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       【摘要】 
       目的比较制首乌膨化前后二苯乙烯苷的提取率随时间的变化，确定各自最大提取率所需时间。方法用超声波分别提取膨化前后制首乌中的二苯乙烯苷，依照2005版《中国药典》方法测定不同时间提取液中二苯乙烯苷的含量，根据浓度与时间的相关性确定最佳提取时间。结果未膨化的制首乌在60 min左右二苯乙烯苷的提取率最大（3.31%），而膨化制首乌为20 min左右（3.25%）。结论膨化对制首乌中二苯乙烯苷的含量影响不大，但能够使二苯乙烯苷的提取速率明显加快。
       【关键词】  制首乌；膨化；二苯乙烯苷；高效液相色谱法
       Study on the Influences of the Extraction Rate of 2, 3, 5, 4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside in Radix Polygonum Multiflorum Preparat of Expanding Process
       YE Xin-fa，YU Chao，CAI Yanfeng,CAI Zhenghong*
        
       (School of Pharmacology, Southwest Jiaotong University, Emei,Sichuan 614202, China)
       Abstract：ObjectiveTo confirm the maximal extracting rate time of 2, 3, 5, 4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside in expanded and unexpanded Radix Polygonum Multiflorum Preparat by comparing the extracting rate changes by time. Methods2, 3, 5, 4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside was extracted from expanded and unexpanded Radix Polygonum Multiflorum Preparat by ultrasound and their extracting rate at different time was also determined in reference to the Codex Pharmacopoeia of 2005th edition. Their best extraction time was determined by their relevance of concentration and time. ResultsThe extraction rate of 2, 3, 5, 4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside from unexpanded Radix Polygonum Multiflorum Preparat got to the maximum (3.31%) at about 60 minute and that of expanded one at about 20 minute for 3.25%. ConclusionExpanding process has a small influence on the content of 2, 3, 5, 4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside in Radix Polygonum multiflorum Preparat, but its extraction rate is increased rapidly.
       Key words：Radix Polygonum Multiflorum Preparat；  Expanding；  2, 3, 5, 4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside；  HPLC
       
       何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根, 是常用中药。制何首乌Radix Polygonum Multiflorum Preparat温补不燥，长期服用安全，具有防老抗衰及防治动脉粥样硬化、高血压病、糖尿病等中老年疾病的作用。何首乌中的最重要的二苯乙烯类化合物是2, 3, 5, 4′ -四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（二苯乙烯苷，图1）。《中国药典》2005年版制首乌项下即是以二苯乙烯苷作为定量指标［1］。作者参考文献方法［2］，对制首乌进行膨化处理，并参照《中国药典》2005版，利用超声提取技术对制首乌膨化前后二苯乙烯苷的提取速率进行了研究，为膨化技术在何首乌加工中的应用提供科学依据。
       1  器材
        高效液相色谱仪（美国Waters）、FA1004型精密电子天平、SK8200LH超声仪、单螺杆挤压食品膨化机、乙腈（色谱纯）、乙醇（分析纯）、超纯水、制首乌（购自四川省峨眉山市药房）、二苯乙烯苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号110844-200505）。
       2  方法
       2. 1  二苯乙烯苷的含量测定
       2. 1.1  色谱条件 色谱柱为YMC-PackODS-A C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-水（25∶75）；流速0.6 ml/ min；检测波长320 nm；柱温30℃。
       2.1.2  对照品溶液的配制精密称取1.5 mg二苯乙烯苷对照品，置于5 ml容量瓶中，加50%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配成浓度为0.3 mg/ml的对照品溶液。
       2.1.3  供试品溶液的制备精密称取制首乌、膨化制首乌粉末（过4号筛）各20.000 g，置于5 000 ml圆底烧瓶中，准确加入50%乙醇2 500 ml，安装冷凝管后在超声仪中常温超声提取，分别于10，20，30，40，50，60，70，80 min从烧瓶中各取2 ml提取液，用0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液即得供试品溶液。
       2.1.4   测定方法分别精密吸取对照品溶液与各供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪中测定，每个样品取峰面积的精密度RSD＜3%的3次测定结果计算二苯乙烯苷含量的平均值。
       3  结果
       3.1  标准曲线的绘制分别精密吸取二苯乙烯苷对照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0μl，按上述色谱条件进行色谱分析，以进样量(X)为横坐标，以色谱峰面积(Y)为纵坐标，经回归处理，得到回归方程为Y =1 299 845.76X - 181 541.88，相关系数为r = 0.999 8。结果表明二苯乙烯苷在0.6～3.0 μg范围内与峰面积线性关系良好。
       3. 2  制首乌膨化前后二苯乙烯苷的HPLC图及提取率 - 时间关系分别精密吸取制首乌、膨化制首乌供试品溶液各10μl注入高效液相色谱仪中测定（如图2），每个样品取峰面积的精密度RSD＜3%的3次测定结果计算二苯乙烯苷的平均含量。以时间为横坐标，样品中二苯乙烯苷的浓度为纵坐标绘制时间 - 浓度曲线图，见图3。
        结果表明，制首乌的提取液中二苯乙烯苷的浓度在60 min左右达最高（3.31%），而膨化制首乌只需20 min左右（3.25%），然后都随时间慢慢降低，表明膨化加工对制首乌中二苯乙烯苷的含量影响不大。按照2005版《中国药典》规定，按干燥品计算，制首乌中二苯乙烯苷的含量不得低于0.70%［1］，说明膨化技术可以用于制首乌的加工。
       4  讨论
        本实验采用常温下的超声提取方法，分时间从大量提取液中（2 500 ml）取出少量样品。虽然溶剂量在减少，但比例很小，取出的各样品能够反应提取液中二苯乙烯苷的浓度随提取时间的变化情况，故该方法可行。
        膨化加工中，制首乌要经历高温高压过程［3］，有可能使不稳定的二苯乙烯苷的含量有所降低［4］。但测定结果表明，制首乌膨化前后二苯乙烯苷的最大提取率非常接近（膨化前后分别为3.31%和3.25%），说明膨化对制首乌中二苯乙烯苷的含量影响不大，可能是膨化过程药材经历的时间很短（数秒钟）的原因。说明膨化技术完全可以用于制首乌的加工。
       
       常温下，用超声提取方法，制首乌膨化前后二苯乙烯苷的最佳提取时间分别是60 min和120 min左右，超出时间后二苯乙烯苷的提取率反而降低。说明膨化使制首乌中的二苯乙烯苷的提取速率明显加快，原因可能是膨化时水蒸气巨大的爆炸压力使制首乌细胞壁破裂，药材变得质地疏松多孔，在用溶媒提取二苯乙烯苷时由膨化前的依靠浓度差渗透的方式变为直接溶出，因而提取速率明显加快。但随着时间的增加，提取液中的二苯乙烯苷在超声作用下发生分解，从而造成提取率有所降低。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典,2005年版Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社,2005:122.
       
       ［2］吴建华,王 兰.白芍膨化炮制研究［J］.陕西中医学院学报,1995,22（3）:40.
       
       ［3］王盛民,张 英,孟建国,等. 膨化对白芍保肝作用的影响［J］.时珍国医国药,2006,17（5）:704.
       
       ［4］潘林梅, 徐小燕. HPLC法测定制首乌及降脂通脉片中2，3，5，4′-四羟基-二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量［J］.中成药,2003,25（12）:974.