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       【摘要】 
       目的观察叶下珠有效部位总提取物长期毒性可能造成对机体的毒性反应，为临床提供安全依据。方法叶下珠有效部位总提取物 1 280，640，320 mg/kg每天灌胃1次，连续给药180 d及停药后30 d观察对大鼠生长发育以及血液学常规、血液生化指标、和主要脏器体重比、主要脏器病理形态、心电图的影响。结果对大鼠生長发育、血液学常规、血液生化指标均在正常范围：主要脏器体重比、主要脏器病理形态、心电图均未出现毒性改变。结论 大鼠180 d长毒试验结果表明，叶下珠有效部位总提取物是低毒的。
       【关键词】  叶下珠总提取物； 长期毒性
       
       Study on Chronic Toxicity of Total Extracts of Yexiazhu(TEY) in Rats
       WEN  Zhijian，PENG  Longling, YANG Yasi, ZHAO Junning, ZHOU Yonglu, XUE Milun
       Sichuan Provincial Institute of Chinese Materia  Medica, Chengdu，610041，China
       Abstract：ObjectiveTo observe the chronic toxicity of TEY in rats. MethodsRats of three experimental groups were administrated. TEY at dose of 1280，640 and 320 mg/kg·d-1, respectively，6 days per week for 6 months．Rats of control group were given distilled water with the same volume．Growth of rats were observed．Indexes of hematology and blood biochemistry were measured．Ratio of viscera to body were measured and the major organs were examined by the pathology．All these tests were carried out three and six months after administration and one month after stopping administration．ResultsThe outer appearance and behavior, weights, the indexes of hematology and blood biochemistry were normal. The organ coefficient, the cardiogram, the pathological examination had no significant difference by comparing with control group. ConclusionTEY has no significant toxicity for longterm administration to rats.
       Key words：Total extracts of Yexiazhu；Chronic toxicity
       叶下珠有效部位总提取物是四川中药研究所叶下珠课题组采用大孔树脂提取工艺制备的样品，作者曾报道该品的一般药理作用，该研究结果未发现对中枢神经系统、心血管系统、呼吸系统有明显的影响。但作者用本品一次灌胃作小鼠急性毒性实验测得LD50为6 400 mg/kg，显示该品有一定毒性作用。国内学者仲英报道其制备的叶下珠提取物对鼠最大耐受量为360 g/kg；认为未发现叶下珠有毒性作用［1］。目前未见长期毒性研究报道。为进一步探讨叶下珠有效部位总提取物的毒性作用，本文报道对大鼠180 d长期毒性研究结果。
       1  材料
       受试药物：叶下珠有效部位总提取物(下文简称叶下珠)，每克相当原生药34 g，溶于水，四川省中药研究所药化室提供，批号为930319 。 实验时剂量按 mg/kg叶下珠有效部位总提取物计算。
       1.1  动物Wistar远交系大鼠，一级标准，合格证号为医动字第24301038 号；四川省中药研究所实验动物室供。
       1.2  试剂及主要仪器以下试剂盒均由重庆医学检验试剂研制所提供。
        丙氨酸氨基转移酶(ALT，赖氏法)；门冬氨酸氨基转移酶(AST，赖氏法)；总蛋白(TP，双缩脲法)；血清白蛋白( Alb，溴甲酚绿法)；尿素氮(BUN，二乙酰一肟比色法）； 血清肌酐(Crea，苦味酸比色法)；血清葡萄糖(Glu，GODPOD法)；总胆红素(T-Bil，JG法)；总胆固醇(TCHO，氧化酶法)；
        比色计：UV730，日本SHIMADZU产；心电测定仪：SB613D型， 日本   光电株式会社产；电子天平：EB3200D型，日本SHIMADZU产；扭力天平：TMA型，上海第二天平仪器厂产。
       2   方法与结果［2］
