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       【关键词】  牡丹；,,丹皮酚；,,含量；,,分离提取
       摘要：对牡丹中丹皮酚含量的差异性、提取和检测方法的最新研究进展进行了综述。牡丹的根皮是一种传统中药材, 其中含有丹皮酚等多种有效成分。丹皮酚是起镇痛、消炎、抗菌等作用的主要活性成分, 随着中药现代化的进展，对中药有效成分的分离提取、含量测定已成为新的热点课题。
       关键词：牡丹；  丹皮酚；  含量；  分离提取
       A Study on the Extraction, Isolation and the Analysis of Content of Paenol in Root Bark of Penoy
       GONG Ming gui, ZHANG Qiaoming, QIN Cuili, YUAN Xiaoqiu
       (College of Food and Biologic Engineering, Henan University of Science and Tenchology, Luoyang 471003, China; College of Resources and Environment, Northwest A & F University,  Yangling 712100, China; Luoyang Administration, Yellowriver Wetlands of National Nature Reserve,  Luoyang 471000, China)
       Abstract：Root bark of penoy which is a kind of Chinese traditional medicine consists of many active components, such as paeonal and paeonal, which can be used as the medicine of easing pain, diminishing inflammation,antibiotic and so on. With the development of traditional Chinese medicine, the extraction ,isolation and content analyse of active compounds become hot topics. The extraction, isolation and the analysis of the content of paenol are also reviewed in this paper.
       Key words：Peony ;  Paeonal;   Content;  Extraction and isolation
   
　　丹皮酚（Paeonal）又名牡丹酚、芍药酚，化学名为“2羟基4甲氧基苯乙酮”，为无色针状结晶（乙醇），分子量166，分子式C9H10O3 ，溶于乙醇、乙醚、丙酮、氯仿、苯和二硫化碳。丹皮酚熔点为50℃，稍微溶于水，能随水蒸气挥发，依据这一特性可以应用蒸馏-煎煮法对其提取。 丹皮酚具有镇痛、止血、消炎、抗菌、降压等多种药理作用，目前丹皮酚注射剂是临床主要剂型，在痛症和皮肤科临床得到广泛应用。同时丹皮酚可通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞分化和凋亡影响肿瘤细胞基因表达等机制对肿瘤细胞产生杀伤、诱导分化和凋亡、抑制侵袭和转移等作用［1］，其药用前景相当广泛。目前市场上对丹皮酚的需求量较大，除用于医药制剂原料外，现还广泛应用于牙膏及护发、护肤、美容等日化产品的原材料［2］。丹皮酚是丹皮（牡丹干燥根皮）活性成分之一，牡丹在全国各地均有大范围栽培，从丹皮中提取丹皮酚，经济效益相当可观，因此牡丹中丹皮酚的含量及提取分离研究引起了人们的极大关注。
       　1  牡丹中丹皮酚含量
       丹皮酚为毛茛科植物牡丹（Paeonia suffruticosa Andr）的主要活性成分，牡丹叶、茎、茎皮、根、根皮中均含有。牡丹中丹皮酚含量差异受产地、采收季节、采后加工方法、生长条件等因素影响很大，因此我们有必要对牡丹中丹皮酚含量作一研究。
