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       【摘要】 
       目的观察灯盏乙素对对乙酰氨基酚和脂多糖致小鼠肝功能损伤和致死率的影响。方法分别给不同模型的小鼠灌胃给予灯盏乙素25～500 mg·kg-1，1次/d。7～14 d后，一次性腹腔注射不同剂量的对乙酰氨基酚和脂多糖, 观察小鼠肝功能变化和致死情况。结果小剂量的灯盏乙素不影响对乙酰氨基酚所致小鼠肝功能损伤，但加大剂量后小鼠致死率明显升高；小剂量的灯盏乙素就能显著加重脂多糖所致小鼠肝功能损伤、明显增加脂多糖致小鼠死亡率。结论使用灯盏乙素治疗心或脑血管疾病，当病人遇到感染性疾病时，要注意灯盏乙素的使用剂量，灯盏乙素的不当使用可能会加重脂多糖（内毒素）诱导的肝损伤；使用对乙酰氨基酚治疗各种疾病所致发热时，合用灯盏乙素也要注意灯盏乙素的使用剂量。
       【关键词】  灯盏乙素 对乙酰氨基酚 脂多糖 肝损伤 致死率
       灯盏乙素（scutellarin）又名野黄芩苷，是菊科植物短葶飞蓬的干燥全草（灯盏细辛）中提取的黄酮类有效成分［1］。灯盏乙素具有增加血流量、改善微循环、扩张血管、降低血粘度、降血脂、促纤溶、抗血栓、抗血小板凝聚等作用，临床上被广泛用于脑血栓、冠心病心绞痛等缺血性心脑血管疾病的治疗［1］。另有大量的研究表明黄酮类化合物对多种实验性肝损伤模型均有保护作用［2］。我们对灯盏乙素对各种实验型肝损伤模型的作用进行了深入研究后发现灯盏乙素可改善脑缺血再灌注后所致的肝功能损伤［3］, 且能显著抑制卡介苗（BCG）+脂多糖（LPS）所诱导的免疫性肝损伤［4］，还对利福平和异烟肼合用致小鼠肝损伤具有明显的保护作用［5］。本课题进一步考察灯盏乙素对扑热息通（APAP）和单用脂多糖（LPS）对小鼠肝功能和致死率的影响，为开发和临床合理使用灯盏乙素提供初步的实验依据。
       1  材料与仪器
        1.1  动物健康雌雄各半昆明种小鼠，体重18～22 g，SPF级，购自广西壮族自治区食品药品检验所实验动物中心，合格证号：SCXK桂2003-0001。
        1.2  药物灯盏乙素（98.81％）购自云南玉溪万方天然药物有限公司，批号：051202；扑热息痛（APAP）购自美国Sigma公司，批号：125K0112；ALT测定试剂盒购自南京建成生物制品研究所。
        1.3  试剂与仪器Agilent 8453紫外可见分光光度计；JY92-2D超声波细胞粉碎机，宁波新芝科技器研究所产品；TG-16M台式高速冷冻离心机，湖南赛特湘仪离心机仪器有限公司产品；电子分析天平AE100，梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司产品；数显恒温水浴锅HH－8，国华电器有限公司产品；高速微量离心机LG16－W，北京医用离心机厂产品。
       2  方法
        2.1  灯盏乙素对正常小鼠肝功能的影响实验将小鼠随机分为两组，即正常对照组、灯盏乙素组，每组10只。正常组ig蒸馏水0.2 ml·（10 g）-1，灯盏乙素组ig灯盏乙素200 mg·kg-1，1次/d，每组均连续给药7 d。末次给药24 h后，各组小鼠摘眼球取血。
        2.2  APAP致肝损伤造模和给药方法［6］将小鼠随机分为5组，每组10只，分为正常对照组、模型对照组、灯盏乙素低剂量组、灯盏乙素中剂量组、灯盏乙素高剂量组。APAP用0.9％ NaCl注射液温浴溶解，灯盏乙素用蒸馏水溶解。除正常组和模型组ig蒸馏水0.2 ml·（10 g）-1外，灯盏乙素低、中、高3个剂量组分别ig 25，50，100 mg·kg-1灯盏乙素，1次/d，各组均连续给药7 d。末次给药1 h后，除正常组外，其余各组均ip 400 mg·kg-1APAP，24 h后，各组小鼠摘眼球取血，脱颈椎处死后，迅速摘取肝脏称重。
        2.3  LPS致小鼠肝损伤实验造模和给药方法［7］将小鼠随机分为4组：正常对照组、模型对照组、灯盏乙素2个剂量组。正常对照组和模型对照组灌胃给予蒸馏水0.2 ml·10 g-1，灯盏乙素2个剂量组灌胃给予配成相应浓度灯盏乙素水溶液50，100 mg·kg-1，各组连续灌胃给药14 d。末次给药1.5 h后，除正常对照组腹腔注射生理盐水［0.2 ml·（10 g）-1］外，其余各组均腹腔注射10 mg·kg-1 LPS［0.2 ml·（10 g）-1］，注射LPS攻击后5 h，小鼠摘眼球取血，分离血清待测，并迅速取出肝脏、脾和胸腺。
        2.4  APAP致死率实验方法［6］将小鼠随机分为5组，正常对照组、模型对照组、灯盏乙素低剂量组、灯盏乙素中剂量组、灯盏乙素高剂量组。APAP用0.9％ NaCl注射液温浴溶解，灯盏乙素用蒸馏水溶解。除正常组和模型组ig蒸馏水0.2 ml·（10 g）-1外，灯盏乙素低、中、高3个剂量组分别ig 125，250，500 mg·kg-1灯盏乙素，1次/d，各组均连续给药9 d。第10天，除正常组外，其余各组均ip 1 000 mg·kg-1 APAP，24 h后，观察各组小鼠死亡情况。
        2.5  LPS致死率实验和给药方法［7］取小鼠80只随机分为4组：模型组ig蒸馏水，灯盏乙素低、中、高3个剂量组分别灌胃给予50，100，200 mg·kg-1灯盏乙素，每天灌胃给药1次，连续6 d。第7天早上灌胃给药1次后，间隔12 h再灌胃给药1次，末次给药1 h后，各组均ip LPS 20 mg·kg-1。ip LPS后12，24，36，48 h观察小鼠死亡情况。
        2.6  器官指数测定采血前称小鼠体重，取肝脏、脾和胸腺称重，计算器官指数。器官指数=器官重（mg）/体重（g）。
        2.7  血清ALT活性测定（赖氏法）按试剂盒说明进行操作。
