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       【关键词】  反相高效液相色谱法
        摘要：目的：建立珍珠梅中槲皮素反相高效液相色谱法(RP-HPLC)含量测定方法。方法：采用RP-HPLC对槲皮素进行定量测定；采用YMC-pack ODS-A(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱，检测波长为370 nm。结果：色谱条件为流动相甲醇0.2%磷酸溶液(50∶50)，柱温为35℃，流速0.4 ml・min1。此法线性范围0.025～0.15 μg,r=0.999 9，精密度(RSD)为0.72%(n=5)；平均回收率为98.8%，RSD为0.69%(n=5)。结论：测定方法简便快捷、精密度高、准确性好，可以作为珍珠梅中黄酮的测定方法，以控制其原料的质量。
        关键词：珍珠梅；反相高效液相色谱；槲皮素；含量
        Determination of Quercetin in Sorbaria sorbifolia by RP-HPLC Assay
        ZHANG Xuewu1, GUAN Liping2, LI Tianzhu1
        (1.College of Medicine, Yanbian University, Yanji, Jilin, 133000, China; 2.College of Pharmacognosy, Yanbian University, Yanji, Jilin, 133000, China)
        Abstract:Objective:To establish an RP-HPLC method for the determination of quercetin in Sorbaria sorbifolia.Methods:The content of quercetin was determined by RP-HPLC. YMC-pack ODS-A(4.6 mm×250 mm,5 μm)column was used. The detection wavelength was set at 370 nm.Results:The mobile phase consisted of methanol-0.2% phosphatic acid (50∶50) with flow rate 0.4 ml・min1 and column temperature at 35℃. The method was linear within the range of 0.025～0.15 μg,(r=0.999 9). The method RSD was 0.72%(n=5). The average recovery of assay was 98.8% and RSD 1.45%(n=5).Conclusion:The method is simple, rapid and highly accurate and precise. It can be used for the quantitative determination of quercetinin Sorbaria sorbifolia.
        Key words:Sobaria sorbifolia;RP-HPLC;Quercetin;Determination
        珍珠梅Sobaria sorbifolia属蔷薇科植物，又称“山高梁”“八木条”，广泛分布于云南、贵州、四川、湖北、甘肃、宁夏及东北，有活血化瘀，消肿止痛，治骨折及跌打损伤的作用，其主要成分为黄酮类化合物［1］。其药理作用有抗缺氧作用、保护肝脏及抗肿瘤作用等［2，3］。槲皮素为珍珠梅中一种黄酮类化合物，研究表明，槲皮素具有抗自由基［4］、抑制酪蛋白激酶Ⅱ(CKⅡ)等作用［5］。槲皮素为珍珠梅中含量较高的活性成分，目前尚未见有珍珠梅中槲皮素含量测定的报道。本实验建立了RP-HPLC法测定珍珠梅中槲皮素含量的方法。
           1仪器、试剂和药品
        SCL-10Avp型高效液相色谱仪(日本岛津)；SPD-10Avp型紫外-可见检测器(日本岛津)；XW-80A旋涡混合器(上海青浦沪西仪器厂)；AS3120A型超声波清洗脱气器(奥特宝恩斯仪器有限公司)。
        甲醇(色谱纯)，槲皮素(对照品，中国药品生物制品检定所)。珍珠梅样品采自吉林省延吉市市郊，由延边大学药学院刘永镇教授鉴定为真品。
        2方法与结果
        2.1色谱条件色谱柱为YMC-pack ODS-A(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱，流动相为甲醇0.2%磷酸溶液(50∶50)，柱温35℃，流速0.4 ml・min1。
        2.2波长的选择取槲皮素对照品配制成一定浓度的甲醇溶液，在200～500 nm波长范围内进行紫外光谱扫描，确定370 nm为测定波长。
