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       【摘要】 
       目的建立了哥王中芫花素含量测定方法，为了哥王的质量评价提供依据。方法采用HPLC法测定其芫花素的含量，色谱柱：Alltech ODS (4.6 mm ×250 mm, 5 μm)；流动相：甲醇-0.2 %磷酸水溶液 (体积比55∶45)；流速为1.0 ml·min-1；检测波长346 nm，柱温为35 ℃；进样量10 μl。结果芫花素在0.24～2.40 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，其回归方程为Y=84 069X+34.648，r=0.999 8。平均回收率为100.57%，RSD=1.76%(n=5)。结论该法具有操作简便准确，回收率好，精密度、重复性高，分析快速的优点，可作为了哥王药材的质量控制方法。
       【关键词】  高效液相色谱 了哥王 芫花素 含量测定
       Determination of Genkwanin Content in Wikstroemia indica（L.）C. A. Mey. by HPLC
       LI Yanmin, JIANG Jianguo, YANG Li
       （College of Light Chemical Engineering and Food Science, South China University of Technology, Guangzhou, 510640, China）
       Abstract:ObjectiveTo establish a method for the determination of the content of genkwanin in Wikstroemia indica（L.）C.A.Mey (W.indica ).MethodsThe content of genkwanin in W.indica was determined by HPLC with Alltech C_(18) (250 mm×4.6 mm, 5 μm) column. A mixture of methanol and 0.2% phosphoric acid solution (55∶45)was used as mobile phase, the flow rate was 1.0 ml·min-1 and UV detection wavelength was at 346 nm. Temperature was 35 ℃ and sample size was10 μl.ResultsThe linear relationship was good within the range of 0.24～2.40 μg (r=0.999 8). The average recovery was 100. 57% , RSD was 1.76%. ConclusionThe method is simple and accurate with good separation. The results are sensitive and reproducible and may be used in the quality control of genkwanin in Wikstroemia indica（L.）C.A.Mey.
       Key words:HPLC;  Wikstroemia indica;  Genkwanin；  Determination
       
       中药了哥王为瑞香科植物了哥王Wikstroemia indica（L.）C.A.Mey.的干燥根或根皮,主产于两广，浙江、江西也有出产。性味苦寒、微辛，有毒。功能清热解毒，化痰散结，消肿止痛。主治风湿性关节炎，淋巴结炎，瘰疬，痈肿，跌打损伤，具有抑菌、抗病毒抗炎镇痛、止咳祛痰等作用。本品有毒，对皮肤有刺激性，所含树脂有强烈的泻下作用［1］，文献报道含有黄酮、多糖类、酸性树脂、挥发油、甾体类、皂苷等成分。了哥王含有南荛酚、牛蒡苷元、松脂酚、山萘酚等多种化学成分，还含芫花素、西瑞香素等［2］。了哥王提取液中有效成分的含量测定目前尚无研究报道，因此，我们采用高效液相色谱法测定了哥王超声提取液中芫花素的含量。现报道如下。
       1  仪器与材料
       1.1  仪器Didnex-P680高效液相色谱仪；PDA-100 Photodiote Array 检测器；CQ2250超声波清洗仪(上海声源仪器有限公司)；FA1104N 电子分析天平（上海精科天平厂）。
       1.2  试药芫花素对照品由广州药物研究所提供，经归一法标定，含量为 99.3%，流动相甲醇为色谱纯（美国Tedia公司），水为二次蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
       1.3  药材了哥王购于广州市清平药材市场，由广东药学院天然产物化学系王定勇教授鉴定为了哥王Wikstroemia indica（L.）C.A.Mey的干燥根茎。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱为Alltech ODS柱（4. 6 mm ×250 mm, 5 μm,）；流动相为甲醇-0.2 %磷酸溶液（体积比55∶45）；流速1.0 ml·min-1；检测波长346 nm；进样量10 μl；柱温：35℃；在此条件下供试品中芫花素成分能与其他成分达到较好的分离。对照品、供试品在约19 min相同时间有一色谱峰，见图1。
       2.2  对照品溶液的制备精密称取芫花素对照品12 mg，置于50 ml的容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成0.24 mg·ml-1的对照品溶液，经0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
       2.3  供试品溶液的制备取了哥王生药研成细粉，过40目筛，精密称取细粉约25 g，置具塞锥形瓶中，加入100 ml甲醇，称定重量，超声处理45 min，放置室温，加溶剂补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，经0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
       2.4  线性关系考察分别精密吸取芫花素对照品溶液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，10.0 ml，分别置于10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取10 μl，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定其峰面积，并以对照品含量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，得回归方程为：Y=84 069X+34.648（r=0.999 8）。结果表明：芫花素对照品在0.24～2.40 μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。
       2.5  精密度实验精密吸取同一份供试品溶液10 μl，按上述色谱条件，重复进样7次，测定供试品溶液中芫花素峰面积值。结果供试品峰面积值的相对标准偏差RSD=1.46% (n=7)，表明仪器精密度良好。
       2.6  重复性实验精密称取同一批次样品5份各25 g，按供试品溶液制备项下方法制备并测定，结果RSD=2.34% (n=5)，表明此方法的重复性良好。
       2.7  稳定性实验精密吸取供试品溶液，按上述色谱条件，每隔0.5 h，测定供试品溶液中芫花素峰面积值，共测定到第4小时，结果RSD=1.21%，供试品溶液在所测的4 h内较稳定。
       2.8  加样回收率实验分别精密称取已知含量的样品5份，每份约25 g，按供试品制备方法制备，分别加入芫花素对照品适量并测定，计算回收率。结果平均回收率100.57%，RSD=1.76%（n=5）。结果见表1。表1  芫花素含量测定回收率实验结果（略）
       2.9  样品的测定取不同批次了哥王的干燥药材5份，每份约25 g，按供试品制备方法制备，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果见表2。表2  样品中芫花素含量的测定结果（略）
       