        2.8  统计学方法计量数据采用±s，组间比较进行t检验，数据采用Microsoft Excel统计软件进行分析处理。致死率采用χ2检验。
       3  结果
        3.1  灯盏乙素对正常小鼠血清ALT的影响灯盏乙素200 mg·kg-1剂量组小鼠血清ALT活性，与正常组比较，无显著性差异（P>0.05）。结果见表1。表1  灯盏乙素对正常小鼠血清ALT的影响
        3.2  灯盏乙素对APAP致肝损伤小鼠肝脏指数和ALT的影响灯盏乙素各个剂量组与模型组比较肝脏指数均无明显差异(P>0.05）。模型组小鼠血清ALT活性显著升高，与正常组比较，P<0.001。灯盏乙素各个剂量组血清ALT活性与模型组比较，无显著性差异（P>0.05）。结果见表2。
        3.3  灯盏乙素对LPS致肝损伤小鼠脏器指数和ALT的影响LPS致肝损伤模型组小鼠与正常组比较，肝脏指数没有显著性差异（P>0.05）。而灯盏乙素50，100 mg·kg-1 两个剂量组与模型组比较，肝脏指数均明显升高（P<0.05）。各组脾脏指数比较均无明显差异（P>0.05）。LPS致肝损伤模型组小鼠胸腺指数与正常组相比，无显著性差异（P>0.05），而灯盏乙素50，100 mg·kg-1两个剂量组与模型组比较，能显著降低模型组小鼠的胸腺指数（P<0.01）。LPS致肝损伤模型组小鼠，血清ALT活性显著升高，与正常组比较，P<0.001。说明模型建立成功。灯盏乙素50，100 mg·kg-1两个剂量组与模型组比较，血清ALT活性显著升高（P<0.01）。结果见表3。表2  灯盏乙素对APAP致肝损伤小鼠肝脏指数和ALT的影响表3  灯盏乙素对LPS致肝损伤小鼠脏器指数和ALT的影响与正常组比较，***P<0.001；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01；n=12
        3.4  灯盏乙素对APAP致死率的影响模型组小鼠死亡率为56.3%，灯盏乙素各个剂量组的死亡率均高于模型组，并随着剂量的增大而呈上升趋势。χ2检验显示，灯盏乙素250，500 mg·kg-1剂量组死亡率与模型组比较，有显著性差异（P<0.05或P<0.01）。结果见表4。表4  灯盏乙素对APAP致死率的影响与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01；n=20
        3.5  灯盏乙素对LPS致小鼠死亡率的影响观察注射LPS后各个时间段小鼠死亡率可见，注射LPS 12 h后，模型组和灯盏乙素中剂量组均无小鼠死亡，灯盏乙素低、高剂量组略有死亡，24 h后，模型组小鼠死亡率达到45%，但灯盏乙素低、中、高剂量组死亡率分别为70%，50%，70%，均高于模型组。36，48 h后模型组和灯盏乙素低剂量组死亡率没有升高，灯盏乙素中、高剂量组略有升高。结果见表5。表5  灯盏乙素对LPS致小鼠死亡率的影响
       4  讨论
        解热止痛药是我国消耗量最多的药物品种之一。扑热息痛（Paracetamol，Par）即对乙酰氨基酚（acetaminphen，APAP）是世界卫生组织推荐的，为临床常用的苯胺类解热镇痛药。随着APAP在临床上的广泛应用, APAP中毒已成为常见的药物性中毒。在欧美等发达国家，APAP中毒排在药物性中毒的首位。APAP中毒在临床上主要表现为肝脏肿大，肝功能受损，直至肝细胞坏死，肝功能衰竭，愈后极差［8］。扑热息痛小剂量不会引起肝损伤，当大剂量使用时，其与葡萄糖醛酸或硫酸结合饱和后，剩余的扑热息痛经细胞色素P450代谢生成过量的对乙酰基苯醌（NAPQI），NAPQI能与谷胱甘肽（GSH）结合解毒，但当GSH含量少于20%时，过剩的NAPQI与肝细胞构成蛋白形成共价键结合而导致肝细胞损伤［9］。同时，扑热息痛在代谢过程中产生大量的自由基,导致脂质过氧化增强，并可通过破坏钙稳态而产生细胞毒性，导致细胞坏死，严重的引起小鼠死亡［8］。我们的实验结果表明，灯盏乙素25，50，100 mg·kg-1对APAP致肝损伤小鼠的肝指数和血清ALT升高没有影响。加大灯盏乙素的剂量反而促进模型组小鼠的死亡，并随着剂量的增大而呈增长趋势。表明灯盏乙素与APAP合用时能可能会增加APAP的毒性作用，提示临床使用灯盏乙素治疗心脑血管疾病时若病人因各种疾病引起发热，使用扑热息痛退热时，灯盏乙素要减量使用或停药。
        LPS直接诱导小鼠肝损伤，是通过其与宿主细胞相互作用，从而刺激体内多种细胞合成释放众多内源性生物活性因子而表现出生物学活性。大剂量LPS进入机体，可导致大量中性粒细胞向组织积聚，释放大量炎性介质，引发机体肺、肝、肾、心脏等各个器官的损伤，导致全身炎症反应综合征及多器官功能障碍综合征（MODS），甚至引发死亡［6］。灯盏乙素50，100 mg·kg-1 剂量组虽然能降低LPS致肝损伤模型组小鼠的胸腺指数，但对模型组小鼠的脾指数没有影响，反而能升高模型组小鼠的肝脏指数。灯盏乙素50，100 mg·kg-1 剂量组均能显著升高模型组小鼠血清中ALT水平，LPS致小鼠死亡率实验表明，灯盏乙素低、中、高各个剂量组非但不能降低LPS致小鼠的死亡率，反而有加重LPS致小鼠死亡率的趋势。我们预测灯盏乙素可能有一定增强免疫的效果，但对于LPS致肝损伤小鼠非但没有保护作用，可能还会加重LPS诱导的肝脏损伤，提示我们当使用灯盏乙素治疗心脑血管疾病时，病人在治疗期间如果不幸得了细菌感染［细菌会释放内毒素,即脂多糖（LPS）或刺激机体释放内毒素使病人发热或者诱发多器官功能衰竭］，此时灯盏乙素的不当使用可能会加重内毒素所致的肝损伤，因此我们临床使用药物时要特别注意。正在使用灯盏乙素的病人，若合并细菌感染发热，更要慎用对乙酰氨基酚退热。
       【参考文献】
         ［1］ 李 丽，刘东阳，江 骥，等. 灯盏乙素药理学研究进展［J］. 中草药，2006， 37(8): 171.
       
