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       【摘要】 
       目的研究砂生槐种子水提取物对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法以S180荷瘤小鼠为研究对象，砂生槐种子水提取物不同剂量连续灌胃给药10 d，分别测定其抑瘤率、胸脾指数、自然杀伤细胞、白细胞介素-2（IU-2）水平。结果砂生槐种子水提取物在1 200 mg/kg ，2 400 mg/kg 剂量组时，其抑瘤率分别为34.9%，41.4%；用药灌胃后，白细胞介素-2（IU-2）含量及NK细胞杀伤活性均显著提高（P＜0.01）。结论砂生槐种子水提取物可通过提高荷瘤小鼠免疫功能而发挥抗肿瘤作用。
       【关键词】  砂生槐种子水提取物 抗肿瘤 免疫活性调节
       The Effect of Water Extract from Sophora  moorcroftiana (SMSWE) on Immune Function in Tumor-bearing Mice
       GUO Jun,  MA Xingming,AN Fangyu,TIAN Weihua
       (Department of Immunology，Institute of Basic Medical Science,Lanzhou University,Lanzhou 730000 China；2.The Key Laboratory of Now Druy,Lanzhou University,Lanzhou 730000 China)
       Abstract:ObjectiveTo study the effect of water extract from Sophora moorcroftiana (SMSWE) on immune function in tumor-bearing mice. MethodsS180-bearing mice were used and the inhibitory rate of tumor, indexes of thymus and spleen ,activity of NK and the level of IL－2 were detected. Results1200 and 2400 mg/kg SMSWE could inhibit the growth of S180-bearing mice and inhibitory rates were 34.9% and 41.4% respectively. The level of IL-2 and activity of NK were significantly higher than those in S180－bearing coutrol group (P＜0.01）.ConclusionSMSWE has anti -tumor effect and can enhance the immune function in S180-bearing mice.
       Key words:Water extracts from Sophora moorcroftiana seed；  Anti-tumor effect ,   Activity of immune
       砂生槐（Sophora  moorcroftiana,SM）泛指豆科槐属，又名西藏“狼牙刺”“刺紫”。据报道，砂生槐具有抑菌、抗病毒、抗心律失常、调节免疫等多种药理学作用［1］。以往对其营养成分的分析［2，3］的报道较为多见，马兴铭等［4］体外实验结果显示，砂生槐种子生物碱能诱导SCG-7901细胞凋亡的作用，但对砂生槐种子水提取物（Water extracts from Sophora moorcroftiana seed，SMSWE）抗肿瘤作用方面,尤其是体内抗肿瘤作用的研究尚未见报道。本实验探讨砂生槐种子水提取物对小鼠免疫功能的影响。现报道如下。
       1  材料与仪器
       1.1  药物  
       砂生槐种子水提取物由兰州理工大学杨云裳博士馈赠。
       1.2  动物及瘤株
       1.2.1  动物  
       昆明种小鼠（合格证：医动字第14-005号），清洁级，6～8周龄，体重（22±2）g,雌雄各半，由兰州大学医学实验动物中心提供。
       1.2.2  瘤株  
       小鼠S180肉瘤腹水型细胞株和YAC-1细胞株由兰州大学药理研究所提供，由本研究所保存。
       1.3  仪器及试剂
       1.3.1  仪器  
       YJ-875超净工作台（苏州净化设备公司），DG-3022酶联免疫测定仪（华东电子医疗设备厂），CO2培养箱：美国杜邦公司产品。
       1.3.2  试剂 
       RPMI-1640培养基由美国Invitrogen公司提供；小牛血清购自杭州四季青生物有限公司；白细胞介素-2（IL-2）放射免疫检测试剂盒购自华美生物工程公司；环磷酰胺（CTX）购自江苏恒瑞医药股份有限公司（批号06050821）；分析纯二甲亚砜（DMSO）为金山化工厂产品。
       2  方法
       2.1  肿瘤模型的建立  
       将接种肿瘤细胞后7 d生长良好的小鼠，颈椎脱臼处死，置75%的酒精中浸泡10 min，置超净工作台，从腹腔抽出的乳白色腹水，用无菌生理盐水按1∶4比例配制成癌细胞悬液（2×106/ml）。将该肿瘤细胞悬液对实验小鼠进行造模，每只小鼠右腋窝皮下接种0.2 ml。以上均在无菌环境中操作。
       2.2  分组及给药 设6组，每组10只，雌雄各半。设一组为不接种瘤株的生理盐水正常对照组；余50只小鼠每只右腋皮下接种0.2 ml癌细胞悬液，24 h后随机分为5组，即荷瘤对照组，环磷酰胺对照组及砂生槐种子水提物600，1200，2400 mg/kg 3个剂量组。正常对照组和荷瘤空白对照组用生理盐水灌胃，环磷酰胺对照组腹腔注射环磷酰胺20 mg/（kg·d），连续给药5 d，砂生槐种子提物3个剂量组于接种第2天开始灌胃给药，1次/d，连续10 d，第11天处死小鼠。
