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       【关键词】  莪术；,,,小鼠；,,,白介素
       摘要：目的探讨莪术对小鼠免疫功能的影响。方法用100%莪术对水煎液定期给小鼠连续灌胃10 d，1次/d，检测其对小鼠抗体产生能力、淋巴细胞增殖以及白介素2（IL-2）产生的影响。结果莪术对以上免疫学指标均有明显增强作用，与对照组比较有显著性差异（P＜0.01）。结论莪术对小鼠免疫功能具有一定增强作用。
       关键词：莪术；   小鼠；   白介素2；  抗体生成能力；   淋巴细胞
       Research on the Effect of Zedoray on Mouse"s Immune Function
       LI Faqing, DI Dalin, CHEN Lei
       (The Pharmacology Department of Weifang Medical College,Weifang,Shandong 261042,China;The Hospital Affiliated to Weifang Medical College,Weifang,Shandong 261042,China)
       Abstract:ObjectiveThis experiment is to discuss the influence of Zedoray on mouse"s immune function.MethodsWe filled the stomaches of rats with 100% Zedoray water extract continuously once a day for 10 days,then the effects of Zedoray on mice"s antibody production ability,lymphocyte proliferation and IL-2 production ability were tested.ResultsZedoray had obvious reinforcement action on the immunology indexes above.Compared with control group,the difference was significant(P＜0.05).ConclusionZedoray has definite reinforcement action on mouse"s immune function.
       Key words:Zedoray;   Mouse;   IL-2;   Antibody;   Lymphocyte proiferation
   
　　莪术为姜科植物莪术、郁金或广西莪术的根茎，味辛、苦、性温，归肝、脾经，有行气破淤、消积止痛之功效，临床上主要用于治疗积滞胀痛、血淤腹痛、肝郁肿大、血滞经闭、跌打损伤等疾病［1］。本文通过检测3个免疫学指标研究并探讨了其对小鼠免疫功能的影响，旨在为莪术的临床应用提供新的思路及理论依据。
       　1  材料与方法
       1.1  材料
       1.1.1  药品和试剂莪术购于潍坊医学院中药房，100 g加水1 000 ml，温火煎煮2 h，去渣浓缩200 ml（原液）备用；RPM1640为GIBCO分司产品；小牛血清为杭州四季青公司产品；LPS和ConA为美国Sigma公司产品；MTT为Fluca公司产品；二甲基亚砜（DMSO）购自上海生工生物工程分司；电泳仪；眼科手术器械等。
       1.1.2  主要仪器Model450型酶标仪（美国BIORAD分司）；CO2培养箱（丹麦HETO公司）；低速冷冻离心机（美国Beckman公司）；超净工作台（苏州净化设备厂）；100目不锈钢网；50 ml离心管等。
       1.1.3  动物分组与给药健康BALB/C小鼠24只，体质量18~22 g，雌雄各半，由潍坊医学院动物中心提供。将动物随机分为两组，每组12只，Ⅰ组为生理盐水对照组，Ⅱ组为莪术处理组。Ⅰ组和Ⅱ组分别用生理盐水和莪术原液灌胃，1次/d，0.5 ml/（次/只），两组持续灌胃共10 d。
       1.2  检测指标和方法
       1.2.1  定量溶血分光光度测定法（QHS）本法用体外B细胞分泌的抗体裂解红细胞所释放的血红蛋白量（OD值）表示，其结果可反映机体体液免疫功能。实验第5天分别将5%的绵羊红细胞0.2 ml注入各组小鼠腹腔内，第11天眼球放血，颈椎脱臼处死小鼠，常规取脾脏，然后进行脾细胞计数。调细胞浓度至1×109 ml加1 ml，取脾细胞1 ml，1∶10新鲜豚鼠血清（补体）1 ml，0.2%绵羊红细胞（SRBC）1 ml混匀，37℃水浴1 h，1 500 r/min离心10 min，以上清液于全自动酶标仪450 nm波长处测OD值，作为QHS反应值［2］。
