑州  45002)
       作者简介：路小平 (1965)，女(汉族)，河南南阳人，现任河南财经学院医院主管中药师，学士学位，主要从事药物的临床应用及研究工作.