       1.1   产地对丹皮酚含量的影响  《神农本草经》载曰：“土地所出, 真伪陈新, 并各有法。”说明了产地的重要性。我国牡丹分布广，资源丰富，其活性成分丹皮酚的含量差异很大。为了探讨和建立不同产地丹皮药材的质量控制方法和指标，范明等［3］18个省区不同产地的丹皮中丹皮酚含量测定结果显示，其中以云南产（5.94%）牡丹皮含量为最高, 宁夏产（3.83%）次之，而河南、福建产（1.58%）最低，可见产地对药材质量影响较大。胡世林等［4］对7个产地的丹皮酚含量进行研究，发现安徽铜陵的“凤丹皮”含量最高，各产地平均含量为1.08%～2.51%。杨洁［5］测定的丹皮酚平均含量在上述范围内，含量最高的为四川产丹皮，其次为安徽产丹皮，福建产丹皮含量最低。通过研究认为，丹皮质量好坏不应该忽略产地对其有效成分的影响。
       1.2   采收期对丹皮酚含量的影响中草药采收期直接影响药材品质、产量及资源的合理保护与开发利用。白志川等［6］研究发现，丹皮酚的含量随生长年份增加而增加，5年生丹皮中丹皮酚的含量明显高于3年生与4年生；牡丹根皮在年生长期中，丹皮酚的含量符合季节性代谢规律，10月份含量基本达到最高点，这与李海燕等［7］的研究结果相符，丹皮酚含量的高峰期与2005版《中国药典》中记载的丹皮的采收期一致［8］。
       1.3   种植海拔丹皮酚含量的影响中药材中有效成分含量总受到生长条件的影响和制约，这些生长条件包括海拔、光照、温度等。范俊安等［9］研究发现同一品种的牡丹随着海拔高度的变化，丹皮酚含量呈现明显的抛物线型规律性变化，以海拔600 m为最高（含量3%），高于或低于600 m ，含量均下降；但各海拔样品丹皮酚含量均在2%以上，说明海拔400 ～800 m均适宜种植，海拔为600 m的地区在我国分布较为广泛，牡丹在我国适生区也较广。
       1.4   不同部位中丹皮酚含量李海燕等［10］采用反相高效液相法测定牡丹各部位中丹皮酚的含量，结果发现同一采收期不同部位中丹皮酚的含量以根皮的含量较高，根皮（2.868%）>根（1.402%）>茎皮（1.026%）＞叶（0.837%）>茎（0.556%），这与2005年版《中国药典》规定药用部位基本一致；同时还发现丹皮酚含量：细根皮（3.118%）＞细根（2.873%）>根皮（2.868％），《中国药典》规定牡丹皮采收时除去细根，从主要成分的相对含量来看是否合理，值得研究。
       1.5   产地加工方法对丹皮酚含量的影响牡丹皮产地加工方法有3种：熏丹皮、刮丹皮、原丹皮，吕文海等［11］通过实验结果表明，不同产地加工方法对丹皮酚含量影响不同，原丹皮＞刮丹皮＞熏丹皮。通过分析认为外表皮是丹皮酚含量最高的部位，木质部含量低于皮部；刮丹皮前后经两次硫磺熏制，仅仅改善了商品外观，既人为的增加了药材中硫化物的残留量，又降低了丹皮酚的含量。原丹皮中丹皮酚含量比刮丹皮高，表明国外客商使用原丹皮有一定科学依据，建议国内也改变传统用法，使用原丹皮，不仅有效成分含量更高，且生产和加工成本也会降低［12］。
       　　2  丹皮酚提取分离方法
       2.1  醇提法以无水乙醇为溶剂，40℃温度下回流提取，即可将丹皮酚提取出来。醇提法提取工艺简单，有效成分提取多，似应为牡丹皮提取的最佳方法，但问题在于醇提液的后处理困难，因丹皮酚熔点低、挥发性强，实际生产中难于仅除去乙醇而不损失较多的丹皮酚，且提取过程中受热温度越高、时间越长,丹皮酚的含量和收率就越低［13］。
       2.2   蒸馏－煎煮法蒸馏-煎煮法是指先蒸馏提取挥发性成分，药渣再加水提取的方法，适用于含挥发性成分药材的提取。丹皮酚随蒸气馏出后，在冷藏状态下大量析出，滤过干燥即可用于成型，保存方便且转移率较高［14］，但其提取率远低于醇提法［3］；提取过程中选择适宜的pH范围使丹皮酚溶解，并确保溶液贮存过程中的稳定已成为丹皮酚提取液体制备过程中的关键，在蒸馏过程中可以加盐、先加碱后加酸等提高提取率，研究认为加盐蒸馏法是丹皮酚提取的最优方法；为了提高其在水中溶解度，通常采用有机溶剂、助溶剂、表面活性剂等途径来解决问题，有文献报道将其制成β-环糊精包合物来提高其稳定性和生物利用度，能降低其挥发性，增加其溶解度［15］。
