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       【摘要】 
       目的观察镇咳止喘咀嚼片的主要药理作用。方法采用小鼠因氨水所致咳嗽法、豚鼠因枸橼酸所致咳嗽法观察其镇咳作用；小鼠呼吸道酚红排痰量法、大鼠毛细管排痰量法观察其祛痰作用；组胺所致豚鼠“哮喘”法观察其平喘作用。结果镇咳止喘咀嚼片可以延长小鼠因氨水所致的咳嗽潜伏期及因枸橼酸所致豚鼠的咳嗽潜伏期，同时减少咳嗽次数；可以增加小鼠呼吸道的酚红排痰量及增加大鼠毛细管的排痰量；可以对抗动物因组胺引起的“哮喘”症状。结论镇咳止喘咀嚼片具有镇咳、祛痰、平喘作用。
       【关键词】  镇咳止喘咀嚼片；镇咳； 祛痰； 平喘
       Experimental Study of  Zhenke Zhichuan Tablets  on  the Relieving  Cough  and  Expelling  Phlegm and Anti-asthma
       MA Yiming, HUANG Shifu
       （1.Dept of Pharmacology, The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University,Hefei 230022，China； 2.Anhui Institute of  Pharmacology, Hefei 230022，China）
       Abstract：ObjectiveTo observe pharmacological effects of Zhenke Zhichuan Tablets.MethodsThe cough-relieving  effect of  Zhenke Zhichuan Tablets  was  observed  by  mouse  cough  model induced  by  NH4OH  and  guine-pig  cough  model  induced  by  citric acid  with  capillary  method; observation  on  the  phlegm  expelling  effect  was  completed  by  using  phenol  red and by observing the phlegm expelling from the respiratory tract of adult mouse; the effect of anti-asthma was observed through the asthma caused by histamine.  ResultsZhenke Zhichuan Tablets could  apparently prolong the  coughing  incubation  period  and  reduce  coughing  frequency ; increase  excretion  of  phenol  red  and  phlegm  from  the respiratory  tract;resist asthma caused by histamine.ConclusionZhenke Zhichuan Tablets has a  therapeutic effect of  relieving cough  and  expelling  phlegm and anti-asthma.
       Key words： Zhenke Zhichuan Tablets；  Relieving cough；  Expelling  phlegm;  Anti-asthma
        镇咳止喘咀嚼片是由中药颗粒剂经剂型改造而成的新药，具有吸收速度快、服用方便、易于运输保存等特点，功能为清热宣肺、化痰止咳，临床上可以用于上呼吸道感染、气管炎、肺炎等。我们对其镇咳、祛痰、平喘的药理作用进行了研究，为临床合理用药提供理论依据。
       1  材料与仪器
       1.1  动物 
       昆明种小鼠，远交封闭系，皖医动准第01号；英国种豚鼠；Wister大鼠，远交封闭系，皖医动准第02号。安徽医科大学实验动物中心提供。
       1.2 药品与试剂 
       镇咳止喘咀嚼片，安徽医科大学第一附属医院提供，批号040618；镇咳止喘颗粒，安徽医科大学第一附属医院提供，批号20031223；氨水，上海试剂一厂综合经营公司产品，浓度28%，AR级，批号20020327；枸橼酸，中国医药集团上海化学试剂公司，AR级，批号20020116；苯酚红，北京市朝阳区旭东化工厂产品，批号990609；乌拉坦，中国医药（集团）上海化学试剂公司产品产品，批号20011105；磷酸组织胺，中国药品生物制品检定所出品，25 mg/支，批号5109411。
