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       【摘要】 
       目的了解诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和TGFβ1在胃黏膜不典型增生组织的表达水平, 并观察胃复春的治疗效果。方法采用Sp免疫组化法在用药前后对46例胃镜病检证实为中重度胃黏膜不典型增生的组织标本进行iNOS，TGFβ1检测,胃复春口服6个月后复查。结果iNOS，TGFβ1在用药后的黏膜组织上的表达明显下降（P＜0.05，P＜0.05），且iNOS与TGFβ1之间存在显著相关性( r = 0. 754 ，P＜0. 05)，病理学检查表明:胃黏膜不典型增生明显减轻。结论iNOS，TGFβ1在胃黏膜不典型增生的过程中起了重要作用，胃复春对胃黏膜不典型增生者有明显保护作用。
       【关键词】  胃黏膜不典型增生 诱导型一氧化氮合酶 TGFβ1 胃复春
       胃黏膜不典型增生也称异型增生,是一种常见的消化系统疾病，属癌前病变，目前有效治疗手段不多。幽门螺杆菌(Hp)感染是胃黏膜不典型增生的重要发病因素,也是胃癌的重要发病因素［1］，因此有效治疗Hp感染，控制胃黏膜不典型增生的发展,是控制胃癌发生的有力措施。诱导型一氧化氮合酶( iNOS)与胃黏膜不典型增生的发展关系密切,目前研究得较多。TGFβ1 在正常细胞转化为瘤细胞的过程中,早期可作为肿瘤抑制物;在肿瘤生长晚期阶段,它可通过刺激血管生成,细胞播散、免疫抑制及合成细胞外基质提供肿瘤生长、转移的微环境［2］,为了探讨iNOS、TGFβ1与胃黏膜不典型增生的演进关系及胃复春的保护作用,我们采用免疫组化技术对用药前后的胃黏膜组织中iNOS，TGFβ1的表达进行了检测与比较。
       1  材料
        1.1  临床材料及采集 所有病例均来自湖北省中山医院200604～200710消化内科, 经胃镜自胃窦幽门前区或病变处取黏膜5块,其中1块作快速尿素酶试验,其余用10%甲醛固定,常规石蜡包埋切片,做病理学检测及免疫组化,用药前后各做1次。活检病理组织学确诊为中重度胃黏膜不典型增生者共46例, 其中Hp阳性者38例，Hp阴性者8例。
        1.2   试剂 第一抗体试剂: 兔抗人多克隆iNOS和TGFβ1抗体,购于武汉博士德生物技术公司。第二抗体试剂:链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶免疫组化染色超敏试剂盒,购于福州迈新生物技术开发公司。DAB显色试剂盒购于武汉博士德生物技术公司。
       2  方法
        2.1  方法采用Sp免疫组化法。主要步骤如下:石蜡切片3 μm厚常规脱蜡水化；组织抗原微波修复(枸橼酸缓冲液0. 01 mol/L, pH = 6. 0, 5 min ×3)；滴加一抗,置湿盒中37 ℃温箱孵育20 min；上述步骤之间均以磷酸盐缓冲液(pH= 7. 4)洗片3次,DAB显色,苏木素复染；脱水、中性树脂封片。取已知含有待检抗原的切片经上述步骤染色,作为阳性对照。用磷酸盐缓冲液代替第一抗体经上述步骤染色,作为阴性对照。
        2.2  药物  口服胃复春片（杭州胡庆余堂制药厂生产, 其主要成分是菱角、三七、香茶菜、枳壳等）， 4 片/次，3 次/d。治疗期间停用其他相关药物, 3 个月为1个 疗程，连服两个疗程。
        2.3  计算机图象分析 iNOS， TGFβ1的蛋白表达免疫组化结果分析：免疫组织化学半定量分析采用HpIAS2000型图象分析软件（同济千屏影像工程公司研制），分析方法为在放大400倍图象的区域每个标本依次选取5 个视野，染色阳性部位的深浅及范围以平均光密度（IDp）表示。
        2.4  统计学处理所有数据均以±s表示，采用SpSS10. 0统计软件，对组间比较进行χ2检验，iNOS与TGFβ1表达相关性用Spearman等级相关分析。检验水平α = 0. 05。
       3  结果
        3.1  疗效判定根据全国萎缩性胃炎协作组提出的诊断及疗效判定标准： 临床症状消失, 胃镜复查见胃黏膜损害基本恢复, 病理示不典型增生消失或减少2倍以上为显效；临床症状部分消失, 胃镜复查胃黏膜损害好转, 病理不典型增生程度减轻1倍以上为有效；临床症状无明显改善, 胃镜复查胃黏膜损害无明显好转, 病理无改善或加重为无效。
        3.2  结果免疫组化染色结果: iNOS 表达阳性细胞为细胞浆染成棕黄色细颗粒状,用药后明显减少（P＜0.05）；而TGFβ1阳性染色于细胞浆中呈棕黄色分布，用药前后表达有明显变化（P＜0.05）。iNOS与TGFβ1的表达呈正相关（r=0.754, P＜0.05）。见表1～3。表1  iNOS，CTGF在用药前后组织细胞中的表达  表2   Hp在用药前后的变化情况表3  胃复春治疗后的组织病检疗效判定
       4  讨论
        胃癌与不典型增生同为胃腺组织的增生性病变, 据Corra的胃癌发生模式认为, 胃癌的发生是一连续性、进行性的过程, 即急性胃炎→慢性胃炎→慢性萎缩性胃炎、肠化、异形增生→胃癌, 这个演变过程在细胞学上均应经过不典型增生阶段,特别是中重度不典型增生与胃癌关系密切［3］。若能阻断或逆转这一进程, 无疑有重大现实意义。iNOS在正常组织中很少表达,但在细胞因子、需氧应激、IFNγ、TNFα、IL1α等作用下,呈高表达状态,从而发挥其病理作用，有研究显示, 胃黏膜上皮细胞iNOS，COX2, TGFβ1， PCNA的表达在H pylori感染时升高, 且在CSG， IM， Dys组及GC组中逐渐增强, 说明H pylori感染可能通过诱导iNOS和TGFβ1等致炎因子和某些细胞生长因子的过度表达引起胃黏膜上皮细胞过度增殖, 最终导致胃黏膜细胞增殖失去调控诱发胃癌［4～7］。通过本文研究，在胃黏膜不典型增生的演变过程中， TGFβ1随着胃黏膜不典型增生的减轻，其表达明显下降，和iNOS的表达呈显著正相关（r=0.754, P＜0.05），而iNOS的表达是随着胃黏膜不典型增生的加重而增加［4，8］，这说明TGFβ1和iNOS一样，在胃黏膜不典型增生向胃癌的演变过程中起了重要作用。杭州胡庆余堂生产的“胃复春”片， 由三七、香茶菜、枳壳等药组成, 药理研究发现三七具有抗衰老、抗肿瘤、改善免疫功能及增强体质的作用, 并能杀死HP ［9］,病理实验表明，它对幽门螺旋杆菌有明显的抑制作用，同时可有效控制肠化生病变和异型增生，并使其向正常化转变［10］。本文在使用胃复春片治疗后，胃黏膜不典型增生明显好转，HP的感染率下降，同时iNOS，TGFβ1的表达也下降，说明胃复春片在对胃黏膜不典型增生的治疗作用中，通过有效抑制HP的感染率及iNOS，TGFβ1的表达，从而逆转了胃黏膜不典型增生的进一步发展，起到了保护作用。
       【参考文献】
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