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       【关键词】  黄芪甲苷；,,,高效液相色谱；,,,蒸发光散射检测器；,,,复方肺心安片
       摘要：目的建立复方肺心安片中黄芪甲苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱蒸发光散射检测（HPLCELSD）法测定复方肺心安片中黄芪甲苷的含量，色谱柱为KromasilC18柱（4.6 mm×200 mm,5μm），流动相：乙腈水（35∶65）。结果平均加样回收率为99.57%。回归方程为Y=9.587 +2.196 X，r=0.999 。结论HPLCELSD法具有准确度高，简便快捷，干扰少，重现性好的优点，可用于复方肺心安片的质量控制。
       关键词：黄芪甲苷；   高效液相色谱；   蒸发光散射检测器；   复方肺心安片
       Determination of Astragalosidte Ⅳ in Feixinan Tablets by HPLCELSD
       XU Ying， LIU Shumin*， BAI Qingyun，YAO Zhuxing
       (Graduate Student of Grade 2003,Heilongjiang University of Chinese Medicine,Haerbin  150040,China;Academy of TCM,Heilongjiang vniversity of TCM,Haerbin 150040,China)
       Abstract:ObjectiveTo establish the determination of astragaloside Ⅳ in Feixinan Tablets.MethodsHPLCELSD method was developed for the determination of astragaloside Ⅳ in Feixinan Tablets on Kromasil C18(4.6 mm×200 mm,5μm) with acetonitrileH2O (35∶65).ResultsThe average recovery was 99.57% and the linear equation was Y=9.587 +2.196 X.The correlation coefficient was 0.999 .ConclusionThe method is simple,rapid,and accurate.
       Key words:Astragaloside Ⅳ;   HPLC;   ELSD;   Feixinan table;   Quantitative analysis
   
　　复方肺心安片由黄芪、葶苈子等组成的治疗慢性肺心病的中药复方制剂，具有补气活血，止咳平喘的功效，方中黄芪为君药，黄芪为非洋地黄类正性肌力药物。黄芪甲苷明显提高气虚型心衰病人的心排出量，心脏指数，改善心衰患者心室构型和射血能力。因此，本制剂以黄芪甲苷作为含量测定的物质，用紫外分光光度法检测困难，本实验采用高效液相色法配蒸发光散射检测器进行检测。现将结果报道如下。
       　　1  仪器及试药
       1.1  仪器Water 600型液相色谱仪，Alterch2000型蒸发光散射检测器，Millennium 32色谱工作站数据处理系统，均为美国产。BS210S型分析天平塞多利期天平有限公司。色谱柱：大连产KromasilC18柱（4.6 mm×200 mm,5μm），填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶。
       1.2  试剂乙腈，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
       1.3  药品复方肺心安片（由黑龙江中医药大学中医药研究院提供），黄芪甲苷系中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：0781200109。
       　　2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱为C18柱，流动相为乙腈水（35∶65）；流速1.0 ml/min，柱温40℃，高纯氮气体流速2.5 L/min，漂移管温度105℃。
       2.2  供试品溶液的制备取复方肺心安片约2.5 g，研细，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40 ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，回流6 h，提取液回收甲醇并浓缩至干，残渣加水10 ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，20 ml/次。合并正丁醇提取液，用氨试液提取3次，20 ml/次。弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至10 ml容量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，即得［1］。0.45 μm微孔滤膜滤过，待进样。
       2.3  空白样品的测定取阴性样品（不含黄芪）约2.5 g，精密称定，按“供试品溶液的制备”项下方法依法制备，即得空白样品液。进样10 μl，按上述色谱条件测定。结果见图1。空白样品在黄芪甲苷峰相应位置无干扰。
       图1  空白样品HPLC图(略)
       图2  黄芪甲苷对照品HPLC图(略)
       图3  复方肺心安片HPLC图(略)
       2.4  标准曲线的绘制取黄芪甲苷对照品2.8 mg，精密称定，置5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制得0.560 0 mg・ml-1的黄芪甲苷标准储备液。精密量取6.0，8.0，10.0，12.0，15.0 μl，注入液相色谱仪，测定。以峰面积的对数值为纵标（Y=1nA）以进样量的对数值为横坐标（X=1n m），绘制标准曲线，得线性回归方程为Y=9.587 +2.196 X，相关系数r=0.999 。线性范围为3.36~8.4 μg。
       2.5  精密度实验精密吸取含量测定项下的对照品溶液，连续进样5针，10 μl/次，RSD为0.7%。表明本法精密度良好。
       2.6  重复性实验取同一批号复方肺心安片（200050101）5份各2.5 g，精密称定，按“供试品溶液的制备”项下方法依法制备，依法测定，重复性结果表明黄芪甲苷的平均含量为2.27 mg/g，RSD为2%。
       2.7  稳定性实验取批号为20050101的供试品溶液，分别于0，4，8，12，24 h进样10 μl，共测定5次，测定结果表明供试品溶液中的黄芪甲苷在24 h内稳定，RSD为0.4%。
       2.8  加样回收率精密称取批号为20050101的复方肺心安片，5份，每份2.5 g，精密称定，每份分别加入黄芪对照品1.35 mg，依法测定，并计算黄芪甲苷的平均回收率为99.57%，RSD为2.6%。结果表明，本法的加样回收率良好。见表1。
       2.9  制剂的含量测定分别取不同批号的复方肺心安片2.5 g，精密称定，按“供试品溶液的制备”项下方法依法制备，按上述色谱条件法测定。结果见表2。
       表1  加样回收率实验结果(略)
       表2  制剂中黄芪甲苷含量测定结果(略)
       　　3  讨论
       考察了甲醇水和乙腈水两种流动相，甲醇水体系拖尾，乙腈水体系能较好的实现基线的分离。黄芪甲苷属四环三萜类皂苷，紫外末端吸收。紫外检测灵敏度低，干扰因素较多。ELSD检测器是近几年应用在色谱方面的新型检测器，特别是对无紫外吸收或紫外末端吸收物质具有较高的检测灵敏度，不受外界环境干扰，试剂在检测器中全部蒸发，不干扰检测，灵敏度稳定性及重复性能够符合含量测定的要求，是一种检测黄芪甲苷成分的有效方法［2，3］。
       　　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社,2000:249.
       ［2］  张莉,狄秋庆,赵晓莉,等.高效液相色谱法测定通塞脉片中黄芪甲苷的含量［J］.南京中医药大学学报,2003,19(2):94.
       ［3］  周春玲,鲁静.高效液相色谱蒸发光散射检测测定黄芪中黄芪甲苷的含量［J］.中国中药杂志,2000,25(3):166.
       基金项目：哈尔滨市科委攻关计划成本资助项目(No.2005AA3CS187)
       (黑龙江中医药大学2003级硕士研究生，黑龙江 哈尔滨  150040  黑龙江中医药大学中医药研究院，黑龙江 哈尔滨  150040)