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       【摘要】 
       目的探讨槐花中黄酮类化合物芦丁的提取工艺和槐花的炮制储存对槐花中芦丁的影响。方法考察单因素水平基础上进行正交设计提取槐花中芦丁；比较分析不同地点槐花、市售储藏槐花与槐花炭中芦丁的含量。结果槐花中芦丁提取最佳工艺条件是:A2B2C3,即2倍量60%乙醇回流3次，2 h/次。比较不同生长地点槐花与槐花炭中芦丁含量表明，光照好的东风渠边槐花中芦丁含量最高（13.24%）,新鲜槐花中芦丁含量普遍比市售储藏槐花高，烘干品比阴干品中高，炮制后的槐花炭中含量最低（2.34%）。结论槐花采摘后应立即高温110℃杀青有利于芦丁的保护，储藏期间尽量通风干燥，栽培种植宜选择阳光好的空旷地。该实验结果为进一步开发和利用槐花提供了理论依据。
       【关键词】  槐花 芦丁 醇回流法 正交实验 储藏栽培
       Study on the Extraction Technology of Rutin from Sophora japonica.L
       LEI Ningfei, SANG Shihua, PENG Shuming, SONG Leiting
       (College of Materials and Chemistry & Chemical Engineering, Chengdu University of Technology, Chengdu 610059,China)
       Abstract:ObjectiveTo investigate the best extraction technology of rutin and processing storage.MethodsA single factor and orthogonal design experiment was performed to analyze the content of rutin from different locations, commercial storage and pagodatree flower carbon. ResultsThe optimal technology condition was  A2C2B3, that is, twice volume of 60% alcohol and refluxing three times, two hours once. Comparing with different sites, storaged  and pagodatree flower charcoal , the results showed that rutin content of Dongfeng River was the highest (13.24%). Rutin content in fresh flower was higher than that in commercial products, drying in the oven higher than in the shade. Pagodatree flower charcoal was the lowest (2.34%). So the  storage of Sophora japonica L. should fix a high temperature of 110℃ immediately after picking and ventilation dry storage, planting open land of  good sunshine.ConclusionThe results provide a theoretical basis for further development and use of S. japonica. L.
       Key words:Sophora japonica.L；   Rutin；  Circumfluent alcohol；  Orthogonal experiment；  Storage and planting
       黄酮类物质(芦丁)广泛存在于槐花、桑叶、水芹、银杏叶、苦荞麦、小蓟、红松松针、新疆雪莲等大多药用植物中［1～5］，具有抗心肌缺氧、缺血、抗心律失常、降低血清胆固醇、抑制血小板集聚、抗溃疡、抗肿瘤、抗炎、抗过敏、抗衰老、抗辐射、抗病毒和增强免疫力等功能，是治疗缺血性心脏病、心绞痛、慢性心功能不全、高血脂和预防动脉硬化、心机梗塞、脑血栓等疾病的天然绿色药物［4］。
       槐花为豆科植物槐Sophora Japonica.L的干燥花及花蕾,我国大部分地区都有生长。四川有着悠久种植槐树的历史。丘陵地带、房前屋后、山坡上都广泛种植。槐花中含有丰富的芸香甙(芦丁)、三萜皂苷、槐花米甲素、乙素、丙素等多种物质［2］。现代医学证明槐花具清肝泻火、清热凉血，增强心脏收缩、减少心脏搏动次数的功能,是高原缺氧人群的最佳医疗保健品。槐花提取液可浓缩成膏状物,也可直接将其添加到保健饮料、糖果、绿豆羹、饼干或口服液中,作为保健食品、营养食品和功能食品的原料, 也可作为化妆品的添加剂，能有效改善皮肤弹性。因此槐花具有较高的食用、药用、保健价值［1］。