       3  讨论
       3.1  流动相的选择分别以甲醇-水、甲醇-水-磷酸、乙腈-水、乙腈-水-磷酸为流动相比较分离效果。其中甲醇-水-磷酸为流动相时可以达到最佳分离效果，故采用甲醇-水-磷酸为流动相［3］。
       
       流动相的pH值对分离影响较大，以甲醇和磷酸水溶液作为流动相，pH值越低，分离效果越好，考虑到色谱柱对pH值的耐受性，因此选择体积分数为0.2%的磷酸水溶液。
       3.2  提取方法的选择分别考察超声提取和回流提取两种方法。结果表明，超声提取的效果较好，峰面积较大，含量较高，故选择超声提取方法。
       3.3  提取溶剂的选择精密称取了哥王25 g共3份，分别置于锥形瓶中，称定重量，加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯各100 ml，超声处理45 min，放至室温，加溶剂补足重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液，测得芫花素含量分别为0.27, 0.24, 0.18 mg·g-1。甲醇提取物中芫花素含量较高，杂质对分离度干扰小，供试品峰的分离效果好，故采用甲醇作为提取溶剂。
       3.4  提取时间的选择精密称取了哥王25 g共4份，分别置于锥形瓶中，各加入甲醇100 ml，称定重量，分别超声处理20，30，45，60 min，放至室温，加溶剂补足重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液，测得芫花素含量分别为 0.18，0.24，0.27，0.27 mg·g-1，45 min与60 min提取效果较好，故选用45 min提取时间。
       
       目前,对了哥王化学成分的研究文献报道的很少。本实验研究表明芫花素为了哥王中可控成分之一,故将其作为药材中的指标性成分进行含量测定,可有效地控制了哥王的质量。
       【参考文献】
         　　［1］谢宗万.全国中草药汇编，上册,第2版［M］.北京:人民出版社, 1996:10.
       
       ［2］贝新法,江凤鸣.有毒中草药的鉴别与中毒救治, 第1版［M］.北京: 中国中医药出版社, 1997:28.
       
       ［3］魏屹,丁雪娇, 包金颖, 等.高效液相色谱法测定余甘子药材中槲皮素的含量［J］.时珍国医国药,2008,19(7):1634.