        取体重70～90 g(4～5周龄)的幼年大鼠120只，雌雄各半， 实验前观察 1周，食欲、大便、活动正常，随机分4组，每组动物数见表1，雌雄分笼， 每笼不超过5只。试验剂量根据小鼠灌胃LD50(6 400 mg/kg)的1/5，1/10，1/20确定，即大、中、小剂量分别为1280 ，640和320 mg/kg； 另设正常 对照组(灌胃同体积生理盐水)，每天灌胃1次，连续给药180 d( 星期天停  药)，每天上午9点给药，下午3点给颗粒饲料，自由饮水。每天给药、给饲料时观察动物食欲、大便、毛色、活动等一般状况，每周称体重1 次， 按体重调整给药量。分别于给药90，180 d，停药后30 d剖杀1批。动物于剖杀前检测清醒动物心电图(标准Ⅱ导联)；以及剖杀前尾静脉采血，用血常规方法作血液 学指标检查：红细胞计数(RBC)；白细胞计数(WBC)和分类；血红蛋白测定 (Hb)。每批动物于剖杀前1 d停食不停水，剖杀时先从眼眶取血，然后断头处死。采用试剂盒说明书提供的方法 测定血清ALT，AST，TP，Alb，BUN，Crea，TBil，T-CHO，Glu 。 各组动物分别剖取：脑、心、肝、肾、脾、肺、睾丸、子宫、卵巢、胸腺、   肾上腺、十二指肠、胃。除十二指肠和胃，其余脏器称重并计算脏器系数。所有脏器以10%甲醛固定、石蜡包埋，H.E染色， 光学显微镜检查病变。  所有数据以t检验处理。结果于后。
       2.1  一般表现180 d给药期间及恢复试验叶下珠各剂量组和正常对照组大鼠的行为、自主活动、摄食、饮水、毛发、粪便、尿液；眼、耳、鼻、口及分泌物等未见异常。
       2.2  对大鼠体重的影响叶下珠各剂量组和对照组的大鼠体重，在给  药期间和恢复试验中无明显差异。结果见表1。 表1  叶下珠180天长期毒性实验对大鼠体重的影响(略)
       2.3  对大鼠血象的影响尾静脉血涂片、取血计数RBC,WBC及分类， 测定Hb。结果见表2～3。结果表明：叶下珠长期给药对大鼠RBC，WBC及其  分类、Hb均无明显影响。表2   叶下珠大鼠长期毒性试验对WBC分类的影响(略)表3  叶下珠大鼠长期毒性实验对血象的影响(略)
       2.4  对大鼠脏器体重比的影响剖取主要脏器，卵巢、子宫、肾上腺、 胸腺用TM-A型精密扭力天平称量。其它脏器用EB-3200D型电子天平称量，结果见表4～6。结果表明，叶下珠对大鼠主要脏器体重比无明显影响。表4  叶下珠长期毒性实验对大鼠脏器体重比的影响(略)表5   叶下珠长期毒性实验对大鼠脏器体重比的影响(略)表6  叶下珠长期毒性实验对大鼠脏器体重比的影响(略)
       2.5  对大鼠血液生化指标的影响结果如表7～8。结果显示，叶下珠长期给药对大鼠肝肾功能、蛋白质、血糖等指标无明显影响。表7  对大鼠血液生化指标的影响(略)表8  对大鼠血液生化指标的影响(略)
       2.6  对大鼠心电图、心率的影响用SB-613D型心电图机， 测标准Ⅱ  导联大鼠心电图，心率如表6。结果表明，叶下珠长期给药对大鼠心电图、 心率无明显影响。
       2.7  主要脏器光镜病理形态学检查 根据新药研究指南要求，长期毒性实验中重要脏器病理检查可先检大剂量组和正常对照组，如果大剂量组   未发现病变，可免作中小剂量病检。本试验分别剖取脑、心、肝、肾、脾、 肺、十二指肠、胃、睾丸、子宫、卵巢、肾上腺、胸腺等13个组织，10%甲醛固定，石蜡包埋，H.E染色，光镜检查， 发现有轻度病变的脏器均列表。结果见表9。表9  对大鼠180 d长期毒性试验及停药后30 d恢复试验心电图测定结果（略）
        其它组织：脑、胃、十二指肠、肾上腺、脾、胸腺、子宫、卵巢，给  药组与对照组均正常；在正常组发现1只睾丸精子缺，精母细胞减少， 可能为个体差异。但大剂量组睾丸内精母细胞正常，精子充盈。卵巢也可见各级卵泡，可见未影响排卵。
        上述结果说明给药90 d，180 d，停药后30 d均未发现大鼠主要脏器  毒性病理改变；结合主要脏器体重比在正常范围内，可以认为给药180 d对大鼠主要脏器未产生明显毒性反应，和迟滞毒性反应。
       3 讨论
        本实验采用叶下珠有效部位总提取物的 1/5 LD50 (1280  mg/kg)，1/10 LD50 (640 mg/kg)和1/20 LD50(320    mg/kg)  对大鼠180 d长  期灌胃及停药后30 d，对动物体重、食欲、活动、大小便等一般状况以及血象，主要脏器体重比、心电图、心率等  检测均未发现毒性反应。在血液生化指标检测时，仅在药后90 d的肌酐1项大剂量组与对照组比较有显著性差异，但给药180 d检测该项指标未发现差异；而其升髙值在正常变化范围。所以为血液生化指标是正常的。主要脏器病理检查发现：个别或少许动物偶见肝汇管区、肾间质、肺血管旁有少量炎细胞浸润；但给药组与正常对照组比较，其病变程度、性质、病变动物数均相似。所以认为这是正常的反应，与药物无关。本试验结果表明：叶下珠有效部位总提取物给药180 d对大鼠未显示毒性反应，也未显示迟滞毒性反应。但这仅是对叶下珠毒性的初步探讨，有必要用Beagle犬作进一步的长期毒理学研究。以更多的数据为临床安全提供参考。表10   叶下珠大鼠长期毒性实验病理观察结果（略）
       【参考文献】
         　　［1］仲 英，左春旭，李风琴，等.叶下珠化学成分及其抗乙肝病毒活性的研究［J］ .中国中药杂志，1998，23（6）：336.
       
       ［2］李仪奎，王 茂.中药药理实验方法学［M］ .上海：科学技术出版社，1991：532.