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       【摘要】 
       目的研究十全大补汤对荷瘤小鼠抑瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法以TA2移植性乳腺癌小鼠作为研究对象，给予50%SDT和灌胃，并给予化疗，以小鼠的体重、瘤重及脾内B淋巴细胞、T淋巴细胞增殖指数、IL6，TNFα，IL2作为观察指标。结果50%SDT可明显改善荷瘤鼠的一般状况，抑制肿瘤的生长；明显增强脾内T淋巴细胞的增殖，并调节B淋巴细胞的增殖，显著提高荷瘤小鼠脾细胞的IL-2，IL-6和TNF-α的分泌。结论SDT可在体内抑制肿瘤的生长，并降低化疗药物对机体的免疫损伤作用。
       【关键词】  十全大补汤； 荷瘤小鼠； 抑瘤率； 淋巴细胞增殖指数白细胞介素2； 白细胞介素6； 肿瘤坏死因子α
       
       The Experimental Study of Shiquan Dabu Decoction on Immune Regulation and Tumor-inhibition in Mice with Transplantable Mammary Cancer
       CAO Zhiran,  HAN Yanmei,RONG Ruixue,ZHAO Sheng ,WANG Bei 
       Medical Department of Hebei University ,  Baoding  071000,China
       Abstract：ObjectiveTo study the effects of Shiquan Dabu Decoction on tumor-inhibition and immunity in mice with transplantable mammary cancer. MethodsTA2 mice were randomly divided into four groups after vaccination of MA737 tumor tissue (named control,50%SDT,CMF,CMF+50%SDT).The weight, tumor weight, spleen cell proliferation，IL6，IL2 and TNFα were measured.ResultsThe results showed that 50%SDT inhibited the growth of the tumor. 50%SDT also enhanced the level of T lymphocyte proliferation and regulated the level of B lymphocyte proliferation and promoted the spontaneously secrete and stimulated secrete of IL6，IL2 and TNFα in spleen cells.ConclusionSDT can inhibit tumor growth and lessen the damage of immunity caused by chemotherapy.
       Key words：Shiquan Dabu Decoction ;   Mice with tumor；  Lymphocyte cells proliferation;  IL2;  IL6;  TNFα
       
       十全大补汤(Shiquan Dabu Tang,SDT)由人参、当归等10种生药配伍组方，为气血双补剂。近年来国外已有报道十全大补汤可减轻肿瘤病人的化疗反应，并可抑制结肠癌小鼠的肝转移，延长荷瘤小鼠的生存期。本实验以TA2移植性乳腺癌小鼠作为研究对象，分别给予50%SDT和白开水灌胃，并给予化疗，以小鼠的体重、瘤重及脾内B淋巴细胞、T淋巴细胞增殖指数、IL6、TNFα、IL2作为观察指标，进一步研究十全大补汤对荷瘤小鼠抑瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响，为该方的临床应用提供用药依据。
       1  材料与方法
       1.1  药品十全大补汤：党参，白术，茯苓，甘草，当归，川芎，白芍，熟地黄，黄芪，肉桂均购自保定市药材公司，经本院冯天铸教授鉴定均为正品。根据《中国药典》十全大补丸配方调配，按汤剂常规煎熬、过滤并浓缩成100%浓度（100ml 药液相当100 g生药）灭菌后备用。RPMI1640细胞培养液，LPS，ConA，MTT 均为Sigma 公司产品。
       1.2  动物  
       健康雌性TA2小鼠，5～6周龄，体重18～22 g，由天津医科大学实验动物科学部提供。
       1.3  瘤株 
       移植性小鼠乳腺癌MA737，购自天津医科大学实验肿瘤研究室。
       1.4  细胞株及细胞因子标准品   
       TNF 敏感细胞株为WEHI64.13；IL6依赖细胞株为B9细胞株；IL2依赖细胞株为HT2；重组IL6（rm IL-6）5×105 u/ml及重组IL2（rmIL2）1×106 u/ml。
       1.5  方法
       1.5.1  MA737移植  
       处死荷瘤小鼠，无菌操作下取瘤块边缘无坏死组织部分切成2 mm×2 mm×2 mm大小瘤块(约含2×106个瘤细胞)移植于右侧腹股沟皮下。
       1.5.2  动物分组及处理   
       将上述荷瘤小鼠随机分为4组，每组8只，1组为对照组，0.5 ml/d，水灌胃，2组为单纯中药组，在接种肿瘤后的第3天用50%十全大补汤灌胃，0.5 ml/次，1次/d，共14 d；3组为化疗加中药组，即在化疗同时用50%十全大补汤灌胃，给药剂量、时间同前；第4组为单纯化疗组。化疗采用CMF（CTX，MTX，5Fu）方案。在接种肿瘤后的第3天开始给药，1次/周，共两次。
       1.5.3  检测指标①瘤重及体重的测定：电子天平及扭力天平称重。②B淋巴细胞和T淋巴细胞增殖反应的测定：采用MTT法［1］。③细胞因子的测定：制备脾细胞悬液，分别设空白孔和LPS及Con-A刺激孔，CO2孵箱培养48 h后，取LPS刺激孔的培养上清测定IL6和TNFα，取ConA刺激孔的培养上清测定IL2。TNFα的测定：采用敏感细胞株法，IL6和IL2的测定采用依赖细胞株MTT法，单位为 pg/ml；TNFα测定采用敏感细胞杀伤法，单位为细胞杀伤活性［2］。
       1.6  数据的统计学处理  
       实验数据以均数±标准差(±s)表示，采用SPSS软件进行方差分析进行显著性检验后，进行两两比较 t检验。
       2  结果
       2.1  十全大补汤对荷瘤鼠体重增长及瘤重的影响结果见表1。表1  十全大补汤对荷瘤鼠体重增长及瘤重的影响(略)
        结果显示：50%SDT组小鼠体重增加明显高于对照组(P＜0.05)，中药加化疗组小鼠体重的增加明显高于单纯化疗组（P＜0.05）；50%SDT组瘤重明显低于对照组(P＜0.05)，抑瘤率为44%，50%SDT组小鼠的肿瘤组织与周围组织界限清楚，无粘连，易分离，而对照组小鼠的肿瘤与皮下组织粘连明显，不易剥离；中药加化疗组小鼠的瘤重低于单纯CMF组，抑瘤率为72%。
       2.2  十全大补汤对荷瘤鼠T淋巴细胞、B淋巴细胞增殖反应的影响结果见表2。表2   十全大补汤对荷瘤鼠T淋巴细胞、B淋巴细胞增殖反应的影响(略)
        结果显示：与对照组比较，50%SDT可使荷瘤小鼠的B淋巴细胞刺激指数下降而使T淋巴细胞刺激指数增高（P<0.01），50%SDT+CMF组动物的T淋巴细胞刺激指数亦明显高于单纯CMF组（P<0.05），说明十全大补汤可增强荷瘤动物的细胞免疫功能，改善化疗药物所致的细胞免疫功能损伤。
       2.3  十全大补汤对荷瘤鼠脾细胞TNF-α及IL-6分泌水平的影响结果见表3。表3  十全大补汤对荷瘤鼠脾细胞 TNF-α及IL-6分泌水平的影响（略)
        结果显示：与肿瘤对照组比较，50% SDT可明显提高荷瘤小鼠的TNFα及IL6的自发分泌和刺激分泌（P<0.05），CMF+50%SDT组小鼠的TNFα及IL6的自发分泌和刺激分泌水平均高于单纯CMF组（P<0.05 ）。结果表明，十全大补汤可增强荷瘤鼠IL6的自发分泌和刺激分泌水平。
       2.4  十全大补汤对荷瘤鼠脾细胞
       IL2分泌水平的影响结果见表4。表4  十全大补汤对荷瘤鼠脾细胞 IL2分泌水平的影响（略）
        结果显示：SDT组小鼠的IL2的自发分泌水平明高于其它各组（P<0.05），SDT+CMF组小鼠的IL2自发分泌水平明显高于单纯CMF组（P<0.01），CMF组IL2自发分泌水平明显低于肿瘤对照组（P<0.01）， SDT组小鼠的IL-2的刺激分泌水平明高于对照组（P<0.01）。表明化疗药物可降低荷瘤小鼠IL2自发分泌和刺激分泌，十全大补汤可拮抗化疗药物对IL2自发和刺激分泌的抑制作用，从而提高荷瘤小鼠的免疫功能。
       3  讨论
        
