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       【关键词】  三叶香茶菜；,,齐墩果酸；,,高效液相色谱法
       摘要：目的建立高效液相色谱法测定三叶香茶菜中齐墩果酸的含量。方法色谱柱ZORBAX XDBC18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相∶甲醇∶水（90∶10），检测波长215 nm，流速1.0 ml/min，柱温：30℃。结果齐墩果酸线性范围为0.462～4.62 μg（r＝0.999 5），加样回收率为100.25%，RSD为1.35%。结论 该方法简便、准确、快速，可用于三叶香茶菜中齐墩果酸的质量控制。
       关键词：三叶香茶菜；  齐墩果酸；  高效液相色谱法
       Determination of Oleanolic Acid in Elsholtzia lychnitis Levl. by HPLC
       LUO Zhaohui
       （Guilin Medical College, Guilin 541004,China）
       Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of Oleanolic acid in Elsholtzia lychnitis Levl..MethodsColumn: ZORBAX XDBC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）;　mobile phase: methanol: water(90∶10)；detection wavelength was at 215 nm; temperature was at 30℃; flow rate was 1.0 ml/min. ResultsThe calibration curve showed a linearity with the range of 0.462～4.62 μg.The average recovery was 100.25% and RSD was 1.35%.ConclusionThe method is convenient, fast and reliable and suitable for the quality control of Elsholtzia lychnitis Levl. .
       Key words： Elsholtzia lychnitis Levl.;  Oleanolic acid;   HPLC
   
　　三叶香茶菜为唇形科香茶菜属植物Elsholtzia lychnitis Levl.的全草，又名三姐妹、虫牙药、牛尾草；分布于广西、广东、贵州、云南等地，其味苦微辛，性凉，《中药大辞典》中记载其有祛风散寒、化痰理湿之功效，主治感冒咳嗽、黄疸、风湿肿痛等。王雪芬等［1～3］均从三叶香茶菜中分离得到了齐墩果酸。现代药理学研究证明三叶香茶菜具有抗病毒、抗菌和免疫调节［4］、抗肿瘤［5］、治疗急、慢性肝炎 ［6～8］等作用，同时吴练中［9］曾报道其抗肝炎的活性成分为齐墩果酸。目前还未见有采用高效液相色谱法对该药材中齐墩果酸进行含量检测的方法报道。因此，采用高效液相色谱法对三叶香茶菜中具有药理活性成分的齐墩果酸进行含量测定具有十分重要的意义。
       　　1  器材
　　
　　药材购自桂林药材批发站，经本院天然药化及生药教研室鉴定为唇形科香茶菜属植物Elsholtzia lychnitis Levl.的全草。Agilent1100 分析型高效液相色谱仪，包括二极管阵列多波长检测器DAD、四元梯度泵、在线真空脱气机、自动进样器、HP化学工作站（Agilent公司，美国）；R114型旋转蒸发仪（BUCHI公司，瑞士）齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号110709200304)。甲醇分别为色谱纯与分析纯，水为自制超纯水等。
       　　2  方法与结果
       2.1  色谱条件　色谱柱为ZORBAX XDBC18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为甲醇水（90∶10）；检测波长215 nm；流速1 ml/min；柱温30℃。
       2.2  对照品溶液的配制　精密称取在110℃干燥至恒重的齐墩果酸对照品适量，置于25 ml容量瓶中，加入流动相溶液15  ml，超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液备用；取贮备液适量，加流动相溶液稀释成每毫升含齐墩果酸约0.462 mg的溶液，备用。
       2.3  供试品溶液的配制　精密称取样品1.000 0 g，粉碎，过40目筛，置于50 ml锥形瓶中，加入甲醇20 ml，回流提取2次（2 h×1 h），过滤，滤液定容到50 ml容量瓶中，取续滤液，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，备用。
       2.4  线性关系考察　分别精密吸取齐墩果酸对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 μl，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品进样量（μg）为横坐标C，峰面积值为纵坐标A，进行线性回归，得回归方程为：A=1512.3C－2.16，r=0.999 5。结果表明，齐墩果酸在0.462~4.62 μg范围内，峰面积值与进样量之间呈良好的线性关系。
       2.5  精密度实验精密吸取齐墩果酸对照品溶液5 μl，重复进样5次，测定峰面积，计算齐墩果酸峰面积值RSD为0.29%，表明精密度良好。
       2.6  重现性实验取同一样品5份，按供试品液方法制备，在上述色谱条件下分别进样10 μl，测定峰面积，计算齐墩果酸峰面积值RSD为1.35%，表明该方法的重现性较好。结果见表1。
       表1  重复性实验结果（略）
       2.7  稳定性实验　将样品溶液室温放置1，2，3，4，8 h后分别进样测定，计算齐墩果酸峰面积RSD为1.56%，结果显示样品溶液在8 h内稳定。
       2.8  加样回收率实验　取已知含量的样品(三叶香茶菜)约0.5 g共5份，分别加入齐墩果酸对照品溶液5 ml，按供试品溶液的制备方法制备，进样10 μl，测定峰面积，由标准曲线计算齐墩果酸含量，平均回收率为100.25%，RSD为1.35%。
       2.9  样品测定　取供试样品按2.3项下操作取10 μl滤液进样，测定峰面积，采用标准曲线法计算齐墩果酸的含量。结果见表2。
       表2   药材中齐墩果酸的含量测定结果（略）   
       　　3  讨论
       齐墩果酸为三叶香茶菜中的活性成分，有关其采用高效液相色谱法对该药材中齐墩果酸进行含量检测方法迄今未见报道。本文采用HPLC法测定了三叶香茶菜中齐墩果酸的含量，结果表明该方法稳定性与重现性均较好。该方法简便，准确，快速，可用于三叶香茶菜中齐墩果酸的质量控制。由本实验结果可知，三叶香茶菜中齐墩果酸的含量较低。
       　　参考文献：
       ［1］  王雪芬,韦荣芳,卢文杰,等. 细叶香茶菜化学成分的研究［J］.中草药,1984,15(3)：6.
       ［2］  王雪芬,韦荣芳,卢文杰,等. 细叶香茶菜二萜成分的研究［J］.植物学报,1985,27：520.
       ［3］  王智民,冯  浩,梁晓天,等. 虫牙药的化学成分研究［J］.药学学报,1996,31(10)：764.
       ［4］  叶琦莉. 复方三姐妹片对免疫功能－流感病毒及细菌的影响［J］.广西中医药,1992,15(4)：39.
       ［5］  谢沛珊,李爱媛,周 芳,等. 中草药抗肿瘤筛选的实验研究［J］.时珍国药研究,1995,7(1)：19.
       ［6］  李淑平,周培郁. 复方三姐妹治疗慢性乙型肝炎及乙肝病毒携带者病原免疫学指标初步分析［J］. 广西中医药,1990,13(5)：1.
       ［7］  李淑平,周培郁,王  勤. 复方三姐妹片治疗慢性乙型肝炎及其病毒携带者的临床疗效及实验研究［J］.中国中西医结合杂志,1994,14(增刊)：34.
       ［8］  李淑平,黎  强. 复方三叶香茶菜片治疗慢性乙型肝炎病毒性肝炎肝功能异常疗效观察［J］.广西中医药,2003,26(4)：12.
       ［9］  吴练中.细叶香茶菜的抗肝炎成分－齐墩果酸［J］.广西中医药,1986,9(3)：42.
       (桂林医学院药学院，广西　桂林  541004)