        2.3标准曲线的绘制
        2.3.1标准溶液的配制精密称取槲皮素对照品50 mg，置于50 ml量瓶中，加入甲醇溶解，定容于50 ml，所得浓度1 mg/ml，备用。
        2.3.2对照品溶液的制备精密吸取对照品贮备液1 ml，置100 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.01 mg/ml槲皮素，备用。
        2.3.3线性范围取上述槲皮素对照品溶液，分别进样2.5，5，7.5，10，12.5，15 μl，按色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准吸收曲线，并用最小二乘法求回归方程，得槲皮素(C)与峰面积(A)的关系，A=47 999.9C+11 895,相关系数r=0.999 9。结果表明，槲皮素溶液浓度在0.025～0.15 μg内，槲皮素峰面积(A)与浓度(C)之间呈良好的线性关系。
        2.4精密度实验精密吸取对照品供试液(约10 μg・ml1)，按“2.1”条件，连续进样5次，每次10 μl，测定峰面积为：468 655，460 152，466 348，464 901，462 265，平均峰面积为464 464，积分值计算RSD值，结果RSD=0.72%，说明仪器和色谱条件均具有良好的精密度。
        2.5重现性实验精密称取药品粉末0.1 g共5份，按“2.8”项下样品溶液的制备操作，按“2.1”项下条件连续进样5次，每次20 μl，测定峰面积为：208 211，206 843，205 448，202 156，204 560，平均峰面积为205 444，RSD=1.12%，结果显示，该方法具有较好的重现性。
        2.6稳定性实验在室温条件下，将样品按测定方法处理后，分别在2.0，4.0，8.0，12.0，24.0 h每次进样20 μl，测得峰面积为：207 532，206 743，205 842，204 562，206 570，平均峰面积为206 249.8，RSD=0.54%,n=5。结果表明，该溶液在24 h内的含量基本保持不变。
        2.7回收率实验精密称取样品0.1 g共10份，其中5份按“2.8”测定样品本底含量，5份各加入槲皮素对照品溶液适量，溶解，按“2.8”依反相高效液相色谱法测定槲皮素含量，计算回收率。结果见表1。
        表1珍珠梅中槲皮素的回收率序号（略） 
        2.8珍珠梅提取物中槲皮素含量的测定称取干燥并切成细段的珍珠梅50 g，用6倍量75%乙醇浸泡过夜，加热回流，过滤，干燥。精密称取提取物100 mg，加入少量甲醇溶解，移入50 ml量瓶中，定容，摇匀，用微孔滤膜过滤，作为供试液，精密移取供试液20 μl，注入高效液相色谱仪，在370 nm处测定峰面积，根据线性回归方程，用外标两点法测定含量。结果见表2。
        表2珍珠梅中槲皮素的含量测定序号(略)
           3讨论
        本实验利用高效液相法测定珍珠梅中槲皮素的含量尚属首次，该方法简便、准确，重现性好，为珍珠梅药物的开发提供了质量控制标准。分离黄酮类化合物的实验多采用0.4%的磷酸，但磷酸影响柱子的稳定性，为延长色谱柱的使用寿命，在保证样品分离度的情况下，将磷酸的含量降至0.2%。
           参考文献：
        ［1］江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海科学技术出版社，1994：89.
        ［2］张学武，金海玲，赵红，等.珍珠梅提取物对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的保护作用［J］.中国中医药科技，2001，8(6)：373374.
        ［3］Zhang XW,Zhang XB,Quan JS, et al. Inhibitory effect of sorbifolia on DEN-induced precancerous hepatic foci and its antioxidative activies in rats［J］.肿瘤防治杂志，2003，10(11)：11371140.
        ［4］Comish KM,Williamson G,Sanderson J. Quercetin metabolism in the lens:role in inhibition of hydrogen peroxide induced cataract［J］.Free Radical Biology & Medicine,2002,33(1):6365.
        ［5］康铁邦，黄才，梁念慈.槲皮素对大鼠肝酪蛋白激酶Ⅱ的抑制作用［J］.生物化学杂志，1996，12(3)：322325.
        (1.延边大学医学院，吉林 延吉133000；2.延边大学药学院，吉林 延吉133000)