       荷瘤宿主的免疫状态与肿瘤的发生与发展存在着极其复杂的关系，宿主可通过免疫效应机制发挥抗肿瘤作用，而肿瘤生长过程中也会产生一系列降低或阻断宿主抗肿瘤免疫的抑制因素，从而促进肿瘤在体内的生长［3］。
        十全大补汤是益气补血的代表方，由人参(党参)、白术、熟地、茯苓、甘草、川芎、白芍、当归、黄芪、肉桂等10种生药组成，具有补气养血、温肾阳、滋肾阴等功能。基础和临床研究均表明，十全大补汤在抑制恶性肿瘤的增殖及转移、增强机体免疫力、减轻放疗和化疗副作用、增强抗癌药物的疗效、提高患者的一般状况、延长生存期等方面有较好疗效。大西康晴等研究表明十全大补汤可抑制小鼠结肠癌的肝转移，延长荷瘤小鼠的生存期，并证明其抗肿瘤转移的机制是通过Mφ，T细胞抑制转移通路或巨噬细胞直接作为效应细胞而发挥细胞毒作用或抑制肿瘤细胞生长的作用而与NK细胞作用无关［4］。
        本实验以荷瘤近交系小鼠作为研究对象，并与化疗药物对照研究，系统观察了十全大补汤对荷瘤小鼠的一般状况、肿瘤生长、脾内T，B淋巴细胞增殖，IL2，IL6，及TNF的影响，结果表明：十全大补汤能改善荷瘤鼠的一般状态，增加体重，明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，单纯应用十全大补汤可使抑瘤率达到44%，与化疗药物合用可使抑瘤率达到72%，高于单纯化疗药物的作用。十全大补汤可改善化疗药物对B细胞增殖的抑制作用，并显著增强T淋巴细胞的增殖，提高荷瘤小鼠脾细胞的IL2，IL6和TNFа的自发分泌和刺激分泌，拮抗化疗药物的免疫抑制作用。
       【参考文献】
         　　［1］薛 彬.免疫毒理学实验技术［M］.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1995：42.
       
       ［2］沈关心，周汝麟.现代免疫实验技术［M］.武汉：同济医科大学出版社，1998：261.
       
       ［3］Whitney RB, Levy JG, Smith AG.Influence of tumor size and surgical resection on cll-mediated immunity in mice ［J］.J Natl Cancer Inst 1974，53（117）：11.
       
       ［4］齐文富译.十全大补汤对小鼠结肠癌的抑制作用［J］.国外医学·中医中药分册，1999，21(3)：39.