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       【关键词】  珍珠
        摘要：目的：探讨珍珠梅提取物对D半乳糖致衰老大鼠的保护作用。方法：60只Wistar大鼠随机分正常组、模型组(Sc D半乳糖48 mg/(kg・d)、人参皂苷组(100 mg/kg，ig,D半乳糖48 mg/(kg・d)、珍珠梅大、中、小剂量组(200，150，100 mg/kg.ig,ScD半乳糖48 mg/(kg・d)，连续40 d。用比色分析法测定大鼠大脑皮质超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、单胺氧化酶(monoamine oxidase, MAO)的活性及丙二醛(malondialdehyde, MDA)的含量，同步观察电子显微镜下的组织学变化。结果：珍珠梅提取物可提高D半乳糖所致大鼠脑组织SOD活性、降低MDA含量，抑制MAO活性；电子显微镜观察到珍珠梅提取物可以减轻D半乳糖导致的线粒体等超微结构的改变。结论：珍珠梅提取物对D半乳糖致衰老大鼠具有保护作用。
        关键词：珍珠梅；亚急性；衰老；大鼠
        Anti-senile Effect of Sorbaria sorbifolia Extract on Dgalgctose Induced Subacute Senile in Rats
        GUO Xiaohong, ZHANG Xuewu*
        (College of Medicine, Yanbian University, Yanji, Jilin, 133000, China)
        Abstract:Objective:To study the anti-senile effect of Sorbaria sorbifolia extract on Dgalgctose induced subacute senile in rats.Methods:60 Wistar rats were randomly into normal group, model group (sc Dgalactose, 48 mg/(kg・d),Sorbaria sorbifolia groups (0.10,0.15,0.20 g/kg ig.sc Dgalactose 48 mg/kg・d). After 40 days, the activities of SOD, MAO and the content MDA were measured with colorimetric the activities of SOD, MAO and the content MDA were measured with colorimetric method, and the histological changes were synchronously observed by electronic microscope.Results:Sorbaria sorbifolia extract significantly increased the activity of SOD in brain tissue, decreased the content MDA, inhibit the MAO activity. It was observed under microscope that Sorbaria sorbifolia could retrieve the degeneration of mitochondrion.Conclusion:Sorbaria sorbifolia extract have anti-senile effect on Dgalgctose induced subacute senile in rats.
        Key words:Sorbaria sorbifolia;Subacute;Senile;Rats
        珍珠梅Sorbaria sorbifolia属蔷薇科植物，又称“山高粱”“八木条”，广泛分布于云南、贵州、四川、湖北、甘肃、宁夏及东北，有活血化瘀、消肿止痛、治骨折及跌打损伤的作用。笔者曾报道珍珠梅具有抗肿瘤、清除氧自由基、抑制脂质过氧化等药理作用［1，2］。
本实验观察珍珠梅对D半乳糖致大鼠衰老模型，通过生化指标检测及电子显微镜的观察，阐明珍珠梅对大脑衰老的保护作用，为进一步开发应用珍珠梅提供一些实验依据。
           1材料与方法
        1.1药物珍珠梅茎、叶、花采集于吉林省延吉市市郊。醋酸乙酯提取物：醋酸乙酯分3次浸泡珍珠梅，温度为40℃，12 h/次，合并3次滤液，用旋转蒸发器减压浓缩，获珍珠梅醋酸乙酯提取物浸膏(1 g珍珠梅有效成分相当于33.3 g生药)。
