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       【关键词】  银黄清口服液；,,总绿原酸；,,二阶导数光谱法
       摘要：目的建立二阶导数光谱法测定银黄清口服液中总绿原酸含量的方法。方法用二阶导数光谱法直接测定银黄清口服液中总绿原酸含量，于357.9 nm波长处测定振幅D值。结果绿原酸在4.67~23.35 μg・ml1范围呈良好线性关系；其回归方程D=0.749 5×104C-0.1×10-4（r=0.997 2）；平均回收率97.88%，RSD=2.43%(n=5)。结论该方法操作简单、准确，可用于测定银黄清口服液中总绿原酸含量。
       关键词：银黄清口服液；  总绿原酸；  二阶导数光谱法
       Determination of Total Chlorogenic Acid in Yinhuangqing Oral Liquid by Second Order Derivative Spectrophotometry
       ZHOU Bolin, FENG Guodong
       (Beihai People"s Hospital, Beihai, Guangxi 536000, China)
       Abstract：ObjectiveTo determine the content of total chlorogenic acid in Yinhuangqing oral liquid.MethodsSecond order derivative spectrophotometry was used.The peak amplitude was determined when the wavelength was at 357.9 nm.ResultsThe chlorogenic acid showed a good linear relationship within a range of 4.67~23.35 μg・ml1,the regression equation was D=0.749 5×104C-0.1×104(r=0.9972);the average recovery was 102.23% and RSD was 2.7%(n=5).ConclusionThe method is simple and accurate, and can be used for determination of total chlorogenic acid in Yinhuangqing Oral Liquid.
       Key words：Yinhuangqing Oral Liquid;  Total chlorogenic acid;  Second order derivative spectrophotometry
   
　　银黄清口服液是我院在传统验方基础上研制的新制剂，处方由黄芩、金银花、连翘、板蓝根、甘草等中药材组成，主治外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛等疾病。金银花中富含绿原酸及其异构体（异绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸等），它们的理化性质与药理作用相似［1］。本品工艺提取方法能够将该类有机酸有效地提取出来，因此对银黄清口服液中总绿原酸进行质量控制研究是非常必要的。张蕙等［2］已证实金银花水提液中除了总绿原酸外，其余成分在352 nm以上紫外吸收几乎没有。由于本品为中药复方制剂，不能直接用普通紫外分光光度法测定总绿原酸的含量。笔者经过实验后发现，采用二阶导数紫外分光光度法可不经分离直接测定银黄清口服液中总绿原酸（以绿原酸计）含量。
       　　1  仪器与试药
       仪器 UV1201型双光束紫外可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司），BP211D型电子天平（德国 SARTORIUS）；绿原酸对照品（中国药品生物制品检定提供）；银黄清口服液、阴性对照液（缺金银花）及蒸馏水均由本院制剂室提供。
       　　2  方法与结果
       2.1  测定条件及吸收光谱的选择
       2.1.1  紫外扫描光谱及波长的选择分别称取绿原酸对照品、银黄清口服液及阴性对照液（缺金银花）、银黄清口服液适量，用蒸馏水溶解，稀释成适宜浓度，制成绿原酸对照液（缺金银花）、银黄清口服液适量，用蒸馏水溶解，稀释成适宜浓度，制成绿原酸对照液为（b液）、银黄清对照液（a液）、银黄清阴性对照液（缺金银花）（c液）在200~400 nm范围内扫描。扫描条件：光度模式为 Abs，扫描模式为单一，扫描速度为快速，光谱带宽为2 nm，采样间隔为0.1 nm。结果见图1。由图1可见，c液对a液的干扰很大，无法直接通过紫外分光光度法测定总绿原酸的含量。
       2.1.2  二阶导数光谱取上述A，B，C溶液，在200~400 nm波长范围内进行扫描，完毕后直接进行数学变换，分别得到3种试液的二阶导数光谱。扫描条件同“2.1.1”，微分波长差为8；标尺因子为1。结果见图2。
       图1  紫外扫描光谱图（略）
       图2  二阶导数光谱图（略）
       由图2可见银黄清阴性对照液（缺金银花）在350.0~380.5 nm波长之间的振幅与零线基本重合，而银黄清口服液（a液）在二阶导数图谱357.9 nm波长处有最大振幅，与绿原酸对照液（b液）相一致。因此，可选择357.9 nm为测定波长，利用银黄清口服液在357.9 nm处的（峰值-零）振幅值    D对总绿原酸进行定量测定（以绿原酸计）。
       2.2  精密称取于105℃干燥至恒重的绿原酸对照品23.35 mg于100 ml容量瓶中，加入蒸馏水溶解，并稀释至刻度，摇匀，使之成为绿原酸标准储备液。分别精密吸取该储备液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 ml分别置于100 ml容量瓶中，加入蒸馏水定容，制成浓度（C）为4.67~23.35 μg/ml的系列工作液，以蒸馏水为空白，分别在357.9 nm波长处测定其二阶导数光谱的峰值-零振幅值 D，以浓度C对D进行线性回归，得回归方程：D=0.7495×104C-0.1×104(r=0.9972)。表明绿原酸在4.67~23.35 μg/ml浓度范围内，其二阶导数振幅值D与浓度C呈良好线性关系。
       2.3  回收率实验精密吸取按“2.7样品含量测定”项下稀释的银黄清阴性对照液（缺金银花）1 ml，分别精密加入浓度为23.35 μg/ml绿原酸对照液0.5，1，2，4，15 ml，混匀，同标准曲线项下测定D值，以D值代入回归方程计算含量。结果见表1。
       表1  回收率实验结果（略）     
       2.4  精密度实验取绿原酸对照品液（9.34 μg/ml）5份，在波长357 nm处测绿原酸二阶导数光谱的峰值-零振幅值D值，结果振幅D值无明显变化。
       2.5  稳定性实验取供试品测定项下的溶液分别于配制后室温放置0，2，4，6，12，24 h后测定振幅D 值，结果振幅D值明显无变化。
       2.6  重现性实验取同一批号样品5份，制成供试品溶液，按样品测定项下测定振幅D值，计算含量，结果振幅D值明显无变化。
       2.7  样品含量测定精密量取银黄清口服液5 ml置100 ml量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，再精密量取稀释液1 ml量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀。同标准曲线项下测定D值，以D值代入回归方程计算含量。结果见表2。
       表2  样品含量测定结果（略）
       　　3  讨论
       金银花是银黄清口服液的君药，测定总绿原酸的含量可以有效地控制本制剂的质量，张蕙［2］等人已证实金银花水提液中除了总绿原酸外，其余成分在352 nm以上紫外吸收很少或没有。根据这一发现，利用二阶导数紫外光谱法可以有效地消除背景吸收的干扰，测定制剂中总绿原酸的含量。平均回收率为102.23%,RSD为2.7%。24 h稳定性实验证明测定结果不受时间影响等说明该分析方法准确、灵敏、重现性好，且操作简便、快速、实用，易于普及。采用本法测定制剂中总绿原酸含量的方法国内外未见文献报道，故为含有金银花的中药制剂中总绿原酸的分析测定提供了一个可借鉴的方法。
       　　参考文献：
       ［1］  陈发奎.常用中草药有效成分含量测定［M］.北京：人民卫生出版社，1997：421.
       ［2］  张  蕙，徐向阳，陈  希，等.脉络宁氯化钠注射液中总绿原酸的含量测定［J］.江苏药学与临床研究，2005，13（3）：33.
       (广西北海市人民医院  536000)