       ［2］ 郭菁菁,杨秀芬. 黄酮类化合物对动物实验性肝损伤保护作用研究进展［J］. 中国药理学通报，2008，24（1）：5.
       
       ［3］ Yang X F, HE W, LU W H. Effects of scutellarin on liver function after brain ischemia/reperfusion in rats［J］. Acta Pharmacologica Sinica, 2003, 24: 1118.
       
       ［4］ 杨秀芬，庞紫妤，周 芳,等. 灯盏乙素对小鼠免疫性肝损伤的保护作用［J］. 时珍国医国药，2007，18（4）：822.
       
       ［5］ 杨秀芬, 郭菁菁. 灯盏乙素对异烟肼和利福平合用所致小鼠肝损伤的保护作用［J］.中国新药杂志, 2008,17(14):1209.
       
       ［6］ Kanno S, Shouji A, Tomizawa A, and et al. Inhibitory effect of naringin on lipopolysaccharide (LPS)-induced endotoxin shock in mice and nitric oxide production in RAW 264.7 macrophages［J］. Life Sci, 2006, 78: 673.
       
       ［7］ Zhang J, Huang W, Chua SS, et al. Modulation of Acetaminophen-Induced Hepatotoxicity by theXenobiotic Receptor CAR［J］. Science, 2002, 298: 422.
       
       ［8］ 杜晓冬，刘 郁，陈曼玲. 急性醋氨酚中毒致肝损伤及维拉帕米预处理的作用［J］.中华急诊医学杂志，2001，10：224.
       
       ［9］ Ayoub SS, Botting RM, Goorha S, et al. Acetaminophen-induced hypothermia in mice is mediated by a prostaglandin endoperoxide synthase1gene-derived protein［J］. Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA, 2004, 101(30): 11165.