        1.2试剂D半乳糖系上海试剂二厂产品(批号为980218)，人参总皂苷系吉林省白山市靖宇县黄封参药业公司产品，SOD、MAO、MDA试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
        1.3仪器JEM-1200透射电镜，UV-2501PC型紫外分光光度计，722型分光光度计，旋转蒸发仪，电热恒温水浴箱。
        1.4动物Wistar大鼠，雌雄各半，体重为180～210 g，由延边大学医学院动物科提供。
        1.5方法
        1.5.1衰老大鼠模型的制备及药物投入60只Wistar大鼠随机分为正常组，模型组，珍珠梅大、中、小剂量组，人参皂苷组。各组动物在实验前禁食12 h进行实验，模型组皮下注射D半乳糖48 mg/(kg・d)，同时生理盐水灌胃10 mg/(kg・d)，珍珠梅大、中、小剂量组每d皮下注射D半乳糖并分别灌胃珍珠梅提取物200，150，100 mg/kg，人参皂苷组每d皮下注射D半乳糖同时灌胃人参总皂苷100 mg/kg，连续40 d。第41天处死大鼠，迅速取出大脑，取左侧中央回皮质1×1×1 mm3小块作电镜观察。
        1.5.2观察指标
        1.5.2.1超微结构观察左侧小块中央回皮质，用0.1 mol/L磷酸缓冲液冲洗3次，经0.03 g/L戊二醛固定2 h，0.01 g/L锇酸后固定1 h，梯度丙酮脱水，Epon-812环氧树脂包埋，做超薄切片，铀铅双重染色后，在JEM-1200透射电镜下观察并拍片。
        1.5.2.2生化指标检测剩余脑组织除去丘脑、小脑和延髓，以pH 7.4的磷酸缓冲液冰浴中制成匀浆液后，2 000 r/min离心10 min，取上清液，用比色分析法检测SOD，MAO的活性及MDA的含量。
        1.6统计学处理应用SPSS-10.0统计软件进行方差分析。
           2结果
        2.1超微结构观察正常组细胞器形态基本正常，模型组线粒体出现肿胀变性和空泡样变，且核膜不规则；珍珠梅组线粒体轻度肿胀，核膜较规则。
        2.2生化指标检测
        2.2.1SOD活性结果见表1。珍珠梅提取物对D半乳糖导致的大鼠脑组织的SOD活性的降低有明显的升高作用(P＜0.05)，而对MAO活性、MDA含量的升高有明显的降低作用(P＜0.05)。
        表1珍珠梅提取物对D半乳糖致衰老大鼠脑组织SOD，MAO活性及MDA含量的影响(±s)（略）
           3讨论
        衰老是生命过程中正常而又复杂的生物过程，有关衰老的学说很多，如代谢废物学说、免疫功能衰退学说、基因程序学说、自由基学说等，每种学说都有一定的实验依据，而自由基学说与其它学说有直接或间接的关系，受到众多实验的支持［3］。自由基学说认为引起人体衰老的主要原因是人体细胞代谢过程中不断产生的自由基，因其具有高度的化学活性，并能与活细胞的大部分发生反应，损伤DNA分子，造成键的断裂，使细胞死亡或发生突变。SOD作为体内重要的抗氧化酶，它能促使超氧化物阴离子自由基变为过氧化氢和氧离子，从而减少脂质过氧化反应，使机体细胞和组织免受损害。MDA是过氧化脂质的分解产物之一，它能使膜交联和聚集，并最终导致DNA的交联，引起突变，因此通过测定MDA可以间接反应体内自由基产生和老化程度。MAO在正常肝、肾、大脑、脑干等区活性较强，其定位于线粒体外膜及线粒体嵴，可催化单胺氧化脱氨基，参与神经元去甲肾上腺素、5-羟色胺等递质的分解［4］。
        既往研究表明，D半乳糖可致SOD活性降低，MAO活性增高等，从而引起大脑功能衰退［5］。本实验研究结果与其相符。本实验结果表明模型组与正常组、珍珠梅组、人参皂苷组锥体细胞SOD活性、MDA含量及MAO活性均有显著差异，说明珍珠梅能使亚急性衰老大鼠的脑组织的SOD活性增强，降低MDA的含量，抑制MAO活性。本实验超微结构观察表明，模型组锥体细胞内溶酶体、脂褐素大小和形态不规则，线粒体出现肿胀变性和空泡样变，且核膜不规则；而珍珠梅组锥体细胞内线粒体轻度肿胀，核膜较规则。
总之，珍珠梅作为一种抗衰老的药物，具有广泛的开发前景，对其确切的作用机理今后应从其有效成分中进一步研究。
           参考文献：
        ［1］张学武，张玉梅，关丽萍，等.珍珠梅活性成分的提取分离及体内抑瘤作用的研究［J］.中药材，2004，27(1)：3638.
        ［2］Zhang XW,Zhang XB,Quan JS,et al.Inhibitory effect of Sorbaria sorbifolia on DEN-induced precancerous hepatic foci and its antioxidative activies in rats［J］.China Jcancer Prev Treat,2003,10(11):11371140.
        ［3］郑荣梁.衰老的自由基学说［J］.实用老年医学，1992，6(1)：3133.