       本文探讨了槐花中芦丁醇回流法的最佳提取工艺，并对不同生长地点的新鲜槐花和市售储藏槐花以及烘干品、阴干品与炮制品进行比较，旨在为深入开发和利用槐花提供理论依据。
       1  材料与仪器
       1.1  材料
       成品槐花购于成都市五块石药材市场；新鲜槐花采于成都理工大学马公馆旁和东风渠边；芦丁标准品购于成都市药检所；NaNO2，Al(NO3)3,NaOH,盐酸,乙醇 (均为A.R级)。
       1.2 仪器
       紫外分光光度计Genesys10；电子分析天平；旋转蒸发器R-201型；酸度计；索氏提取器；恒温水浴锅等。
       2  方法
       2.1  原理利用芦丁与Al生成黄色络合物，在此条件下测定吸光度，得出黄酮类化合物的含量。
       2.2  待测液的配制及黄酮类化合物的测定将5 g槐花回流提取浓缩后的提取液转至100 ml容量瓶中,用乙醇定容,摇匀静置。取0.20 ml提取液置于10 ml容量瓶中,用30%乙醇补充至5 ml,加入0.28 ml NaNO2 (1∶20),摇匀放置5 min后加入0.28 ml Al(NO3)3 (1∶10),6 min后再加入2.00 ml 1 moL/L的NaOH摇匀,用30%乙醇定容,静置10 min后于500 nm处测定吸光度,试剂为空白［4］。
       总黄酮芦丁含量(%)=［(Y×10×100)/(0.2×5×1000)］×100%=Y×100%
       Y:根据所测溶液吸光值,用回归方程计算出的相对应的总黄酮类物质含量。
       3  结果
       3.1  标准曲线绘制准确称取芦丁50 mg,定容于100 ml容量瓶，精确吸取0，2，4，6，8，10 ml的芦丁标液于100 ml容量瓶中,用30%的乙醇加至50 ml左右,加0.70 ml 5% NaNO2，0.70 ml 10%的Al(NO3)3和5.00 ml 4%的NaOH。每次加完后放置5 min再加第2种试剂，最后用30%的乙醇定容至100 ml,在500 nm处测吸光值,试剂为空白。分别测定吸光度。得吸光度-浓度回归曲线为Y = 0.098 53A-0.000 280 4,R2 = 0.998 8。
       3.2  槐花中芦丁提取影响因素考察
       3.2.1  乙醇浓度对槐花中芦丁提取的影响分别用20%，40%，60%，80%的乙醇，以60 ml为1倍溶媒量对5g槐花进行回流提取1 h,提取液按“2.2”项方法处理测定吸光值，重复3次取其平均值。结果表明乙醇浓度对槐花中黄酮类化合物芦丁提取影响较大（见表1），用20%乙醇提取时所得黄酮类化合物芦丁最少，随着浓度的增加，提取率也相应增加，但当乙醇浓度超过60%后影响不大。表1  乙醇浓度对槐花中芦丁提取的影响（略）
       3.2.2  不同溶媒量对醇提法提取效果的影响分别用1，2，3倍量的60%乙醇对槐花5 g进行回流提取1h, 提取液按“2.2”项下进行处理测定吸光值，重复3次取其平均值。结果（见表2）表明不同溶媒量对槐花中黄酮类化合物的浸出有一定影响。2倍溶媒量提取所测得芦丁含量大于1倍溶媒量，但与3倍溶媒量差异不大。表2  不同溶媒量对槐花中芦丁提取的影响（略）
       3.2.3  不同提取时间对槐花中芦丁提取的影响以2倍溶媒量， 60%乙醇分别对槐花5 g提取1，2，3，4 h。从表3可知回流2 h的提取效果最好,若时间再增加,吸光度反而会降低,这可能是由于回流时间太长,有部分乙醇被挥发,而导致沸点逐渐增大,从而破坏某些黄酮类化合物结构［5］。表3  回流提取时间对槐花中芦丁提取的影响（略）
       3.2.4  正交设计确定槐花中芦丁提取最佳条件在单因子实验的基础上，为全面考察醇提法影响因素,设计了溶媒量、溶媒浓度和提取次数的3因素3水平正交实验。见表4。表4  (L933)的醇提法正交实验结果及分析（略）
       方差分析:表4中，K1J表示第J列中对应水平Ⅰ的实验指标数据之和.Ⅰ=1，2，3.例如，A列，K11=6.54+6.98+7.04=20.56；C列，K13=6.98+4.54+6.90=18.42。
       TIJ =KIJ/3,Ⅰ=1、2、3。RJ=max(T1J,T2J,T3J)-min(T1J,T2J,T3J)，RJ越大表明该因子对实验指标作用越大，也越重要，在每个因子中，Max(T1J,T2J,T3J)相应的水平就为最佳水平。从表4可知： ①由极差RJ的大小可知各因子重要性顺序为：B>C>A即:乙醇浓度>提取次数>溶媒量。②由Max(T1J,T2J,T3J)相应的各因子的水平，得最优工艺条件，即为：A2B2C3,即用2倍量60%乙醇回流3次(2 h/次),此法提取的槐花中总黄酮类化合物芦丁含量为9.66%。
       3.3  新鲜槐花、槐花炭与购买成品槐花中芦丁含量比较传统经验认为槐花质量以黄绿者为佳，而且槐花的颜色与其芦丁含量有密切的关系。阴干槐花不仅黄绿色彩度比烘晒品低，而且芦丁含量也比烘晒品低。
       
