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       【摘要】 
       目的测定夏枯草中熊果酸的含量。方法薄层扫描法。结果熊果酸在0.314～1.570 μg 范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0.999 2),平均回收率为99.3%，精密度实验RSD = 1.86%。结论该方法可用于夏枯草的质量控制。
       【关键词】  夏枯草；熊果酸；薄层扫描法
       
       Determination of the Content of Ursolic Acid in Prunella vulgaris L. by Dual Wavelength TLCScanning
       BAI Jie，CHEN Xiangfei, SUN Haifeng
       1. Research Institute of Tsinghua University in Shenzhen, Shenzhen 518057, China;
       2. Chemical Department of Tsinghua University, Beijing 100084, China
       Abstract：ObjectiveTo determine the content of ursolic acid in Prunella vulgaris L.MethodsTLC-Scanning method.ResultsUrsolic acid had a good linear relationship with peak area score when its sample size was within the range of 0.314～1.570 μg (r=0.999 2), the average recovery was 99.3%.ConclusionThis method can be served as a quality control method for Prunella vulgaris L.
       Key words： Prunella vulgaris L.;  TLC-Scanning;  Ursolic acid
        夏枯草系唇形科多年生植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗。主产于江苏、安徽、河南、浙江等地，其它各省亦产。具有清肝火、散郁结、降血压等功效［1］。本文通过采用双波长薄层色谱扫描法，测定其中熊果酸成分的含量，以控制药材质量。
       1  仪器与试药
        CAMAG 3（瑞典）薄层色谱扫描仪、Sartorius BS 210 S (德国)电子天平。熊果酸:由中国药品生物制品检定所提供，批号07429909；薄层层析硅胶G(青岛海洋化工厂)；薄层板：自制硅板G板 (20 cm×20 cm)；所有试剂均为分析纯。夏枯草药材：由深圳市一致药店及深圳市福田农批市场购买，产地湖北和河南。
       2  方法与结果
       2.1  薄层色谱条件　
       薄层板为硅胶G板，取硅胶G与0. 4%CMCNa水溶液按1∶3比例研匀铺板, 厚度0.3 mm, 阴干, 105℃活化30 min,以环己烷∶氯仿∶醋酸乙酯 (20∶ 5∶8)为展开剂，预饱和30 min，每个样品点成4.0 mm×1.0 mm长条状,放入展开缸内上行展开10 cm,喷以10%硫酸乙醇溶液,于100℃显色5 min，采用双波长反射式锯齿扫描,以540 nm 作为测定波长,700 nm作为参比波长,狭缝大小：2.0 mm×0.2mm。
       2.2  对照品溶液制备精密称取熊果酸对照品适量,加95%乙醇溶解制成每毫升含0.314 mg的溶液。
       2.3  供试品溶液分别精密称取夏枯草药材粗粉约1 g，加入25 ml 95%乙醇超声提取30 min，过滤，滤渣继续加入20 ml 95%乙醇超声提取20 min，过滤，合并两次滤液，70℃水浴蒸干，残渣用石油醚（60～90℃）浸泡两次，共15 ml，2 min/次，倾出石油醚液，挥干溶剂，用95%乙醇溶解并转移至10 ml容量瓶中定容，摇匀，即得。
       2.4  峰纯度检查样品及熊果酸对照品相同Rf值处，进行200～700 nm全波段光谱扫描，比较样品与对照品吸收光谱图的相似性，并确定最大吸收波长。结果见图1。选择样品与对照品吸收峰最大值，及前后85%峰位进行峰纯度检测。结果见表1。表1  熊果酸对照品与夏枯草样品Rf值相同的斑点最大吸收波长及峰纯度检测结果（略）
       2.5  线性范围考察精密吸取对照品溶液1，2，3，4，5 μl ，分别点于同一薄层板上,依上述条件展开,显色后扫描,以熊果酸的量(μg) 为横坐标X，吸收峰面面积积分值为纵坐标Y,回归得方程：Y = 6.244X-1 010.426，r =0.999 2。结果表明,熊果酸的含量在0.314～1.570 μg 范围内,呈良好线性关系。
       2.6  稳定性实验取同一薄层板上点样量相同(3 μl) 的5个对照品斑点,每隔5 min 扫描1 次,取每次5个点的平均值。结果表明，熊果酸在15 min内扫描基本稳定，RSD=3.61 % (n= 5)，以后随时间延长，吸收峰面积显著减少。
       2.7  同板精密度实验精密吸取对照品溶液(3 μl) 点于同一薄层板上，依法展开，显色后扫描，RSD= 1.86% (n = 5) 。
       2.8  异板精密度实验取5块薄层板分别点5个点样量相同的对照品斑点(3 μl),依法展开，显色后扫描，求出每块板5个点的平均值，RSD = 3.17 % (n= 5) 。
       2.9  重复性实验取供试品(批号060210) 5份，按样品测定方法分别测定其含量计算RSD = 1.94 % (n = 5) 。
       2.10  回收率实验取已知含量的样品( 批号060210) 约1 g，精密称定，再精密加入熊果酸对照溶液4.5 ml，按供试品溶液制备方法制成加样回收实验液。依法点样，展开，显色后扫描，测得其平均回收率为99.3%，RSD = 3.23 % (n= 5)。
       2.11  样品测定精密吸取供试品溶液7 μl，对照品溶液2 μl与5 μl，交叉点于同一薄层板上,依法展开测定，按外标两点法计算。结果见表2。表2  湖北及河南产夏枯草药材中熊果酸的含量测定结果（略）
       3  讨论
        通过薄层板展开，样品与熊果酸对照品相同Rf值处斑点全波段扫描图谱可见，各批次夏枯草样品与对照品有相似的吸收光谱图，并且最大吸收在540 nm附近，因此选择540 nm作为检测波长，为了扣除背景吸收,选择700 nm为参比波长。如表1峰纯度考察的结果，可见以99%作为峰纯度的检测限，可以认为各样品对应Rf值处均为单一物质熊果酸吸收峰，检测结果可以排除其它杂质成分的干扰。通过采用薄层扫描法对夏枯草药材中熊果酸含量测定的方法学考察，可见此种含量测定方法操作简便、结果准确，可以作为夏枯草中熊果酸含量测定方法。经过检测，河南及湖北产的共六批次夏枯草药材，其中熊果酸的含量均达到《中国药典》（2005年版）大于0.12%的含量要求［2］。
       【参考文献】
         　　［1］江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海科学技术出版社，2001：1827.
       
       ［2］国家药典委员会. 中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：198.