        ［4］Giardino R,Giavaresi G, Fini M, et al.The role of different chemical modifications of superoxide dismutase in preventing a prolonged muscular ischemia/reperfusion injury［J］.Arif Cells Blood Substit Immobil Biotechnol, 2002,30(1)：189198.
        (延边大学医学院，吉林 延吉133000)
       
反相高效液相色谱法测定玉米须中尿囊素的含量
        李钦1，2，　田智勇1，　贾天柱2
        摘要：目的：采用反相高效液相色谱对玉米须中尿囊素的含量进行测定。方法：选用DiamonsilTM(钻石) C18色谱柱(5 μm，150 mm×4.6 mm)， 氯仿甲醇水 (0.012∶0.5∶100) 为流动相，紫外检测波长为224 nm条件下对尿囊素进行含量测定。结果：尿囊素的含量在0.108～0.972 μg范围内，进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系，r= 0.999 9，平均回收率97.5%，RSD=1.62%。结论：所建立的方法能准确、快速地进行定量检测，可作为玉米须中尿囊素的质量控制方法。
        关键词：尿囊素；反相高效液相色谱法；玉米须
        Determination of Allantoin in Corn Silk by RP-HPLC
        LI Qin1，2, TIAN ZHiyong1, JIA Tianzhu2
        (Pharmacy College of Henan University， Kaifeng，475001, China; 2. Liaoning College of Traditional Chinese Medicine， Shenyang，110032, China)
        Abstract:Objective:To establish an RP-HPLC method for the allantoin in corn silk， which determined the quantity of allantoin.Methods:The chromatographic conditions included DiamonsilTM C18 column (150 mm×4.6 mm) and the mobile phase consisted of chloroformmethanolwater (0.012∶0.5∶100). The detection wavelength was at 224 nm.Results:allantoin showed a good linear relationship at the range of 0.108～0.972 μg，r=0.999 9. The average recovery rate was 97.5% and RSD was 1.62%.Conclusion:The methods are accurate and quick， and can be used for the quality control of allantoin in Corn silk.
        Key words:Allantoin;RP-HPLC;Corn silk
        玉米须最早药用记载见于《滇南本草》。为禾本科植物玉蜀黍Zea mays L. 的干燥花柱和柱头。能够利尿消肿，降血压。临床用于肾炎水肿，小便不利，湿热黄疸，高血压症。 为中国药典1977年版收载品种［1］。玉米须含有皂苷、多糖和尿囊素等成分［2，3］，尿囊素能修复上皮组织，促进皮肤溃疡和伤口愈合，具有生肌作用，可用于胃及十二指肠溃疡［4］。文献报道尿囊素的含量测定多采用HPLC法和薄层扫描法［5～7］，玉米须中尿囊素的含量测定未见报道。为此，本文采用HPLC法测定了玉米须中尿囊素的含量，从而为玉米须的质量研究提供了依据。
        1仪器、试药与样品
        1.1仪器LC2010A液相色谱仪(日本岛津)，ClassVP工作站，UV200Ⅱ紫外可见波长检测器，P200Ⅱ变压恒流泵，自动进样器。 BP211D型电子天平(十万分之一，德国Sartorius公司)； BUG 2512超声波清洗器 (上海必能信超声波有限公司)；试剂：甲醇为色谱纯，水为高纯水，氯仿为分析纯，其余所用试剂均为分析纯。
        1.2试药尿囊素对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号：885200001，供含量测定用)。
        1.3样品分别采自山东临沐县，河南省西平县、新密市、中牟县、巩义市，经河南大学生药学教研室张保国教授鉴定为禾本科植物玉蜀黍Zea mays L. 的干燥花柱和柱头。
        2方法
        2.1色谱条件色谱柱：Diamonsil C18 色谱柱(5 μm，150 mm×4.6 mm) C18，柱温：40℃。流动相为氯仿甲醇水 (0.012∶0.5∶100)，流量:0.5 ml/min，紫外检测波长为224 nm测定时间：20 min。