       1.3 仪器 
       东芝空气压缩机，日本产。721分光光度计，上海第三分析仪器厂出品。80-2沉淀离心机，上海手术器械厂产品。毛细管，内径0.8mm，长度5～6cm。手术器械若干。
       2  方法
       2.1  镇咳作用
       2.1.1  对小鼠因氨水所致咳嗽的影响 
       参照文献［1］，取体重18～22 g的小鼠50只，♂♀各半，随机分成5组，分别灌胃给予0.2 ml/10 g相应供试液，第1天上、下午各1次，第2天给完药后30 min时将小鼠置于5 000 ml玻璃钟罩内，以400～500 mmHg 恒压将氨水（28%）喷入钟罩，喷雾5 s，然后观察记录小鼠的咳嗽潜伏期及咳嗽次数（3 min）。动物在第1次给药前24 h进行筛选，后再分组，咳嗽标准为：腹肌收缩，同时张大嘴，有时可有咳声。若潜伏期小于1 min且在1min内出现3次以上典型咳嗽者为“有咳嗽”敏感动物，否则作无咳嗽而淘汰。
       2.1.2  对豚鼠因枸橼酸所致咳嗽的影响 
       参照文献［2］，取体重100～200 g的纯白色豚鼠（对咳嗽及哮喘较敏感），♂♀兼用，筛选40只后随机分为5组，每组8只。给药容积为1.0 ml/100 g，第1天上、下午各给药1次，第2 天上午给药后30 min进行实验。将动物置于5 000 ml的密闭钟罩内，以400～500 mmHg 恒压通过喷头将17.5%枸橼酸喷入钟罩，喷雾1 min，然后观察记录6 min内豚鼠的咳嗽潜伏期及咳嗽次数，加以组间比较并作统计分析。首先在给药前1天对豚鼠进行筛选，6 min内豚鼠的咳嗽次数少于10次或大于30次均作淘汰。
       2.2  祛痰作用
       2.2.1  对小鼠呼吸道酚红排痰量的影响 
        测定酚红最大吸收峰：参照文献［2］方法，酚红含量测定略作改变。在100 ml容量瓶内精确配制浓度为1 mg/ml的酚红母液，再配每毫升含酚红0.01，0.1，0.5，0.7，1，3，5，10 μg溶液，分装于8个10 ml容量瓶内。任取两管溶液，以未知酚红的0管作对照，用721分光光度计在波长420～570 nm范围内，测光密度值。最后得酚红最大吸收峰的波长在560 nm处。
       
       绘制酚红标准曲线 ：将上述配制的酚红溶液，分别在560nm波长处测光密度值，结果各管酚红含量与光密度之间的直线相关有极显著意义（相关系数r=0.999 5，P<0.001），各数据及线性方程如表1。表1  酚红标准曲线及方程（略）
        实验操作：参照文献［2］，取体重18～22 g的小鼠50只，♂♀各半，随机分成5组，分别灌胃给予0.2 ml/10 g相应供试液，第1天上、下午各1次。第2天给完药后0.5 h时做实验。实验前小鼠禁食8～12 h，每只小鼠给药30 min后，腹腔注射酚红溶液0.5 ml/只。30 min后，脱椎处死，仰位固定。颈部拉直，解剖分离出气管在气管下穿一丝线，以备固定气管插管用。气管插管（用头部磨平的9号针头）从甲状软骨处插入气管内约0.3 cm，用备好的丝线结扎、固定，用1ml注射器吸取5 d/dl的NaHCO3溶液0.5 ml推注入气管内，反复连续推抽3次，灌胃呼吸道。最后用注射器将灌洗液抽出注入试管中，按上述方法操作3次，冲洗9次，共吸取NaHCO3溶液1.5 ml，合并洗出液约1.2～1.5 ml，离心后取上清液用分光光度计比色，OD值代入方程，得出酚红浓度，将结果进行统计学分析。
       2.2.2 对大鼠毛细管排痰量的影响 
       参照文献［2］，取体重180～220 g大鼠30只，♂♀各半，每组6只，随机分成5组，分别灌胃给予1.0 ml/100 g相应供试液。实验前禁食不禁水8～12 h后，乌拉坦1.0 g/kg腹腔注射麻醉后，仰位固定（注意保暖）。剪开颈正中部皮肤，分离出气管。在甲状软骨下缘正中的软骨环之间用尖锐的注射针头扎一小孔，然后插入玻璃毛细管1根，使毛细管刚好接触气管底部表面，借以吸取气管后部之痰液。当毛细管内痰液充满时，立即另换1根。以毛细管吸取痰液长度作为评价药物的祛痰效果。记录给药前2 h的正常分泌量后，灌胃给药后（在给药1 h后，再按同等剂量重复给药1次）继续再观察4h 痰液分泌量。比较给药前后平均每小时分泌及与生理盐水组相比的痰液分泌量，并作统计学分析。
       2.3  对组胺所致豚鼠哮喘的影响 
