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       【摘要】 
       目的建立选荞1号中手性肌醇的含量测定方法。方法NH2柱（4.6 mm×250 mm, 5 μm）,柱温30 ℃。流动相70%乙腈,流速1.0 ml/min。结果手性肌醇在1.340～8.040 μg,峰面积与进样量具有良好的线性关系,回归方程 A=65 017 C-6 019,r=0.999 5(n=6),平均回收率为97.42%。选荞1号中手性肌醇含量为2.9 mg/g。结论该法简便、准确、重复性好,可用于选荞1号的质量控制。
       【关键词】  苦荞麦； 手性肌醇； 含量； 反相高效液相色谱
       Determination of D-Chiro-Inositol in Fagopyrum tataricum Seed by RP-HPLC
       PENG Lian-xin,  GOU Qiu-fen,HU Yi-bing, ZHAO Gang
       （Institute of Biological Industry of Chengdu University,Chengdu ,Sichuan 610016,China）
       Abstract：ObjectiveTo develop an RP-HPLC method for determination of D-Chiro-Inositol(DCI) in Xuanqiao 1. MethodsThe analysis was carried out at 30 ℃ on a NH2 column eluted with a mobile phase consisting of a mixture of acetonitrile-water(70:30).The flow rate was 1.0 ml／min. ResultsThe calibration curve was linear within the concentration ranges of 1.340～8.040 μg (r=0.999 5), the average recovery was 97.42%,  and the DCI in Xuanqiao 1 was 2.9 mg/g. ConclusionThis method is simple, accurate, replicate and suitable for determination of DCI in Xuanqiao 1.
       Key words：Fagopyrum tataricum;   D-Chiro-Inositol;   Assay; RP-HPLC
       
       苦荞F.tataricum（L.）Gaerth.属蓼科,荞麦属（Fagopyrum ）的双子叶谷类作物,它是独特的药食两用作物,具很高的营养价值和药用价值。荞麦中含有大量的黄酮类化合物（flavonoida）,现代医学研究表明荞麦具有抗氧化、降血糖、降血脂、抗肿瘤等多种药理活性［1］,最近研究表明荞麦中含有麦芽糖醇、手性肌醇（D-chiro-inostiol,DCI）及其半乳糖苷,结构类似于pH210型胰岛素调节介体［2］。使用苦荞粉或饼干具有降血糖效果,其降血糖的生理功能可能与此活性成分有关。选荞1号是由我院赵钢教授培育的新品种（系）。本实验测定了选荞1号及其经过辐射处理样品中手性肌醇的含量，为选荞1号的品质评价提供参考。
       1  材料
          
       岛津 LC-10A 高效液相色谱仪；RID-10A 示差检测器；N2000色谱数据工作站；KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。对照品手性肌醇（批号110710-200212）为中国药品生物制品检定所提供；药材均采自成都大学生物产业学院苦荞种植基地,经成都大学生物产业学院赵钢教授鉴定。乙腈为色谱纯,水为重蒸馏水,其它试剂均为分析纯。
       
       选荞1号辐射处理：委托四川原子能核技术研究所用60Co-γ射线进行辐照处理,每个处理设3个重复,辐照剂量分别为200 Gy,300 Gy,400 Gy。样品分别记为选荞200 Gy，选荞300 Gy，选荞400 Gy。
       2  方法与结果
       2.1  手性肌醇含量测定
       2.1.1  色谱条件和系统适应性实验色谱柱为迪马公司NH2 (250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相:70%乙腈；流速:1.0 ml/min；柱温:30 ℃。上述色谱条件下,手性肌醇的保留时间为8 min左右,且达到基线分离,峰形对称,见图1。
       2.1.2  溶液的制备对照品溶液的制备:精密称取手性肌醇对照品适量,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,使成为1 ml中含对照品0.335 mg的溶液即得。
       
       供试品溶液的制备:取样品粉末(60目)约3 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入80%乙醇25 ml,称定重量,超声处理(功率250 W,频率25 kHz)30 min,放冷,再称定重量,用80%乙醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,过0.45 μm滤膜即得。
       2.2  方法学考察
       2.2.1  线性关系考察精密量取上述手性肌醇对照品溶液4，8，12，16，20，24 μl注入液相色谱仪,记录色谱图,测定其峰面积,并以峰面积A为纵坐标,进样量C（μg）为横坐标,进行回归,得回归方程：A=65 017 C-6 019,手性肌醇在1.340～8.040 μg之间,进样量与峰面积线性关系良好（r=0.999 5）。
       2.2.2  精密度实验精密吸取对照品溶液10 μl,连续进样6次,手性肌醇平均峰面积的RSD为1.91％,表明仪器精密度良好。
       2.2.3  重复性实验取选荞1号种子粉末样品5份,每分约3 g,精密称定,按“2.1.2”项供试品溶液的制备方法制得供试品溶液,进样10 μl,按“2.1.1”项下色谱条件测定,手性肌醇平均含量为2.9 mg/g,RSD为1.28% ,表明该方法的重现性良好。
       2.2.4  稳定性实验精密量取同一供试品溶液,分别于0，2，4，6，8 h进样10 μl,记录峰面积,平均峰面积为222 004,RSD为1.67%,说明样品溶液8 h内稳定。
       2.2.5  回收率实验称取9份已知手性肌醇含量的选荞1号粉末约1.5 g,精密称定,依次加入低、中、高3种质量浓度手性肌醇对照品溶液,按“2.1.2”项供试品溶液的制备操作,按“2.1.1”项下色谱条件测定手性肌醇,计算加样回收率。结果平均回收率为97.42%,RSD为2.12%。说明方法可行。
       2.2.6  样品测定分别精密吸取手性肌醇对照品溶液和供试品溶液各10 μl,注入液相色谱仪 ,记录色谱图并计算手性肌醇含量。结果见表1。表1   选荞1号中手性肌醇的含量
       序号样品手性肌醇含量（略）
       3  讨论
           　　
       文中分别比较了振摇提取、超声提取和回流提取,结果以超声提取效率最高,同时也比较不同的提取溶酶,结果以80%乙醇提取效果较好,手性肌醇色谱峰无干扰。
       
       文中比较了不同的色谱分离条件,其中流动相、柱温对整个色谱分离影响较大,最后选择70%乙腈为流动相,柱温为30 ℃,流速为1.0 ml／min。此时,手性肌醇色谱峰达到基线分离,峰形对称。
       【参考文献】
         　　［1］周元成.关于荞麦生物类黄酮的研究进展［J］.山西农业大学学报，2006,26(6):131.
       
       ［2］Steadman K J,Burgoon M S,Schuster R L,Lewis B A,Edwardson SE,Obendorf R L.J Agric Food Chem,2000,48(7):2843.