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       【摘要】 
       综述了脑缺血动物模型常用的检测指标研究概况，为研究脑缺血机制及动物模型评价提供依据，同时便于实验研究时选择使用。
       【关键词】  脑缺血 动物模型 检测指标
       脑缺血是以脑循环血流量减少为特征的中枢神经系统疾病，具有发病率高、致残率高和死亡率高的特点，严重地影响人类的生存质量。选用准确的脑缺血检测指标是脑缺血机制研究及动物模型建立的关键环节之一。本文就脑缺血动物模型常用的检测指标作一总结。
       1   血小板聚集性
        血液内血小板的高聚性是脑缺血的主要致病机制之一。对采用花生四烯酸诱导的大鼠急性脑缺血模型研究表明［1］，模型组加入诱导剂ADP（终浓度2 μmol/L），分别在1，2，4 h后测定5 min最大聚集率（PAgTmax％）和1min最大聚集速度（PAgVmax％）均较对照组升高。
       2   脑梗塞部分百分比
        采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，模拟人类缺血性脑血管病的状态，通过红四氮唑（TTC）染色的方法计算缺血面积。结果大鼠造模后24h内出现程度不同的神经损伤症状，与对照组相比，缺血部分占整个脑组织切片面积的百分比有极显著差异［2，3］。
       3   脑含水量
        脑血管堵塞后，缺血中心区神经细胞很快发生死亡，而缺血后再灌注可挽救濒死细胞。脑组织含水量测定可观察脑缺血损伤后胶原组织水肿情况，一般用以下公式计算：含水量（％）＝（湿重－干重）/湿重×100％［4］。
       4   线粒体呼吸功能
        局灶性脑缺血引起脑损伤的重要原因之一即脑能量代谢功能障碍，因此，检测线粒体功能对于评价药物的脑保护作用具有重要意义。采用插线法［5］制备大鼠脑缺血再灌注模型后，取出缺血区脑组织制备线粒体，进行呼吸功能测定。结果表明模型组线粒体功能受到明显损伤，表现为3态呼吸速率降低，4态呼吸速率提高［6］。
       5   脑组织结构
        脑缺血后，脑内神经细胞代谢紊乱，以致神经细胞损伤。在形态学上表现为体积变小，细胞质和细胞核固缩，胞浆和血管周围空化；另外还可因毛细血管通透性增加，导致血浆渗出，出现脑水肿。可采用光学显微镜、电子显微镜研究镜下的组织细胞形态学改变。
       6   脑电图［7］
        通过脑电图波幅的改变可判断脑缺血症状。在大鼠冠状缝前相当于皮层感觉运动区（额顶区）部位和顶叶后部(顶枕区)的左右两侧对称地分别放置脑电极各一，连接多道生理记录仪记录，可以反映阻断侧大脑中动脉供血区和非供血区，以及对侧相应部位的脑电变化。缺血区脑电图出现波幅降低，频率减慢。
       7   兴奋性氨基酸毒性及含量
        氨基酸作为重要的神经递质，对正常大脑的生理活动有调节作用。脑缺血时，神经元释放的谷氨酸是引起神经元死亡的重要原因。除谷氨酸(Glu)具有损伤效应外，甘氨酸(Gly)也有协同作用，其释放增加能扩大脑缺血损害。γ-氨基丁酸(GABA)能抑制兴奋性氨基酸释放或对抗氨基酸毒性。傅建华等［7］采用结扎小鼠双侧颈总动脉进行反复缺血再灌注，造成小鼠血管性学习记忆障碍模型，测定小鼠大脑皮层和海马区递质性氨基酸含量的变化。结果表明，与对照组相比，模型组海马区天门冬氨酸含量降低，脑皮层的γ-氨基丁酸的含量升高。
       8   血液流变学指标　
        血液粘稠度较高、血流速度缓慢致血栓形成，是缺血性脑血管疾病发病的又一重要机制。殷凤等［8］采用高分子右旋糖酐制成大鼠血瘀症模型，测定结果表明，模型组全血粘度、血浆粘度、血细胞比容及红细胞电泳时间均有所升高。
       9   脑能荷（EC）及磷酸肌酸（PCr）的含量
        脑缺血后，能量衰竭主要表现在高能磷酸化合物ATP，PCr的耗竭上，为检测缺血早期脑组织的ATP，ADP，AMP及PCr含量，可采用HPLC仪观察大脑的能荷值，用以下公式计算：EC＝（CATP－0.5 CADP）/（CATP＋CADP＋CAMP）。王秋华等［9］阻断雄性小鼠双侧颈总动脉血流，复制低血压伴急性脑缺血模型，发现在缺血10，20，30min时模型组EC，PCr含量均较假手术组降低。
       10   超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）水平
        脑缺血后生成的大量氧自由基攻击细胞膜和亚细胞膜，引发脂质过氧化反应，导致细胞代谢及功能障碍。张博生等［10］发现脑缺血和再灌注后鼠红细胞、脑组织及线粒体中的SOD水平降低；而鼠血浆、脑组织和亚细胞器中红细胞内的MDA水平升高。
       11   NO及一氧化氮合酶（NOS）活性
        脑缺血晚期，机体代谢生成大量的NO，且NOS活性升高，可诱导谷氨酸兴奋毒性，加重缺血再灌注损伤。李建生等［11］研究发现NO含量降低和TNF增高与老龄大鼠脑缺血再灌注脑组织损伤有关；大黄提高血清 NO含量和脑组织NOS活性的作用可能是其拮抗脑组织损伤的机制之一。
       12   ATP酶活性
        能量的衰竭首先是离子泵的功能受到影响，Na+，K+-ATP酶主要存在于细胞膜上，对维持细胞的机能、代谢和细胞内外的离子平衡中起重要作用。脑缺血时，能量匮乏，Na+，K+-ATP酶不能正常运行。而ATP依赖的Ca2+-ATP酶也在ATP减少时活性降低，不能将Ca2+泵出胞外，造成细胞内Ca2+超载。刘志龙等［12］采用沙土鼠双侧颈总动脉夹闭脑缺血再灌注模型，于缺血再灌注后48h取脑组织测定Na+，K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性，结果发现脑缺血再灌注后脑组织Na+，K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性均降低。
       13   神经肽Y（NPY）与神经降压素（NT）含量
        血小板合成释放的NPY可引起血管收缩、心肌抑制和血栓形成，而NT在体内可拮抗NPY的生物学效应，对于两者含量异常在老年脑梗塞发病中所起的作用不容忽视。杨风杰等［13］通过测定全脑缺血再灌注老龄大鼠模型脑组织NT和NPY含量，发现模型组脑组织NPY水平升高，而NT水平降低。
       14   白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6) 含量
        该两种介质在脑缺血后快速合成释放，两者与细胞损伤及修复密切相关。王键等［14］建立气虚血瘀证脑缺血大鼠模型，测定血清IL-1β和IL-6 水平，结果模型组二者含量均升高。
        目前，有关脑缺血动物模型的检测指标较多，主要集中在神经行为学、病理组织学、能量代谢、兴奋性氨基酸变化等四方面。笔者选取了其中较为常用的指标，以供同仁参考。不同的检测指标反映不同的发病及作用机制，在具体实验研究中，应采取多指标相互配合的原则，针对不同的作用机制选取，才能更准确反映出脑缺血的本质。
       【参考文献】
         ［1］ Furlow TW and Bass NH.Arachidonate-induced cerebroscular occlusion in the tar.Neurolory,1976,48（4）:297.
       
