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       【摘要】 
       目的为充分利用马尾松植物资源，避免资源的浪费，探讨马尾松总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从马尾松中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.7558 mg/ml，回收率为101%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取马尾松黄酮类物质的有效途径。
       【关键词】  超声波提取； 马尾松； 总黄酮； 鉴别
       The Total Flavanone of  Pinus massoniana Lamb Extraction and the Identification by Ultrasonic Wave
       NONG Shiyong， LIN Danying，YOU Ting ting，HUANG Suoyi
       （Baise Agricultural School in Guangxi, Baise, Guangxi 533000, China；Department of Chemistry, Youjiang Medical College for Nationalities, Baise, Guangxi 533000, China）
       Abstract：ObjectiveIn order to make use of the resources of Pinus massoniana Lamb,avoid wasting and approach the extraction of total flavanone of Pinus massoniana Lamb. MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from pinus massoniana lamb with ultrasonic wave and ethanol extraction .Using spectrophotometry to extract and check the flavanone of Pinus massoniana Lamb. ResultsBy this method getting the density of the total flavanone of pinus massoniana lamb was C=0.7558 mg/ml and the rate of  recovery was 101%.  ConclusionThis text provides the extraction and purifying methods to get the outcome and the purity of the flavanone are all very high .This method is a purely physical process and has not any pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of Pinus massoniana Lamb.
       Key words：Ultrasonic wave treatment;  Pinus massoniana Lamb;  Total flavanone;  Identification
       
       马尾松Pinus massoniana Lamb又名青松毛、松叶、松针等，为松科植物马尾松的针叶。干燥针叶作为一味常用中药，始载于《名医别录》上品。其性温，叶苦、涩，有祛风止痛、杀虫止痒、活血消肿、安神、明目等功效，临床上用于治疗风湿疼痛、牙痛、跌打损伤、脚气水肿、夜盲症、心脑血管病、糖尿病、肥胖病、肝病、胃病、淋病、慢性支气管炎、肿瘤等症［1～2］，其价值日益受到重视。马尾松针叶中含黄酮类化合物、贝壳核酸19甲醚、南洋核酸等，而且还有挥发油（主要成分为蒎烯及乙酸龙脑酯）和胡萝卜素、维生素B、C维生素、K维生素、E维生素等［3］。
       
       有文献报道马尾松中总黄酮的提取方法采用乙醇提取［4］，但是，这种方法的提取效率仍然较低。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道［5～6］，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响［6］。但超声技术应用于提取马尾松中黄酮类物质的研究尚未见报道，本文报道用超声波提取马尾松总黄酮及鉴别。
       1  仪器与试剂
       1.1  仪器 KQ5200DB型数控超声波清洗器（f超声工作频率40 kHz、昆山市超声仪器有限公司）；UV755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHBIII循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。
       1.2  试剂 95%乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜马尾松采自广西百色市郊区。
       2  方法与结果
       2.1  总黄酮成分提取取新鲜马尾松，烘干，粉碎。称取马尾松粉末约6 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取2.5  h，抽滤。滤渣再加80 ml 95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩5～7 ml为止，放置100 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。
       2.2  测定方法依据  以芦丁为对照品测定马尾松中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
       2.3  定量实验-总黄酮的含量测定
       2.3.1  波长的选择取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
       2.3.2  标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.13  mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白参比液，于510 nm处测定吸光度，见表1。
       
       根据上表得回归方程：A=3.619×103+12.34C，r=0.999 9。
       2.3.3  提取物含量的测定精密吸取样品液0.50 ml，置10.00 ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定其吸光度A=0.496，根据回归方程：A=3.619×103+12.34C，计算样品中总黄酮的含量C=0.755 8 mg/ml。
       2.3.4  回收率实验精密量取样品液1.00 ml，加入标准芦丁对照品1.00 ml（0.13 mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为101%。
       表1  紫外可见分光光度计测定吸光度（略）
       2.4  定性实验-总黄酮的鉴别
       2.4.1  颜色反应
       
       紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。
       
       浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏0.5 min，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。
       
       三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加１％三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。
       
       乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。
       
       盐酸镁粉反应：取乙醇提取液1 ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。
       2.4.2  纸层析取样品溶液10 μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5（体积比）为展开剂，上行展开5 h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。
       3  讨论
       
       实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为101%，本实验所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。
       
       黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等［7］。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。　　
       
       黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用［8～13］。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。马尾松分布广泛，本实验结果表明，马尾松中含有较为丰富的黄酮。因此，马尾松具有广泛开发和利用价值，值得综合利用并加强资源开发。
       【参考文献】
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