渗漉法提取枳壳的工艺研究
作者:胡钢银,史馨霞,吴光翠
《时珍国医国药》 2007年 第3期
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【关键词】 正交实验;,,渗漉法;,,提取;,,枳壳;,,柚皮苷
摘要:目的考查不同条件下用渗漉法提取枳壳浸膏的质量。方法用正交实验设计,以浸泡时间、渗漉速度、收集渗漉液体积和乙醇浓度为因素,以高效液相色谱法测定浸膏中柚皮苷含量为指标优化提取工艺。结果枳壳的最佳提取工艺为70%乙醇浸泡24 h渗漉速度为5 ml・kg-1・min-1,收集8倍的渗漉液。结论 用渗漉法提取枳壳中柚皮苷工艺稳定可行。
关键词:正交实验; 渗漉法; 提取; 枳壳; 柚皮苷
枳壳为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种的干燥未成熟果实,具有理气宽中、行滞消胀功效[1]。枳壳中主要含有黄酮类、挥发油及少量生物碱3大类成分,共同构成了枳壳的化学特征。其中黄酮类成分主要有柚皮苷、橙皮苷、酸橙素、苦橙素等[2]。为了考查不同条件下渗漉法提取枳壳的浸膏的质量,本文以柚皮苷为指标对提取工艺进行优化。
1 器材
1.1 仪器SSI SERIES IV pump高效液相色谱仪(美国科学系统公司);Mettler AE240型电子分析天平(上海海鸿仪器有限公司);SB3200超声波振荡仪(上海必能信超声有限公司)。
1.2 材料与试剂柚皮苷对照品购于中国生物制品厂。乙腈为色谱纯,冰醋酸和甲醇为分析纯,乙醇为药用乙醇。枳壳来自本院中药房,为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.的干燥未成熟果实。并经麸皮制,过筛后粉成粗粉备用。
2 方法与结果
2.1 正交实验设计实验选择四个因素分别为:浸泡时间、渗漉速度、收集渗漉液体积、乙醇浓度。以三水平L9(34)正交表安排实验。
2.2 提取方法取枳壳粗粉100 g,用不同浓度乙醇浸泡不同时间,进行渗漉,收集渗漉液,减压浓缩干燥,得干浸膏。
2.3 含量测定方法
2.3.1 色谱分析条件色谱柱为迪马C18柱(4.6 mm×20 mm×5 μm),流动相为乙腈-0.2%冰醋酸(20∶80),检测波长283 nm,流速1.0 ml/min,进样量为20 μl。
2.3.2 标准曲线的制备精密称取柚皮苷10 mg于50 ml容量瓶中,用甲醇加至刻度,摇匀。分别取1,2,3,4,5 ml于10 ml容量瓶中用甲醇加至刻度,摇匀。进样20 μl,以柚皮苷浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,进行回归方程为:Y=0.184X-0.823,r=0.999,线性范围为:0.2~1 mg/ml。
表1 因素与水平(略)
2.3.3 样品的测定取样品0.5 g精密称定,置100 ml容量瓶中,加甲醇80 ml,超声30 min放至室温,加甲醇至刻度,摇匀。取20 μl注入高效液相色谱仪,记录峰面积,用外标法计算柚皮苷含量。结果见表2。
表2 枳壳渗漉工艺正交实验结果(略)
2.3.4 正交实验结果由表2极差值和表3的方差分析结果表明在四个因素中,对柚皮苷提取率影响程度依次为:A>C>D>B。最佳提取的组合为A2B1C3D2,即取枳壳粗粉用70%乙醇浸泡24 h,进行渗漉。渗漉速度为5 ml/(kg・min),收集10倍渗漉液。
2.3.5 渗漉工艺的验证实验取枳壳粗粉100 g两份,分别按照最佳渗漉工艺进行实验,将渗漉液减压干燥。按2.3.3方法测定柚皮苷的含量。结果见表4。
表3 枳壳渗漉工艺方差分析(略)
表4 枳壳渗漉工艺验证实验结果(略)
结果表明,枳壳粗粉用70%乙醇浸泡24 h,进行渗漉。渗漉速度为5 ml/(kg・min),收集10倍渗漉液。此工艺稳定可行。
3 讨论
3.1 由表2极差值和表3的方差分析结果表明在4个因素中,浸泡时间和收集渗液体积对柚皮苷提取率影响较大。在浸泡时间A因素中A2>A3>A1,故选A2,因素渗漉速度B对实验结果无显著影响,为加快提取速度选择B1。对于因素乙醇浓度D因为D2>D3>D1,故选择D2。
3.2 在因素收集渗漉液体积C中C3>C2>C1,应选C3,但实地生产中,从成效比方面考虑选择收集8倍渗漉液。
参考文献:
[1] 国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005.
[2] 潘隽丽,杨 平,苏薇薇.枳壳类药材的研究概况[J].中草药,2003,2(10):768.
(新疆生产建设兵团农七师医院,新疆 奎屯 833200; 新疆奎屯市药品检验所 833200)