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       ［3］ 李 峰,姚志彬,袁群芳,等.大鼠试验性MCA区脑缺血再灌流模型的改进和可靠性探讨［J］.广东解剖学通报,1997,19（1）:27.
       
       ［4］ 欧润姝,巫志峰.大鼠脑缺血模型的制备方法与评价指标总结［J］.中国现代实用医学杂志,2005,4(12):33.
       
       ［5］ Ginsberg MD,Mela L,Wrobel-Kuhl K,et al.Mitochondrial metabolism following bilateral cerebral ischemia in the gerbil.Ann Neurol,1977,1:519.
       
       ［6］ Sciamanna MA,Zinkel J,Fabi AY，et al.Ischemic injurytorat forebrain mitochondria and cellular calcium homeostasis.Biochim Biophys Acts,1992,1134:223.
       
       ［7］ 傅建华,杜贵友.天麻促智颗粒对反复脑缺血再灌小鼠脑组织递质性氨基酸含量的影响［J］.中国中药杂志,2001,26(4)：269.
       
       ［8］ 殷 凤,祝寿芬,郭玲琳,等.复方当归饮对大鼠及心脑血管缺血性疾病患者血液流变学的影响［J］.山西医科大学学报,2001,32（2）：149.
       
       ［9］ 王秋华,蒋玉凤,汪 芸,等.丹酚酸B对低血压小鼠脑缺血能量代谢的影响［J］.北京中医药大学学报，2006，12（29）：820.
       
       ［10］ 张博生,徐 运.中药复方对缺血鼠脑和血中氨基酸变化的影响［J］.中医药学报,1997,4：48.
       
       ［11］ 李建生,张卫红,赵 晶,等.中药对老龄大鼠脑缺血再灌注单胺神经递质的影响［J］.辽宁中医杂志,2001,28（1）:56.
       
       ［12］ 刘志龙,宋含平,邓常青,等.补阳还五汤对沙鼠脑缺血损伤细胞凋亡的影响及机理研究［J］.广州中医药大学学报,2000,17（4）:318.
       
       ［13］ 杨风杰,李申影,李建生,等.补肾活血方对老龄大鼠脑缺血再灌注神经肽Y与神经降压素代谢的影响［J］.山东中医杂志,2001,20（1）：35.
       
       ［14］ 王 键,许冠荪,李玉梅,等.脑络通对脑缺血损伤防治作用的实验观察［J］. 中国中医基础医学杂志,2001,7（2）:26.