        2.2对照品溶液的制备精密称取在110℃ 干燥至恒重的尿囊素酸对照品约5.40 mg，置50 ml量瓶中，用高纯水溶解并定容至50 ml量瓶中，即得。（每毫升中含尿囊素0.108 mg）。
        2.3供试品溶液的制备取玉米须粉末（过一号筛）约2.5 g［同时另取本品粗粉按照中国药典2000年版Ⅰ部附录IX H第一法测定水分］，精密称定，加130　ml甲醇，索氏提取器提取6 h，滤液回收溶剂至近干，用高纯水溶解并定容至50 ml量瓶中，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，滤液置棕色瓶中，即得。
        3 结果
        3.1色谱分离结果在上述色谱条件下尿囊素峰的保留时间约为5.1 min，与其它成分分离良好见图1，以尿囊素峰计算色谱柱的理论板数为2 443。
        图1玉米须HPLC图谱（略）
        3.2标准曲线的制备分别精密吸取对照品溶液1，3，5，9，11 μl溶液，注入液相色谱仪中，测定色谱峰面积，以尿囊素的进样量(X)为横坐标，色谱峰面积积分值 (Y)为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为:
        Y=1 002 973.61X+38.25，r=0.999 9
        结果表明：尿囊素对照品进样量在0.108～0.972 μg 范围内线性关系良好。
        3.3精密度实验取玉米须供试品溶液5 μl，重复进样5次，测定尿囊素峰面积积分值，结果表明精密度良好，RSD为1.27%（n=5）。
        3.4稳定性实验取玉米须（山东临沐）供试品溶液，分别于0，2，4，6，8 h各进样5 μl，测定尿囊素峰面积积分值。结果表明：样品在8 h内性质稳定，RSD为1.51%。
        3.5重复性实验 取玉米须（山东临沐）供试品溶液，分别按样品［含量测定］项下方法操作，分别进样5 μl，测定尿囊素含量，结果平均含量2.256 8 mg/g，RSD为1.66%。
        3.6尿囊素回收率实验分别称取玉米须样品约2.5 g（山东临沐），5份，精密称定，各加对照品溶液( 0.108 mg/ml) 1 ml，分别按“2.3 供试品溶液的制备”方法操作，测定，测定结果见表1。
        表1尿囊素回收率实验样品含量m/mg（略）
        测定结果表明本方法回收率在96.5%～100.2%之间，RSD为1.30%。
        3.7不同产地玉米须中尿囊素的含量测定 分别取不同产地的玉米须粗粉约2.5 g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备供试液。分别精密吸取对照品溶液5 μl，供试品溶液5 μl，注入液相色谱仪，依法测定峰面积，计算不同产地玉米须中尿囊素的含量，结果见表2。
        表2不同产地玉米须中尿囊素的含量mg・g（略）
        4结论
        4.1提取条件的选择
        4.1.1提取溶剂选择曾选用70%乙醇连续回流提取、甲醇连续回流提取，结果采用甲醇连续回流提取尿囊素含量较高，故选择甲醇连续回流提取。
        4.1.2提取时间的考察分别取玉米须（山东临沐）粗粉约2.5 g，4份，精密称定，分别加130 ml甲醇，索氏提取器提取4，6，8，10 h，回收溶剂至干，用高纯水定容至50 ml，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，测定，计算尿囊素含量。结果表明：提取6 h的尿囊素含量最高，因此，选择提取时间为6 h。
        4.2应用RP-HPLC测定玉米须中的有尿囊素的含量，分离良好，快速、准确、重现性好。可作为玉米须中尿囊素的质量控制方法。
        参考文献：
        ［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：289289.
        ［2］纪丽莲.玉米须的食疗价值与开发［J］.中国野生植物资源，1997，16(3)：2425.
        ［3］任顺成，丁霄霖.玉米须中总黄酮的提取及树脂精制［J］.中草药，2003, 34(12):10921094.
        ［4］章茹，万义玲，张定亨.尿囊素的性质与应用［J］.南昌大学学报(工科版)，1997，19(2):8187.
        ［5］白雁，朱凤云，王东，等.HPLC法测定不同产地山药中尿囊素的含量［J］.中草药，2003，34(2):179180.
        ［6］张留记，屠万倩，都恒青.　薄层扫描法测定怀山药降糖肠胃舒散中尿囊素的含量［J］.中国中药杂志，2001，26(8):567568.
        ［7］宋金春，杨芰，罗顺德，等.反相高效液相色谱法测定山药中尿囊素的含量［J］.中国医院药学杂志，2001，21(2)：417418.
        (1.河南大学药学院，河南 开封475001；2辽宁中医学院，辽宁 沈阳110032)