       参照文献［2］，取预选后体重150～200 g豚鼠40只，♂♀兼用，随机分为5组，每组8只，给药容积为1.0 ml/100 g，第1天上、下午各给药1次，第2天上午给药后0.5 h进行实验。将动物置于5 000 ml的密闭钟罩内，以 400～500 mmHg压力喷入2 mg/ml磷酸组胺1 ml，动物在吸入以上药液后经过一定的潜伏期，即产生“哮喘”反应，“哮喘”反应按程序分为4级：Ⅰ级呼吸加速，Ⅱ级呼吸困难，Ⅲ级抽搐，Ⅳ级跌倒。动物一旦出现抽搐，即拉开盖子，必要时辅以人工呼吸以免动物因窒息而死亡。多数动物在90 s以内即可以出现Ⅲ或Ⅳ级反应，一般不超过150 s，超过150 s者可认为不敏感，不予选用,给药前1天进行筛选，潜伏期超过360 s按360 s计。
       3  结果
       3.1  镇咳作用
       3.1.1  对小鼠因氨水所致咳嗽的影响 
       镇咳止喘咀嚼片小、中、大剂量2.062 5，4.125 0，8.250 0 g·kg-1（分别相当于临床用的5，10，20倍）灌胃给予小鼠3次后，与颗粒（4.125 0 g·kg-1）剂型一样，可以延长因氨水所致小鼠的咳嗽潜伏期，同时减少咳嗽次数，与生理盐水组相比较具有显著意义，潜伏期与对照组相比分别为P<0.05，P<0.05和P<0.01，咳嗽次数与对照组相比分别为P<0.01，P<0.01和P<0.01，但无明显量效关系。提示镇咳止喘咀嚼片有一定的镇咳作用。结果见表2。 表2  镇咳止喘咀嚼片对小鼠因氨水所致咳嗽的影响(略)
       3.1.2  对豚鼠因枸橼酸所致咳嗽的影响 
       
       镇咳止喘咀嚼片小、中、大剂量0.773 4，1.546 9，3.093 8 g·kg-1（相当于临床用量的1.875，3.75，7.5倍），灌胃给予豚鼠3次后，与颗粒剂型（1.546 9 g·kg-1）一样，可以延长因枸橼酸所致豚鼠的咳嗽潜伏期，同时减少咳嗽次数，与生理盐水组相比较具有显著意义，潜伏期与对照组相比分别为P<0.05，P<0.05和P<0.01，咳嗽次数与生理盐水组相比较分别为P<0.05，P>0.05和P<0.05，提示镇咳止喘咀嚼片具有一定的镇咳作用。结果见表3。表3  镇咳止喘咀嚼片对豚鼠因枸橼酸所致咳嗽的影响(略)
       3.2.1  对小鼠呼吸道酚红排痰量的影响
        
       镇咳止喘咀嚼片小、中、大剂量（2.062 5，4.125 0，8.250 0 g·kg-1，分别相当于临床用量的5，10，20倍）灌胃给予小鼠3次后，可以增加小鼠呼吸道的酚红排痰量，与生理盐水组相比具有显著意义，分别为P<0.05，P<0.01和P<0.05，同颗粒剂型相比，具有相同的药理效应。提示镇咳止喘咀嚼片具有一定的镇咳作用。结果见表4。表4 镇咳止喘咀嚼片对小鼠呼吸道酚红排痰量的影响(略)
       3.2.2  对大鼠毛细管排痰量的影响 
       镇咳止喘咀嚼片小、中、大剂量（1.031 3，2.062 5，4.125 0 g·kg-1，分别相当于临床用量的2.5，5，10倍）灌胃给予大鼠2次后，可以增加大鼠毛细管的排痰量，与生理盐水组相比具有显著意义，分别为P<0.01，P<0.05和 P<0.01；与给药前相比具有非常显著意义，分别为P<0.01，P<0.001和 P<0.01，同颗粒剂型相比，具有同等的药理作用。镇咳止喘咀嚼片实验动物经口服后，可以增加其呼吸道排痰量，提示本品具有一定的镇痰作用。结果见表5。表5  镇咳止喘咀嚼片对大鼠毛细管排痰量的影响(略)
       3.3  对组胺所致豚鼠哮喘的影响
       豚鼠经呼吸道吸入一定量的磷酸组胺后，可以造成类似人类的“哮喘”模型。镇咳止喘咀嚼片小、中、大剂量（0.773 4，1.546 9，3.093 8 g·kg-1，分别相当于临床用量的1.875，3.75，7.5倍）灌胃给予豚鼠3次后，可以对抗动物因组胺引起的“哮喘”症状，表现为动物跌倒潜伏期延长，与生理盐水组相比较具有非常显著意义，经统计学处理分别为P<0.05，P<0.01和P<0.01。同颗粒剂型相比，具有同等的药理作用。提示镇咳止喘咀嚼片具有一定的平喘作用。结果见表6。表6  镇咳止喘咀嚼片对组胺所致豚鼠哮喘的影响(略)
       4  讨论
        通过实验发现镇咳止喘咀嚼片具有镇咳、祛痰、平喘、抗炎、抗菌的药理作用，咀嚼片剂型和原颗粒剂型相比具有同等的药理作用，均有镇咳祛痰之功效，临床上可以用于上呼吸道感染、气管炎、肺炎等，同时咀嚼片相比原颗粒剂型具有服用方便，作用迅速，易于运输保存等特点。
       【参考文献】
         　　［1］李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海：上海科学技术出版社 1991：423，300.
       
       ［2］陈奇.中药药理实验方法［M］.北京：人民卫生出版社，1994：140，141，143，148，80.