干姜醋酸乙酯提取物抗心律失常作用研究
作者：沈云辉，陈长勋，徐姗珺
作者单位：上海中医药大学，上海 201203
《时珍国医国药》 2008年 第5期
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【摘要】
目的探讨干姜醋酸乙酯提取物的抗心律失常作用。方法分别用氯仿，乌头碱，哇巴因三种药物制备三种心律失常模型，观察干姜醋酸乙酯提取物对心律失常的拮抗作用。结果干姜醋酸乙酯提取物可降低室颤发生率，提高引起室性早搏、心搏停止的药物用量。结论干姜醋酸乙酯提取物具有一定抗心律失常作用。
【关键词】 干姜醋酸乙酯提取物；抗心律失常
Antiarrhythmic Effect of Ethyl Acetate Extract of Radix Ginger
SHEN Yunhui, CHEN Changxun, XU Shanjun
(Shanghai University of TCM, Shanghai 201203, China)
Abstract：ObjectiveTo investigate the antiarrhythmic effect of ethyl acetate extract of Radix Ginger(EAERG). MethodsThe arrhythmic animal models were induced by chloroform, aconitine, ouabain, and the antiarrhythmic effect of EAERG was obsoued. ResultsEAERG could decrease the rate of ventricular fibrillation, and increase the drug doses in inducing arrhythmia.ConclusionEAERG has certain antiarrhythmic effect.
Key words：Ethyl acetate extract of Radix Ginger; Antiarrhythmic
干姜为姜科多年生草本植物姜Zingiber officinale Rosc.的干燥根茎。我们在前期研究四逆汤中干姜对附子的解毒作用时发现，干姜的醋酸乙酯层提取物可能有体内拮抗乌头碱毒性的作用［1］，针对此，我们进一步进行了其抗心律失常作用的药理研究。
1 器材与方法
1.1 材料
1.1.1 试剂与药品
干姜Zingiber officinale Rosc.购自上海华浦中药饮片有限公司，经本校生药教研室赵志礼教授鉴定品种无误；盐酸胺碘酮片（0.2 g/片），为宁波大红鹰药业股份有限公司产品；苯妥英钠片（100 mg/片），为中美合资上海辛帕斯制药有限公司产品；乌头碱（Aconitine），E.Merck公司产品；哇巴因（Ouabain），E.Merck公司产品；氯仿，国药集团化学试剂有限公司产品；醋酸乙酯，上海试剂一厂产品。
1.1.2 仪器
LABOROTA-4001旋转薄膜蒸发仪，上海医用分析仪器厂产品；RM6280C型多道生理信号采集处理系统，成都仪器厂产品；AJ5803型电脑微量注射泵，上海安洁电子设备有限公司产品。
1.1.3 动物
昆明种小鼠，雌雄各半，体重25～30 g，合格证号SCXK（沪）2002-0010；SD大鼠，雌雄各半，体重180～220 g，合格证号SCXK（沪）2002-0010。以上大、小鼠购自中国科学院上海实验动物中心。豚鼠，雌雄各半，体重250 g左右，购自上海申旺实验动物养殖场，合格证号，SCXK（沪）2002-0011，上海中医药大学实验动物中心清洁级饲养。
1.2 方法
1.2.1 干姜醋酸乙酯提取物的制备
取干姜200 g加入60%乙醇1 000 ml，浸泡过夜。次日，水浴回流干姜醇溶液1.5 h，收集醇溶液。于残渣中再加入95%乙醇600 ml，水浴回流1.5 h，合并两次醇溶液。蒸馏醇溶液，回收乙醇，得姜稠物400 ml。加入醋酸乙酯200 ml（分4次，50 ml/次）于分液漏斗中萃取，合并4次萃取液，蒸干有机溶剂，得醋酸乙酯提取物。
1.2.2 氯仿引起小鼠心室颤动法
小鼠随机分为干姜醋酸乙酯大剂量组（10只）、小剂量组（10只）、盐酸胺碘酮组（10只）、生理盐水对照组（预筛组20只）。分别灌胃给予干姜醋酸乙酯大剂量23.4 g/kg（生药），干姜醋酸乙酯小剂量11.7 g/kg（生药），盐酸胺碘酮77 mg/kg或等体积生理盐水。1次/d，连续给药3 d。
实验前1天晚上禁食不禁水12 h，末次给药30 min后逐一将小鼠放入含有3～4 ml氯仿的棉球（以后每换一只小鼠加入1 ml氯仿）倒置的600 ml烧杯内，至呼吸停止立即取出剖开胸腔，肉眼检查心室颤动发生率。上述各组的实验结果列表比较，并求出用药组与阳性药组、生理盐水对照组的P值（卡方检验）［2］。