       2.3  CO2 超临界流体萃取法　应用超临界萃取法是当前中草药有效成分提取的一个发展方向，具有提取温度低、时间短等优点。在15 MPa ，52 ℃的提取条件下，2.5 h后其丹皮酚提取液为淡红棕色液体，冷藏后自动分层，上层为淡黄色液体，下层为淡红棕色固体［16］。CO2 超临界流体萃取法提取的丹皮酚量少，远低于文献报道值，该方法能萃取出大量脂溶性成分。因CO2 是非极性物质而酚苷类成分极性较大，故未能将该类萃取出来，这也是导致总提取物收率较低的一个原因［17］。为提高丹皮酚及酚苷类成分的收率，并保持本方法的提取特点，可考虑进一步优化提取条件并加入夹带剂，这方面的工作还有待深入研究。
       　3  丹皮酚含量测定方法
       目前对丹皮酚的检测方法有高效液相色谱法、气相色谱法、分光光度法、薄层扫描法和溴量法、库仑滴定法等。
       3.1    高效液相色谱法杨洁等［5］采用HPLC法，结果显示丹皮酚在0.01～0.55 μg/ml范围内线性关系良好(r = 0.999 6) ，平均回收率99.87% ，RSD 为1.46%。该法简便、快速，重现性好，精度高，适用于牡丹皮中丹皮酚的定量分析。实验中试用不同体系和比例的流动相，如甲醇－磷酸，甲醇醋酸水，结果以甲醇醋酸水溶液为流动相时丹皮酚的分离效果最好。李海燕等［7］以甲醇0. 5%磷酸(60∶40)为流动相，检测波长274 nm下应用反相高效液相色谱法对丹皮酚含量进行测定，其检测效果也较为理想。
       3.2   薄层扫描法白少岩等［18］应用反射法锯齿扫描法测定牡丹皮中丹皮酚含量，以环己烷:氯仿:无水乙醇(7∶3∶1)为展开溶剂，将待测液在0.13 mm硅胶G板展开，波长：λs = 274 nm，λR：365 nm；下进行扫描。各项实验结果均较为理想，证明薄层扫描法操作简便、省样、省时，不失为测定丹皮酚含量的较理想方法，尤其是在中药复方制剂中，此方法对丹皮酚的测定可较好地排除其他成分的干扰［5］。
       3.3  分光光度法分光光度法按具体不同原理又可分为紫外分光光度法、双波长示差光谱法、一阶导数分光光度法、正交函数分光光度法等，应用各种分光光度法测定丹皮酚含量，其技术较为成熟。王剑波等［19］人使用双波长示差光谱法测定丹皮酚含量，用双波长差示光谱法消除干扰组分的影响来测定丹皮酚含量，方法快速简便，结果准确，但丹皮酚在碱性溶液中稳定性较差，应在加碱后30 min 内完成测定，以免造成误差；应用一阶导数光谱法测定丹皮酚含量，首先绘制吸收光谱及一阶导数光谱图，从一阶导数光谱可知，选择263 nm 和267 nm 两波长以峰零法定量效果较好，此法可不经分离对丹皮酚进行含量测定，结果准确；王焕云等［21］应用正交函数分光光度法测定丹皮酚含量，首先得吸收光谱，根据该光谱的信息，选用二次正交多项式系数P 2 作为定量参数，按公式计算P 2 值，结果显示P 2值与浓度C呈良好线性关系，平均回收率为99. 0%，供试品溶液在24 h 内无明显变化。
       3.4    胶束电动毛细管色谱法赵新峰等［22］选取芦丁为内标, 用胶束电动毛细管色谱法分离测定中药材牡丹皮及中成药六味地黄丸中丹皮酚的含量。以丹皮酚对照品峰面积与内标的比值对其质量浓度作图。结果显示胶束电动毛细管色谱法用于测定牡丹皮及六味地黄丸中丹皮酚的含量是可行的。
       3.5  其他方法除以上方法外，用气相色谱法也可测定丹皮酚的含量，但测得含量较紫外分光光度法略低，分析原因是因为样品在用紫外法测定时其他共存物存在干扰［23］；用气相色谱法测定时，样品经色谱分离后，其所测组分更真实、准确，故百分含量会略低于紫外分光光度法。近年来，使用电化学方法溴量法、库仑滴定法［24］等对丹皮酚含量进行测定， 但这些方法已不多用。
       　4  结束语
       市场上牡丹中药材丹皮酚含量差异很大，可能是由于不同的产地气候、地理环境、药材种植、药材采后加工方法及用药部位；目前对丹皮酚的定量分析方法的研究已相当深入和广泛，每种方法各有其优点及适用范围，工作中可结合自己的实际情况参考选用；随着科技的进步与发展，丹皮等中药材不再只用于中药制剂配伍及成药用料，而是采用现代生化技术，提取有效成分，使用牡丹皮提取丹皮酚过程没有考虑对其它成分，生物资源未充分利用，造成了较大的资源浪费，因此对牡丹中药材提取也要兼顾其它有效成分提取率。
       参考文献：
       ［1］  孙国平，王  华，沈玉先，等. 丹皮酚诱导K562细胞凋亡的研究［J］.中国药理学通报, 2004, 20 (5) ：550.
