贯叶连翘中金丝桃素提取分离工艺的研究
作者：程力惠， 王建壮， 李晓蒙
作者单位：(广东药学院，广东 广州 510224)
《时珍国医国药》 2007年 第7期
多个检索词，请用空格间隔。
【摘要】
目的探讨从贯叶连翘中提取分离金丝桃素的工艺。方法用乙醇从贯叶连翘中提取金丝桃素，再用S898吸附树脂结合硅胶柱层析分离纯化金丝桃素粗提物。 结果该产品中金丝挑素的含量高达 2.17％ 。 结论该方法操作简单 ，消耗低，产品中金丝桃素含量高。
【关键词】 贯叶连翘； 提取； 分离； 金丝桃素
贯叶连翘Hypericum perforatumL.是藤黄科金丝桃属(Hypericum)植物贯叶连翘的全草。具有清热解毒、收敛止血、利湿等功效。金丝桃素(Hypericin)是贯叶连翘中最具有生物活性的物质。近年来的研究表明，金丝桃素具有抗抑郁 、抗菌消炎、抗 DNA和 RNA病毒，促进记忆等药理活性［1］。
我国贯叶连翘资源丰富，但由于贯叶连翘全草中所含的金桃素仅有万分之几，所以只有通过化学方法对其进行提取和精制，才能达到国际市场对贯叶连翘提取物中金丝桃素的含量大于0.3％的要求 。本实验对金丝桃素的提取、分离、纯化的工艺进行探讨，以提高产品中金丝桃素的含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器 HP8453UV-Vis吸收光谱仪(美国惠普公司)，RE－52A旋转蒸发仪，，HHS21-N电热恒温水浴锅。
1.2 试药薄层层析硅胶 G(青岛海洋化工有限公司)，乙醚、乙醇、甲醇、醋酸乙酯乙醚为分析纯。金丝桃素标准样品(购自美国 Sigma 公司，含量为85％)。贯叶连翘（产地为甘肃）。
2 方法与结果
2.1 金丝桃素的提取
2.1.1 预处理 精确称取粉碎的贯叶连翘75 g。装入渗辘柱中，分批加乙醚进行渗漉，前1～4次分别加乙醚150，125，100，75 ml合并渗漉液。用旋转蒸发仪回收乙醚，即得除去叶绿紊等脂溶性物质的贯叶连翘。
2.1.2 提取将乙醚处理过的贯叶连翘药粉装装入圆底烧瓶中，加乙醇200 ml，在50℃ 的水浴锅中热浸提取2 h后取出，冷却，过滤，滤液备用。
2.1.3 TLC鉴定分别取滤液和金丝桃素对照品的乙醇液，点在薄层板上，在254 nm的紫外灯下观察，均呈橙红色的荧光斑点，且二者的Rf值相同。
2.1.4 进一步提取 反复热浸提取，直到滤液经薄层层析检测不到橙红色的荧光斑点为止，合并滤液，减压浓缩为浸膏，然后将浸膏置于50～60 ℃的热水中。用醋酸乙酯萃取，再将醋酸乙酯萃取物减压蒸馏，即得到金丝桃素粗提物。
2.2 金丝桃素粗提物的分离工艺
2.2.1 树脂处理 取 1 000 g S898吸附树脂 ，加水浸泡 48 h，用蒸馏反复清洗干净 。加入 3倍量的2 mol/L NaOH溶液 ，浸泡 5 h，用蒸馏水洗至中性 ；加入 3倍量的4 mol/L HCl，浸泡 8 h，用蒸馏水洗至近中性；加入 60％乙醇浸泡 10 h ，再用蒸馏水反复清洗至无乙醇气味，最后用蒸馏水浸泡待用［2］。
2.2.2 金丝桃素的分离工艺称取20.0 g金丝桃素粗品，用500 ml 60％乙醇溶解，在50℃ 的水浴中提取2 h，过滤；滤液上S898吸附树脂，然后用无水乙醇洗脱，收集流出液，在真空度为0.08 mPa，温度为60℃的水浴条件下浓缩3.5 h，并在60℃ 的干燥箱中烘干。再将其用200 ml丙酮溶解，过滤，滤液上硅胶柱。收集流出液，浓缩干燥后得红色的金丝桃素产品。
2.2.3 总金丝桃素含量测定将上述产品加入200 ml甲醇中充分溶解，过滤，弃去残渣。取5 ml滤液放入容量瓶中，用甲醇定容至100 ml。以甲醇为空白，用HP8452UVVis吸收光谱仪测定，取589 nm处吸光度，按下列公式［3］：
总金丝桃素的质量含量＝（A589×600）/（样品质量×870）进行计算。每份样品平行测定3次，取平均值。结果见表1。
表1 总金丝桃素含量测定结果（略）
3 讨论
经过提取和进一步提取两步，即得到除去脂溶性和水溶性杂质的金丝桃素粗提物。
乙醇浓度、浸提时间均会对贯叶连翘中金丝桃素的提取率和提取物中金丝桃素的含量有影响，这将另文讨论。
金丝桃素对光和热不稳定，因此，在提取、分离、 纯化和精制金丝桃素的整个工艺中，每一个环节应始终将温度控制在60℃以下且金丝桃素应避光保存于棕色瓶中。
【参考文献】
［1］ 白卫兵，梁剑平，魏彦明，等.金丝桃素的提取纯化工艺研究［J］.中兽医药杂志，2005，3:17.
［2］ 陆九芳，李总成，包铁竹，等.分离过程化学［M］.北京：清华大学出版牡，1990.
［3］ 王晓菊，张立伟.贯叶连翘中金丝桃素分离工艺的研究［J］.山西大学学报(自然科学版 )，2005，28(1)：75.