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       【摘要】 
       目的测定新疆石榴皮中没食子酸的含量。方法用高效液相色谱法，Techsphere ODS （250 mm×4.6 mm）色谱柱，流动相为甲醇-0.05%磷酸（5∶95），检测波长为273 nm 。结果没食子酸在9～90 μg/ml范围内呈线性关系，r=0.999 7;平均加样回收率为100.2%， RSD=1.4% (n=5)。结论该方法精密可靠，可作为石榴皮药材质量控制的方法。
       【关键词】  石榴皮 没食子酸 高效液相色谱法
       Determination of Gallic Acid in Punica  granatum L. Extraction by HPLC
       PALIDA Abulizi,ZHANG Lijing,RENA Kasimu，SHENG Ping,WANG Xiaowen,ZHANG Xiaoying
       1.College of Pharmacy, Xinjiang Medical University, Urumqi 830054,China;
       2.Centre of Testing, Xinjiang University,  Urumqi 830054,China;
       3. College of Traditional Chinese Medicine, Urumqi 830054,China
       Abstract：ObjectiveTo determine the content of gallic acid in Xinjiang Punica  granatum L.by HPLC.MethodsTechsphere ODS （250 mm×4.6 mm） was used .The mobile phase was methanol-0.05%H3PO4(5∶95).The detection wavelength was at 273nm.ResultsThe linear range of gallic acid was 9～90 μg/ml, r=0.999 7.The average recovery was 100.1%, RSD=1.4% (n=5). ConclusionThis method is precise and credible, it can apply to the quality control of Punica  granatum L.
       Key words:Punica granatium L.;  Gallic acid;  HPLC
        石榴皮为石榴科植物石榴punica grantum L.的果皮，石榴皮性酸，味涩，具有涩肠、止血、驱虫等功效。石榴皮中富含鞣质，现代研究表明石榴皮鞣质具有杀精［1］、抗菌［2］、抗病毒［3］作用，具有进一步的开发应用前景。没食子酸为石榴皮中的有效成分之一，是可水解鞣质的组成部分，可导致肿瘤细胞的生长抑制或凋亡［4］，同时还具有较强的抗氧化作用［5］。本文建立高效液相色谱法测定产于新疆南疆的石榴皮中没食子酸的含量。现报道如下。
       b    美国惠普(HP)1100高效液相色谱系统,包括G1354Ａ四元泵,G1328A手动进样器,G1314A可编程紫外检测器,G1317Ａ二维液相工作站。  超声波清洗器 ，没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所）， 甲醇（优级醇） ，磷酸（分析醇）， 蒸馏水（多纯水）。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件
       色谱柱为Techsphere ODS(250 mm×4.6 mm),流动相为甲醇-0.05%磷酸(5∶95)， 流速：0.7 ml/min ，检测波长为273 nm，柱温：室温。理论塔板数按没食子酸计算应不少于2000。
       2.2  供试品溶液的制备 
       取石榴皮适量，研细，取0.5 g，精密称定，加甲醇30 ml置50 ml量瓶中，超声提取1 h，冷却后加甲醇稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。
       2.3  对照品溶液的制备 
       精密称取没食子酸对照品4.5 mg,置25 ml量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取0.5 ml置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀,作为对照品贮备溶液。
       2.4  方法与专属性 
       分别精密吸取对照品溶液，供试品溶液与空白溶液各10 μl，注入色谱仪，在273 nm处检测，结果表明没食子酸对照品溶液和供试品溶液在该波长处均有最大吸收峰，而空白溶液在该波长处未见明显的色谱峰出现，表明本测定无明显干扰。
       2.5  线性关系考察分别精密吸取对照品溶液1，2，4，6，10 μl，分别注入液相色谱仪，每个量进样3次，测定没食子酸的峰面积积分值，以进样量μg/ml为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，结果进样量在9.0～90.0 μg/ml范围内线性关系良好。对所得数据进行回归分析得回归方程：Y=2 940.086X+10.05，r=0.999 7。  
       2.6  精密度实验 
       分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各6 μl，分别注入液相色谱仪，连续进样5次，测定峰面积积分值，计算精密度，结果，对照品5次测定的RSD为0.49%（n=5），供试品5次测定的RSD为0.32%，表明精密度良好。
       2.7  稳定性实验  
       精密吸取供试品溶液20 μl，每隔2 h，进样测定1次，共进样测定5次，其峰面积积分值在测定10 h内基本不变，供试品测定的RSD为1.07%（n=5），表明稳定性良好。
       2.8  回收率实验 
       取已知含量的同一供试品6份，精密加入没食子酸对照品溶液，按“样品测定”项下方法制备供试品溶液并测定，计算平均回收率为100.2%，RSD=1.4%(n=6)。结果见表1。表1  没食子酸回收率实验结果（略）
       2.9  样品测定  
       取5份样品各0.5 g，精密称定 ，加甲醇30 ml置50 ml量瓶中，超声提取1 h，冷却后加甲醇稀释到刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续液作为供试品溶液，在上述色谱条件下，精密吸取20 μl 进样，测定，计算供试品溶液中没食子酸含量。结果见表2。表2  没食子酸含量测定结果（略）
       3  讨论
        没食子酸含量测定的方法有很多,已有文献报道用紫外分光光度法测定石榴皮中的没食子酸含量,但本实验采用了HPLC测定产于新疆南疆地区的石榴皮中没食子酸含量,通过方法学的考察,精密度高,重现性好,可作为控制石榴皮药材质量的一种有效手段。
        曾尝试采用甲醇:0.2%磷酸=15∶85，甲醇∶1%冰醋酸=17∶83，乙腈∶0.05%磷酸=5∶95等溶剂系统作流动相,发现其效果均不理想,经摸索筛选采用本实验所用色谱条件为较好, 没食子酸与其他组分色谱峰得到较好分离。
        本文方法快速简便、稳定、可靠、专属性强，可作为石榴皮药材质量控制的方法。
       【参考文献】
         　　［1］孙华义，周江桥，詹柄炎. 新型阴道避孕药石榴皮的药理实验研究［J］.生殖与避孕,1994,14(5)：350.
       
       ［2］张 杰, 周江桥，詹柄炎. 中药石榴皮对淋球菌感染的体内外抑制作用［J］.中国皮肤性病学杂志,1996,10(2):75.
       
       ［3］张 杰, 詹柄炎,姚学军. 石榴皮体外抗生殖器疱疹病毒作用的实验研究［J］.中国中医药科技,1995,2(1):28.
       
       ［4］Yoshika k, kataoka T, Hayashi T,et al. Induction of apoptosis by gallic acid in human stomach cancer KATOⅢ and colon adenocacinoma COLO205 cell lines［J］.Oncel Rep, 2000,7(6)：1221.
       
       ［5］Sakagami H,Satoh K. Prooxidant action of two antioxidant:ascorbic acid and gallic acid［J］.Anticancer Res, 1997,17(1A)：221.