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       【关键词】  加替沙星；,,高效液相色谱法；,,血药浓度
       摘要：目的用高效液相色谱法测定血浆中加替沙星的血药浓度。方法选用lichrosperC18（150 mm×4.6 mm，5 μm）为分析柱，0.01 mol・L-1磷酸二氢钾缓冲液乙腈（18∶5）为流动相，流速1.0 ml・min-1，检测波长为292 nm，以盐酸环丙沙星为内标。结果加替沙星线性范围为0.025~10.000 μg・ml-1，最低检测浓度为0.025 μg・ml-1(S/N＞3)。样品平均回收率＞90.0%，日内、日间精密度的RSD＜10.0%。结论 该方法简便、快捷可用于加替沙星的血药浓度测定。
       关键词：加替沙星；  高效液相色谱法；  血药浓度
       加替沙星是第4代氟喹诺酮类抗生素，广泛应用于革兰阳性菌、革兰阴性菌、厌氧菌、衣原体、支原体等病原体引起的感染。本实验建立用高效液相色谱（HPLC）法测定加替沙星血药浓度方法，为临床合理用药提供参考。
       　　1  仪器与试药
       1.1  仪器岛津LC10AT高效液相色谱仪，L-7420UV-Vis紫外检测器，C1316A柱温箱，N2000数据工作站，XW80A漩涡混合器（上海医科大学仪器厂），高速离心机（美国雅培公司）。
       1.2  试药对照品：加替沙星（中国药品生物制品检定所，含量99.86%）；内标：盐酸环丙沙星（中国药品生物制品检定所，含环丙沙星84.2%）；甲醇为色谱纯，水为纯化水，磷酸二氢钾、磷酸、高氯酸为分析纯。
       　　2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱：lichrosperC18(150 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相：0.01 mol・L1磷酸二氢钾缓冲液乙腈（18∶5）（pH值3.05），流速：1.0 ml・min-1柱温：25℃，检测波长为292 nm，灵敏度0.005AUFS，进样量20 μl。
       2.2  溶液的配制精密称取加替沙星20 mg，于100 ml容量瓶内，加乙腈溶解并配成200 μg・ml-1标准贮备液，临用时用乙腈稀释成所需浓度的对照品溶液。精密称取盐酸环丙沙星10 mg，置于100 ml容量瓶内用甲醇溶解，并加至刻度，配成100 μg・ml-1的内标溶液。
       2.3  血浆样品预处理取血浆样品0.5 ml置于1.5 ml具塞离心管内，加入内标溶液（100 μg・ml-1）50μl及10%高氯酸溶液200 μl，蜗旋，3 000 r・min-1离心5 min，精密吸取上清液200 μl进样。加替沙星和内标盐酸环丙沙星保留时间分别为5.3和3.7，分离度R＞1.5，分离效果良好［1］。
       2.4  标准曲线的制备取加替沙星标准储备液0.3 ml共7份，分别用空白血浆稀释成10.000，5.000，1.000，0.500，0.100，0.050，0.025 μg・ml-1，分别加入内标溶液50 μl，按“2.3”项下操作，进样20 μl。以加替沙星峰面积As与内标面积Ai的比值f对浓度C作标准曲线，结果表明，加替沙星在0.025~10.000 μg・ml-1浓度范围内线性关系良好，回归方程为f=8.403 2C+1.923×10-3(r=0.999 7)。
       2.5  精密度实验按“2.4”项下分别测定加替沙星5.00，0.50，0.05 μg・ml1的血浆样品。按“2.3”项下操作，计算对照品峰面积As与内标面积Ai的比值代入前述标准曲线方程计算浓度。计算日间和日内相对标准差。结果见表1。
       表1  精密度实验结果（略）
       2.6  绝对回收率实验按“2.4”项下配制5.00，0.50，0.05 μg・ml-1的血浆样品，按“2.3”项下处理后进样；另取流动相配制相应浓度的加替沙星溶液直接进同量的样，以此为标准，将两组峰面积进行比较计算加替沙星在血浆中的绝对回收率。结果0.05，0.50，5.00 μg・ml-1的血浆样品回收率分别为（91.97±4.20）%，（95.48±3.65）%，（92.93±3.17）%,RSD分别为4.56%，3.80%，3.40%。
       2.7  相对回收率实验配制含加替沙星0.05，0.50，5.00 μg・ml-1的血浆样品回收率分别为（91.86±4.42）%，（95.48±3.65）%，（101.63±4.17）%，RSD分别为4.81%，3.82%，4.10%。
       　　3  讨论
       本实验建立的操作方法简易、快捷，对血样的预处理采用强酸高氯酸沉淀血浆蛋白，直接进样。色谱峰分离度好，精密度与回收率符合要求，可用于人体药动学、生物等效性分析以及日常的治疗浓度监测［2］。
       参考文献：
       ［1］  李发美.分析化学，第五版［M］.北京：人民卫生出版社，2003：358.
       ［2］  陈  刚.治疗药物检测（理论与实践）［M］.北京：人民军医出版社，1988：133.
       (湖北省阳新县人民医院  435200)