       1.2.2  淋巴细胞增殖反应无菌制备小鼠脾细胞悬液，用RPMI1640不完全培养液洗涤3次，每次1 500 r/min离心10 min，然后每含10%牛血清的完全培养液配成1×109 ml，取100 μl加入96孔细胞培养板，加入终浓度为5 μg/ml的ConA，置37℃，5%CO2培养箱中培养48 h后，无菌条件下加入MTT（5 mg/ml）10 μl孔，37℃5%CO2温箱掺入4 h，不再继续培养12 h，最后加入DMSO100 μl，微量振荡器充分震荡后静置20 min，全自动酶标仪用560 nm波长进行比色分析［3］。
       1.2.3  小鼠腹腔巨噬细胞和IL-2的诱生与检测无菌制备小鼠脾细胞悬液：用RPMI1640不完全培养液洗涤2次，每次1 000 r/min离心10 min，然后用含10%牛血清的完全培养液配成1×109 ml，置细胞培养瓶中，37℃，5%CO2培养箱中培养42 h，离心收集上清液，置-20℃冰箱保存备用。制备活化的脾淋巴细胞：无菌取正常小鼠脾脏，制成1×109 ml细胞悬液，加入ConA使其终浓度5 mg/L，置37℃，5%CO2培养箱中培养48 h，收集细胞，离心洗涤2次，用完全RPMI1640配成悬液作为检测ⅠL2的反应细胞。IL-2活性检测：取-20℃冰箱保存的IL-2上清液，作1/2和1/4的稀释，在96孔平底培养板中，每孔加入IL-2上清液或不同稀释度的IL-2上清液100 μl以及上述反应细胞100 μl；阴性对照只加100 μlRPMI1640培养液，各设4个复孔，于37℃，5%CO2培养箱中培养48 h，每孔加MTT（5 mg/ml）10 μl，继续培养4 h，吸弃100 μl上清液，补加入DMSO100 μl，微量振荡器充分振荡后静置20 min，全自动酶标仪用560 nm波长进行比色分析。
       1.3  统计学处理实验数据以均数±标准差（±s）表示，应用SPSS10.0统计学软件进行方差分析和t检验。
       　　2  结果
       莪术对小鼠淋巴细胞增殖、抗体形成及IL-2产生均有促进作用，与对照组比较有显著性差异（P＜0.01）。具体结果见表1。
       　3  讨论
       莪术为姜科植物莪术、郁金或广西莪术的根茎。味辛、苦、性温、归肝、脾经，有行气破瘀、消积止痛之功效， 为临床常用药［1］。现代研究证实，莪术的化学成分主要含挥发油，其成分为莪术呋喃烯铜、龙脑、莪术醇等，其药理作用为抗肿瘤，增加动脉血流量以及抗早孕等［4，5］。临床上主要用于治疗积滞胀痛、血瘀腹痛、肝脾肿大、血滞经闭、跌打损伤等疾病。国内有学者应用莪术治疗小儿上呼道感染取得较好的治疗效果［6］。
       表1  2组小鼠淋巴细胞增殖、抗体形成及IL2产生的变化（略）
       本实验证实，莪术可明显提高小鼠的免疫功能。与生理盐水对照组相比，莪术处理组小鼠抗体产生能力、ConA激发的T淋巴细胞增殖反应以及IL-2的产生能力均有明显提高（P＜0.01）。现代免疫学理论认为T、B淋巴细胞为机体免疫的主要承担细胞，分别介导细胞免疫体液免疫，而且T细胞是机体免疫系统赖以实现免疫调节的重要细胞，在机体免疫应答调节中起核心作用，T细胞功能障碍会直接影响机体的细胞免疫应答和体液免疫应答。莪术可促进IL-2的分泌，而IL-2是淋巴细胞主要的自分泌生长因子可作用于T、B淋巴细胞使其大量增殖，从而提高机体免疫力。本实验结果提示如机体免疫功能低于者或肿瘤患者应用莪术可望提高其机体免疫功能，为临床应用莪术提供新的思路及科学依据。
       参考文献：
       ［1］  王浴生,邓文龙,薛春生.中药药理与应用,第2版［M］.北京:人民卫生出版社,1998:985.
       ［2］  徐叔云.药理学实验方法,第2版［M］.北京:人民卫生出版社,1992:1230.
       ［3］  高  梅,贾  镭,陈  芬.虎尼对小鼠淋巴细胞增殖和ⅠL2产生的影响［J］.中国实验临床免疫学杂志,1999,11(3):39.
       ［4］  宋步昌,鞠建峰.莪术油的药理作用及临床应用［J］.山东医药工业,2003,22(4):32.
       ［5］  丘明明.莪术药理研究进展［J］.广西医药通讯,1998,1:34.
       ［6］  容翠莲.莪术油与利巴伟林治疗小儿上呼吸道感染对比研究［J］.时珍国医国药,1999,10(7):534.
       (山东潍坊医学院，山东 潍坊  261042；  山东潍坊医学院附属医院，山东 潍坊  261042)