1.2.3 乌头碱诱发大鼠心律失常法
大鼠随机分为干姜醋酸乙酯大剂量组、小剂量组、盐酸胺碘酮组、生理盐水对照组，每组10只。十二指肠给药，分别为：干姜醋酸乙酯大剂量16 g/kg（生药），干姜醋酸乙酯小剂量8 g/kg（生药），盐酸胺碘酮54 mg/kg或等体积生理盐水。给药15 min后推注乌头碱生理盐水溶液。
实验前1天晚上禁食不禁水12 h，以戊巴比妥钠（30 mg/kg）麻醉后仰位固定，开腹，十二指肠给药。切开左颈部一侧颈外静脉，插入PVC管后固定之。然后将此PVC管与盛有10 μg/ml乌头碱溶液恒速注射器之输出端相连。待稳定后，描记实验前正常心电图Ⅱ导联。给药15 min后以0.8 μg/min速度滴注乌头碱。用心电示波器连续监视，并记录整个心电图的变化过程及心跳停止时间，换算成乌头碱的中毒剂量，给药组与模型组进行组间比较t检验［2］。
1.2.4 哇巴因诱发豚鼠心律失常法
豚鼠随机分为干姜醋酸乙酯大剂量组8只，干姜醋酸乙酯小剂量组8只，苯妥英钠组8只，生理盐水对照组8只。十二指肠给药，分别为：干姜醋酸乙酯大剂量7 g/kg（生药），干姜醋酸乙酯小剂量3.5 g/kg（生药），苯妥英钠250 mg/kg或等体积生理盐水，给药15 min后以3 μg/min速度推注哇巴因生理盐水溶液。用心电示波器连续监视，并分别记录出现室性早搏、室性心动过速、心室颤动及心跳停止时间，换算成哇巴因的中毒剂量，给药组与模型组进行组间比较t检验［2］。
1.2.5 统计方法
计量资料数据采用±s表示,组间比较进行t检验，计数资料采用χ2检验。
2 结果
2.1 干姜醋酸乙酯提取物抗氯仿引起小鼠心室颤动 结果表明，本批小鼠室颤率为85%，符合实验要求（室颤率大于80%）。大剂量给药组小鼠室颤率明显减小（P<0.001），表明干姜醋酸乙酯提取物有抗氯仿诱发小鼠室颤的作用（见表1）。
2.2 干姜醋酸乙酯提取物抗乌头碱诱发大鼠心律失常 结果显示，干姜醋酸乙酯提取物小剂量组、大剂量组及盐酸胺碘酮均不增加诱发室性早搏（VP）的乌头碱的用量，但均能明显增加引起心搏停止（CA）的乌头碱的用量。在受试剂量范围内，干姜醋酸乙酯提取物作用强度与阳性药盐酸胺碘酮相当，表明其有一定抗乌头碱诱发大鼠心律失常的作用。结果见表2。表1 干姜醋酸乙酯提取物对氯仿诱发小鼠室颤的影响(略)表2 干姜醋酸乙酯提取物对乌头碱诱发大鼠心律失常的影响(略)
2.3 干姜醋酸乙酯提取物抗哇巴因诱发豚鼠心律失常 结果显示，干姜醋酸乙酯提取物大剂量组能明显增加引起室性早搏（VP）、心搏停止（CA）的哇巴因的用量，与生理盐水对照组比较有显著性差异，其作用与苯妥英钠相似，表明干姜醋酸乙酯提取物有抗哇巴因诱发豚鼠心律失常作用。结果见表3。表3 干姜醋酸乙酯提取物对哇巴因诱发大鼠心律失常的影响(略)
3 讨论
通过前期实验HPLC分析结果，我们推测干姜的醋酸乙酯层提取物可能有体内拮抗乌头碱毒性的作用［1］。所以我们应用氯仿诱发小鼠心室纤颤、乌头碱诱发大鼠心律失常、哇巴因诱发豚鼠心律失常3种经典模型，以心室纤颤（VF）、室性早搏（VP）及心脏停搏（CA）为观察指标，考察干姜的醋酸乙酯提取物是否有抗心律失常作用。
在这几种模型中，氯仿诱发小鼠心室纤颤与植物性神经及其递质释放紊乱有关；静脉注射乌头碱可使心肌细胞钠通道开放，加速钠离子内流，促使细胞膜去极化，提高心房传导组织和房室束-浦氏纤维等快反应细胞的自律性，形成一源性或多源性异位节律，缩短不应期而导致心律失常；哇巴因可抑制心肌细胞膜上Na+，K+-ATP酶，使Na+外流和K+内流减少，因而导致心肌细胞内缺K+。使细胞的静息电位或最大舒张期电位减少，因此提高自律性，减慢传导速度而引起心律失常［2～4］。上述3种心律失常模型的机制各不相同，但干姜的醋酸乙酯提取物可显著抑制这3种不同类型的心律失常，说明其抗心律失常的作用可靠。干姜醋酸乙酯提取物可拮抗乌头碱致心律失常的作用未见有类似报道，其抗心律失常的机制可能是多环节的，尚需深入研究，在进一步分离纯化的同时进行作用机制的分析、探索有可能发掘出具有抗心律失常作用的有效药物。
【参考文献】
［1］徐姗珺，陈长勋，高建平.干姜与附子配伍减毒的物质基础探索［J］.时珍国医国药，2006，17(4)：518.
［2］徐叔云,卞如濂,陈 修. 药理实验方法学，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，1991:1013.
［3］张帆,王嘉陵,钱家庆,等.异莲心碱抗实验性心律失常作用及对豚鼠心肌动作电位的影响［J］.中草药,2000,31 (10)：753.
［4］张白嘉,戴瑛,王晓东,等. 快律宁胶囊抗心律失常的实验研究［J］.时珍国医国药, 2002, 13 (5) :271.