       2.3  测肿瘤抑制率 停药后第2天处死小鼠，剥离完整肿瘤组织，电子天平称量瘤体湿重（精确到0.01 g）并计算肿瘤生长抑制率。
       抑瘤率（%）=荷瘤对照组平均瘤重-给药组平均瘤重荷瘤对照组平均瘤重×100%
       肿瘤组动物平均质量小于1表示肿瘤生长不良，实验组小鼠死亡率超过20%表示药物所致毒性。
       2.4  观察对小鼠免疫器官的影响。灌胃给药结束后次日解剖小鼠取出胸腺，脾脏，计算脏器重量、脏器指数。脏器指数=免疫器官质量/体质量×1000
       2.5  荷瘤小鼠NK细胞杀伤靶活性的测定  常规制备脾脏细胞，制成浓度为5×106个/ml的细胞悬液。与96孔板每孔中分别加入100 μl脾细胞悬液和（YAC-1细胞，靶细胞（YAC-1细胞，浓度为1×106个／ml,效靶比值为50：1），设靶细胞自然释放组和最大释放对照组（YAC-1细胞100 μl+1%NP-40 100 μl）。每样本设3个重复孔，培养16 h后，吸出各孔上清100 μl加入另一细胞培养板中，置37℃ 10 min,每孔加入新鲜配置的低物液100 μl，室温、避光反应10～15 min,再加入1.0 mol/L柠檬酸终止液30 μl，酶标分析仪570 nm波长处测定A值，按以下公式计算NK细胞杀伤靶活性。NK细胞活性（%）＝（实验组A-自然释放组A）/（最大释放组A-自然释放组A）×100%。
       2.6  细胞因子测定采用小鼠白细胞介素-2放免试剂盒，严格按照说明书操作。
       2.7  统计学方法
       用SPSS10.0统计软件分析。检测结果采用±s表示，各组间均数比较采用单因素方差分析，实验组与对照组间均数比较用独立样本t检验。
       3  结果
       3.1  抑瘤率实验显示，砂生槐种子水提取物1 200 mg/kg，2 400 mg/kg剂量组对S180小鼠的生长具有一定抑制作用，抑瘤率分别为34.9%，41.4%。与荷瘤对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结果见表1。表1  SMSWE对S180荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用（略）
       3.2   对胸腺指数及脾脏指数的影响从表2可以看出用药各剂量组的胸腺和脾脏指数与荷瘤对照组比较无显著差异（P＞0.05）表2  SMSWE对S180荷瘤小鼠胸腺指数、脾脏指数的影响(略)
       3.3  SMSWE各剂量组对S180荷瘤小鼠IL-2分泌量、NK细胞杀伤靶活性的影响结果（见表3）。由表3可见，荷瘤小鼠的NK细胞杀伤活性与正常对照组比较普遍降低。荷瘤对照组的NK细胞杀伤活性和血清IL-2分泌量与正常对照组比较明显降低，SMSWE 2400 mg/kg 剂量组NK细胞杀伤活性显著高于荷瘤小鼠对照组（P﹤0.01）而血清IL-2分泌量1200 mg/kg，2400mg/kg剂量组明显高于荷瘤对照组。表3  SMSWE对S180荷瘤小鼠细胞因子IL-2 、NK细胞杀伤靶活性的影响（略）
       4  讨论
       肿瘤患者常伴有免疫系统机能低下，当肿瘤细胞侵入机体时，会对机体造成免疫功能抑制，许多中药具有抑制肿瘤生长作用［5］，且毒副作用较低，显示了较好的抗瘤效果。本实验选取的砂生槐是我国西藏高原一种特有植物物种，以往李玉祥等［2］对其营养成分进行了分析，而对砂生槐药用价值研究得比较少，根据《中国药典》记载砂生槐具有清热利湿作用。而《中国医学百科全书·藏医学》记载［1］：西藏砂生槐种子有消炎解毒等作用。以往进行的体外实验研究已证实，砂生槐种子水提取物对培养的多种人肿瘤细胞具有杀伤作用，马兴铭等［4］研究了其药物对SGC－7901胃癌细胞株增殖有明显的抑制作用。基于此，作者对砂生槐种子水提物进行了体内抗肿瘤实验，结果显示砂生槐种子水提物具有明显的体内抗肿瘤作用。实验表明，在1 200 mg/kg，2 400 mg/kg剂量组对S180荷瘤小鼠有明显抑瘤效果，抑瘤率可达34.9%，41.4%。同时我们的实验结果表明，荷瘤小鼠会导致胸腺缩小，胸腺指数和脾脏指数较正常小鼠低［6］，但与荷瘤对照组比较无统计学差异。SMSWE在2400 mg/kg剂量组能使NK细胞杀伤靶活性及IL-2分泌量提高，说明SMSWE可改善荷瘤小鼠的免疫指标，提高机体的抗肿瘤能力,并能改善荷瘤小鼠的免疫失衡状态［7］。SMSWE可通过增强机体的细胞免疫和活化免疫细胞分泌细胞因子参与抗肿瘤作用，达到杀灭肿瘤细胞的目的。
       综上所述，砂生槐种子水提物对S180荷瘤小鼠具有明显抗肿瘤效果，且能调节荷瘤小鼠的免疫活性，不失为一种较为理想安全的抗癌药物，值得进一步研究。
       【参考文献】
         　　［1］中国医学百科全书编委会.中国医学百科全书·藏医学，第1版［M］.上海：上海科技出版社，1999：204.
       
       ［2］李玉祥. 西藏砂生槐种子的生物学特性及综合利用［J］.自然资源学报,1993，8（5）：75.
       
       ［3］许毓英,王 涛,王 错,等.西藏砂生槐种子营养成分的初步研究［J］.自然资源学报,1992,7（4）：379.
       
       ［4］马兴铭,李红玉,尹少甫,等.砂生槐种子生物碱诱导SCG-7901细胞凋亡的实验研究［J］.中草药,2004，26（8）：654.
       
       ［5］单保恩,张金艳,杜肖娜,等.白花蛇舌草的免疫学调节活性和抗肿瘤的活性［J］.中国中西医结合杂志，2001，20（5）：370.
       
       ［6］Rowley PT,Tabler M Telomerase inhibitors［J］.Antiancer Res，2000,20(6B)：4419.
       
       ［7］Graves DT,cochran D.The contribution of interleukin-1 and tumor necrosis factor toperiodontal tissue destruction［J］.J periodontol,2003,74(3)：391.