       ［2］  唐海燕，杨  石，王见宾. 丹皮酚制备工艺、剂型改革及临床应用概述［J］.  江苏中医药， 2004 , 25 (2) :58.
       ［3］  范  明，邱  燕，范  榕. 不同产地牡丹皮中丹皮酚含量测定［J］.福建中医药,1999 ,30 (4)：41.
       ［4］  胡世林，池  群，赵中振.中国道地药材［M］.哈尔滨：黑龙江科学技术出版社, 198：541.
       ［5］  杨  洁，贾国强，刘 萍，等. HPLC法测定不同产地牡丹皮中丹皮酚的含量［J］.科学技术与工程,2006,6(3)：299.
       ［6］  白志川.不同采收期川丹皮多组分化学成分变化规律研究［J］.中国农业科学,2006,39(5)：997.
       ［7］  李海燕，陈小坚. 牡丹皮中丹皮酚含量动态变化研究［J］.时珍国医国药, 2000, 11(3)：197.
       ［8］  国家药典委员会，中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005.
       ［9］  范俊安，于  超，王续生，等. 重庆垫江牡丹皮丹皮酚含量动态变化研究［J］.中国药房，2006,17(5)：394.
       ［10］  李海燕，陈小坚. 牡丹中不同部位丹皮酚含量测定［J］.时珍国医国药,2000,11(8):618.
       ［11］  吕文海，张  欣，宋  磊，等. 山东荷泽牡丹皮产地加工品的定量分析［J］.中成药,2005，25(10):1162.
       ［12］  范俊安，于  超，王继生，等.重庆垫江牡丹皮丹皮酚含量动态研究［J］.西部药学,2006, 3(1):43.
       ［13］  尹永宇.丹皮酚提取工艺的研究［J］.中成药,1995 ,17 (9) :2.
       ［14］  杨炳火，高运军，肖红兵. 不同提取方法对徐长卿中丹皮酚含量的影响［J］.时珍国医国药,1998 :9 (5) :417.
       ［15］  陈巧谋，陈  平，王  炜，等. 复方延胡索片中丹皮酚β-环糊精包合物的制备研究［J］. 湖南中医药导报, 2003 , 9 (8) :53.
       ［16］  王立红，周丽莉， 雷  雪，等.超临界CO2 萃取徐长卿中丹皮酚的工艺［J］.沈阳药科大学学报, 2006 , 23 (1) :53.
       ［17］  冯武文，杨  村，于宏奇. 分子蒸馏与日用化工［J］.日用化学工业,2002 , 32 (5) ：74.
       ［18］  白少岩，唐文照.薄层扫描法测定牡丹皮中丹皮酚含量［J］.济宁医学院学报，2005,25(10):1162.
       ［19］  王剑波， 陈  波，王晓娟. 双波长差示光谱法测定甲蓉片中丹皮酚含量［J］.中药新药与临床药理,1995,6 (1)：4 .
       ［20］  王焕云，邬彩云. 一阶导数光谱法测定杞菊地黄丸中丹皮酚含量［J］.内蒙古科技与经济, 1999, 2: 58.
       ［21］  王焕云，温爱萍，乔俊缠，等.正交函数分光光度法测定六味地黄丸中丹皮酚的含量［J］.中国药业, 1999, 8 (12) : 31.
       ［22］  赵新峰，孙毓庆. 胶束电动毛细管色谱法测定牡丹皮及六味地黄丸中丹皮酚的含量［J］. 沈阳药科大学学报,2002, 19 (1) : 35.
       ［23］  汪宝琪，庞志功，张  清.用化学发光法测定丹皮酚的研究［J］.中国药学杂志, 1994, 29 (1) : 35.
       ［24］  郭晓玲，孟  青，冯毅凡.牡丹皮超临界CO2 萃取物质量标准研究［J］.广东药学院学报,19 (3):204.
       (河南科技大学食品与生物工程学院，河南 洛阳  471003；西北农林科技大学资环学院，陕西 杨凌  712100；河南黄河湿地国家级自然保护区洛阳管理处，河南 洛阳  471000)