三七皂苷成分的超声波提取研究
作者:马妮 高明菊 崔秀明 陈中坚
《时珍国医国药》 2005年 第9期
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【关键词】 三七皂
摘要:目的:研究超声提取方法对三七中皂苷的提取率的影响。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法比较不同超声提取时间与常规浸泡对三七皂苷的提取率。结果:三七中皂苷的提取率随超声提取时间的增加而增加,在30 min~8 h的时间范围内差异不显著,和常规浸泡相比,超声提取缩短提取时间数十倍,提取率略高于常规浸泡,但也无显著差异。结论:超声法提取三七皂苷能显著提高提取效率,采用超声提取30 min~1 h可以代替常规浸泡36 h处理的方法。
关键词:三七;皂苷;超声提取;高效液相色谱
Studies on Ultrasonic Extracting Saponins of Panax notoginseng
MA Ni, GAO Ming ju, CUI Xiu ming, CHEN Zhong jian
(Wenshan Prefectural Sanqi Science and Technology Research Institute,Yunnan Province,China 663000)
Abstract:Objective:To Study on ultrasonic extracting how to affect the rate of extraction in saponins of Panax notogineng.Methods:The contents of saponins were determined by HPLC.Results:The time of ultrasonic extracting is shortened many multiples than the common extracting, either of rate of extraction are not obvious differente.Conclusion:To choose the 30 min~1 h of ultrasonic extracting replace the 36 h of common extracting.
Key words:Panax notogingseng;Saponins;Ultrasonic extracting;HPLC
三七Panax notogingseng(Burk.)F.H.Chen为五加科人参属多年生草本植物,皂苷是三七最主要的有效成分,三七中皂苷成分的提取多以水或醇为溶剂进行加热回流[1]及浸泡提取[2],并在工业及含量测定中广泛应用,但具有提取时间长或操作繁琐的特点。超声波提取是中药材有效成分提取的一种方法,该法有利于能够提高效率,且不影响中药中有效成分的结构,克服了传统提取三七皂苷成分的影响,并以常规提取进行比较,为提取三七的皂苷成分提供新方法。
1仪器与试药
1.1仪器岛津Lc 10Atvp高效液相色谱仪,Shim Pack VP ODS 250*4.6色谱柱,SPD 10AVP紫外检测器,Class vp工作站控制处理,电子分析天平SHIMADZU AX200(日本岛津),CQ-250超声波清洗器(中船七院七二六研究所)。
1.2试剂水为重蒸水,乙腈和甲醇均为色谱纯,单体皂苷R1、Rg1、Rb1对照品均购自中国药品生物制品检定所。
1.3药材料取三年生三七主根部分干燥后粉碎(100目)。
2方法与结果
2.1供试品溶液制备分别称取干燥至恒重的三七粉0.200 0 g于10 ml容量瓶,加甲醇至刻度,称定质量。分别超声提取(频率为20 kHz)30 min,1,2,4和8 h,常规浸泡24,36 h提取,放置至室温后补足损失甲醇,0.45 μm滤膜过滤,滤液作为供试品溶液。
2.2对照品溶液制备精密称取经干燥恒重的三七皂苷R1,人参皂苷Rg1和Rb1对照品适量,加甲醇分别制成1 ml含三七皂苷R1 0.45 mg,人参皂苷Rg1 1.2 mg,人参皂苷Rb1 1.2 mg的对照品溶液。
2.3色谱条件色谱柱为Shim Pack VP ODS反相柱(5 μm,250 mm×4.6 mm),填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶;乙腈(B) 水为流动相,0 25 min(B)由20%~40%线性梯度洗脱,25 min结束后(B)回复至20%,进样前乙腈 水(20∶80)应平衡5 min,流速为1.0 ml/min;检测波长为203 nm;柱温40℃;理论板数按Rg1峰计算应不低于3 000,相连组分的分离度应符合要求;样品进样量为20 μl。
2.4线性关系精密吸取三七皂苷R1对照品溶液3,6,9,12,15,18 μl进样,按上述色谱条件测定,以对照品质量对峰面积作回归曲线,得R1回归方程:Y=389 721X+84 775,r=0.999 5,线性范围1.35~8.1 μg;同法测得,Rg1回归方程:Y=588 237X+482 678,r=0.999 3,线性范围3.6~21.6 μg;Rg1回归方程:Y=441 058X+424 145,r=0.999 7,线性范围3.6~21.6 μg。
2.5精密度考察取三七粉样品,处理配制得供试液,连续进样5次,以峰面积计算,三七皂苷R1 RSD为1.16%;人参皂苷Rg1 RSD为1.12%;人参皂苷Rb1RSD为1.13%(n=5)。
2.6稳定性实验取上述样品液,每隔30 min进样1次,结果三七皂苷R1 RSD为1.21%;人参皂苷Rg1 RSD为1.21%;人参皂苷Rb1RSD为1.22%(n=5)。
2.7重复性实验取三七样品粉末,分别称取5份处理配制成供试液,按上述色谱条件测定,结果三七皂苷R1 RSD1.25%;人参皂苷Rg1 RSD1.19%;人参皂苷Rb1RSD1.24%(n=5)。
2.8加样回收率实验精密称取三七样品粉末5份,加入三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1各适量,按上述色谱条件测定。测得三七皂苷R1 的平均回收率为98.02%,RSD为1.43%;人参皂苷Rg1的平均回收率为97.87%, RSD为1.35%;人参皂苷Rb1的平均加收率为97.51%,RSD为1.40%)。
2.9样品测定分别精密吸取2.1项下供试品溶液20 μl,按上述色谱条件测定,结果见表1。
表1不同提取方法与三七皂苷含量(略)
3讨论
3.1从表1中可以看出,随着超声提取时间的增加,皂苷含量有增加趋势,30 min~8 h皂苷含量增加了3.12%,2~8 h皂苷含量仅增加了1.17%,超声提取与常规提取率比较差异也不显著;s值均 0.03,说明超声提取皂苷比较稳定;超声提取的单体皂苷含量占总皂苷含量的相对比例为R1∶Rg1∶Rb1=1∶4.7∶4.3,与常规提取的比例(1∶4.8∶4.2)基本一致,成分未发生变化。
3.2超声提取三七皂苷8 h得量最高,但所耗时间长,耗能多,为了节省能源,超声提取三七皂苷30 min~1 h为宜。
3.3超声波在人参上提取皂苷已有研究[4,5],并且都表现出时间短、效率高的特点,和我们在三七上研究的结果一致。三七采用超声波提取皂苷,仅30 min~1 h就能取得良好的效果,时间延长对皂苷提取率的增加影响不大,并且增加能源消耗和造成声污染,该方法可应用于三七的含量检测及工业提取。
参考文献:
[1]国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2000:10 10.
[2]郑光植,杨崇仁.三七生物学及其应用,第1版[M].北京:科学出版社,1994:27 27.
[3]郭孝武.超声提取与常规提取对部分中药碱类成分提出率的比较[J].世界科学技术-中药现代化,2002,4(5):59 61.
[4]张晶,陈全成,弓晓杰.不同提取方法对人参皂苷提取率的影响[J].吉林农业大学学报,2003,25(1):71 71.
[5]许汉英,梁春,商明磊,等.人参中总皂苷的超声波快速提取方法研究[M].理化检验 化学分册,2002,(38)12:625 625.
(云南省文山州三七科学技术研究所,云南 文山663000)