       将马公馆旁刚采摘新鲜槐花分成两份，1份做阴干品实验，另外1份与东风渠边槐花110℃烘10 min后再60℃烘干至恒重。
       槐花炭制备：将马公馆旁刚采摘新鲜槐花置于锅中炒至焦黑色、内部焦黄色时，喷淋少许清水灭火星，取出晾干［6］。按照最佳工艺条件测定其黄酮类物质芦丁的含量。
       从图1可以看出新鲜槐花中黄酮类化合物芦丁含量比市售成品槐花高，东风渠边槐花中芦丁含量比马公馆旁槐花中芦丁含量高（13.24%），炮制品槐花炭中芦丁含量最低仅2.34%。市售槐花放置时间过长，已经存放至少1年以上，新鲜槐花色泽好为黄绿色，而经过存放后变为暗黄色，在此过程中由于潮解使得一部分芦丁溶于水而丢失。槐花在贮藏过程中一定要注意干燥、通风以免其芦丁的损失，降低其临床疗效。烘干品中芦丁含量比阴干品高，分析其原因可能为烘干品经110℃烘10 min处理使分解芦丁的芸香酶失活，避免了芦丁水解［3］，因此在槐花采摘后尽快杀青烘干对于槐花药用成分芦丁的保护是非常必要的。马公馆旁槐花芦丁含量要低于东风渠边，主要是由于东风渠边通风光照要好于马公馆旁（东风渠边光照好，无遮挡，而马公馆旁由于建筑物较多，只有下午阳光照射），而槐花是喜阳植物，良好的光照使其有效成分芦丁含量较高。因此在槐花栽培种植上应该尽量选取通风光照好的条件进行栽培。槐花炒炭以后功能发生了很大改变，生品以清肝泻火，清热凉血见长。槐花炭清热凉血作用极弱，具涩性，以止血力胜［6］。槐花炒炭过程中于炒炙温度高，炭化程度重，芦丁含量大幅度减少，也是其清热凉血作用极弱的原因之一。
       3  结论
       在单因素分析的基础上设计正交实验对槐花中黄酮类化合物芦丁进行提取，其最佳提取工艺条件是:A2B2C3,即用2倍量60%乙醇回流3次，2 h/次。
       东风渠边槐花中芦丁含量最高13.24%,新鲜槐花中黄酮类化合物芦丁含量比市售成品槐花高，110℃烘干品比阴干品中高，炮制品槐花炭中芦丁含量最低，仅2.34%。说明槐花采摘后尽快用高温110℃进行杀青（杀死芸香酶活性）有利于芦丁的保护，储藏期间尽量通风干燥，栽培种植尽量选择阳光好的空旷地。
       【参考文献】
         　　［1］曾祥群.葛根总黄酮提取工艺［J］.食品工业科技,2000，3:33.
       
       ［2］陈运中.苦荞麦黄酮含量的测定［J］.食品科学,1998，3:54.
       
       ［3］毕丽君.水芹中总黄酮类化合物最佳提取工艺研究［J］.食品科学,1999，12:35.
       
       ［4］国家药典委员会.中国药典［S］.北京：化学工业出版社，2000：789.
       
       ［5］韩公羽,沈企华.植物药有效成分的研究与开发［M］.杭州：杭州大学出版社，1991：576.
       
       ［6］罗先本,彭冬青.中药炒炭法探要［J］.中国中药杂志，1999，24(2)：95.