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       【摘要】 
       目的研究冬青科植物毛冬青Ilex pubescens Hook. et Arn.根的化学成分。方法运用多种层析分离方法进行分离纯化，通过理化常数和波谱数据确定化合物的结构。结果从毛冬青根中分离并鉴定了12个化合物，分别为ilexoside D(1)；ilexgenin A(2)；spinasterol(3)；(+)fraxiresinol1OβDglucoside(4)；liriodendrin(5)； tortoside A(6)；magnolenin C(7)；丁香苷(8)；sinapic aldehyde 4OβDglucopyranoside(9)；4，5diOcaffeoylquinic acid(10)；β谷甾醇(11)和β胡萝卜苷(12)。结论化合物3，4，10为首次从该属植物中分离得到。
       【关键词】  冬青科； 毛冬青； 化学成分； 皂苷
       Chemical Constituents from the Roots of Ilex pubescens
       WU Ting， ZHANG Xiaoqi， WANG Ying ，YE Wencai，ZHAO Shouxun
       1.Department of Natural Medicinal Chemistry， China Pharmacological University， Nanjing 210009， China；2. Institute of Traditional Chinese Medicine & Natural Products， Jinan University， Guangzhou 510632， China；3. Guangdong Provincial Key Laboratory of Pharmacodynamic Constituents of TCM and New Drugs Research， Jinan University， Guangdong 510632， China
       Abstract：ObjectiveTo study the chemical constituents of the roots of Ilex pubescens Hook. et Arn. MethodsChemical constituents were isolated and purified by several column chromatographic methods. The structures were identified by physicochemical properties and spectral data.ResultsTwelve compounds were isolated from the plant. Their structures were identified as ilexoside D(1)， ilexgenin A(2)， spinasterol(3)， (+)fraxiresinol1OβDglucoside (4)， liriodendrin (5)， tortoside A(6)， magnolenin C(7)， syningin(8)， sinapic aldehyde 4OβDglucopyrano side(9)， 4，5diOcaffeoylquinic acid(10)， βsitosterol(11) and βdaucosterol(12)， respectively. ConclusionCompounds 3， 4 and 10 were isolated from this plant for the first time.
       Key words： Aquifoliaceae；  Ilex pubescens；  Chemical constituents；  Saponin
       
       毛冬青为冬青科植物毛冬青Ilex pubescens Hook. et Arn.的干燥根，主产于我国广东、广西、福建、江西等地，是我国华南一些地区民间常用要药，具有活血通络、清热解毒之功效，用于治疗冠心病、心绞痛、脉管炎、缺血性中风等疾病［1］ 。现代研究表明毛冬青注射液具有抗病毒、抗血栓、抗肿瘤之功效，而生物活性研究目前主要集中在毛冬青甲素和毛冬青酸等单体化合物上，对其他化学成分的研究仍存在不足或缺乏。为了进一步阐明毛冬青的药效物质基础，作者对广东产毛冬青的根进行了化学成分研究。从其乙醇提取物中分离得到12个化合物，经理化常数和波谱数据分析，分别鉴定为ilexoside D(1)；ilexgenin A(2)；spinasterol(3)；(+)fraxiresinol1OβDglucoside(4)；liriodendrin (5)；tortoside A(6)；magnolenin C(7)；丁香苷(8)；sinapic aldehyde 4OβDglucopyranoside(9)；4，5diOcaffeoylquinic acid(10)；β谷甾醇(11)和β胡萝卜苷(12)。化合物3， 4， 10为首次从该属植物中分离得到。
       1  仪器与材料
        JASCO V550紫外可见分光光度仪；JASCO FT/IR480 Plus Fourier Transform型红外光谱仪(KBr压片)；BRUKER AV400 FT型核磁共振仪；Finnigan LCQ Advantage MAX型质谱仪。柱层析用硅胶为青岛海洋化工厂产品；硅胶GF254薄层预制板为烟台化学工业研究所产品；Sephadex LH20为Pharmacia 公司生产；所用试剂为化学纯或分析纯。所用药材由温栢清先生采自广东省从化市溪流河林场，由暨南大学药学院周光雄教授鉴定为毛冬青Ilex pubescens Hook. et Arn.，植物标本(2008071101)保存于暨南大学药学院标本室。
       2  方法
       2.1  提取与分离
       毛冬青的干燥根5 kg，粉碎后经70 %乙醇渗漉提取，提取液减压浓缩得稠浸膏，浸膏用水稀释，以大孔吸附树脂柱进行色谱分离，用蒸馏水及20%，50%，95%乙醇溶液梯度洗脱。分别得到水洗脱物130 g，20%乙醇洗脱物45 g，50%乙醇洗脱物120 g及95%乙醇洗脱物266 g。将50%和95%乙醇洗脱部分分别用硅胶、ODS及SephadexLH20柱进行分离纯化， 从50%乙醇洗脱部分分离得到化合物3 (4 mg)，4 (30 mg)，5 (15 mg)，6 (200 mg)，7 (2 mg)，8 (2 mg)，9 (3 mg)和10 (2 mg)，从95%乙醇洗脱部分分离得到化合物1 (6 mg)，2 (6 g)，11(5 mg)和12 (8 mg)。
       2.2  结构鉴定
       2.2.1  化合物1
       白色无定形粉末(甲醇)， ESIMS m/z 789 ［M+Na ］+， 1555［ 2M+Na ］+；UV (MeOH) λmax: 208 nm；IR (KBr) νmax: 3 408， 2 928， 2 875， 1   692， 1 630， 1 440， 1 384， 1 477， 1 049 cm1；1HNMR (400 MHz， Pyridined5) δ: 0.90， 1.09， 1.11， 1.27， 1.45， 1.75 (6 × 3H， each s， 6 × CH3)， 3.26 (1H， dd， J= 4.0， 12.0 Hz， H3)， 3.30 (1H， s， H18)， 4.83(1H， d， J= 6.8 Hz， H1 of xyl)， 5.36 (1H， d， J= 7.6 Hz， H1 of glc)， 5.55 (1H， br s， H12)；13CNMR (100 MHz， Pyridined5) δ: 38.9 (C1)， 26.8 (C2)， 88.8 (C3)， 39.6 (C4)， 56.0 (C5)， 18.8 (C6)， 33.6 (C7)， 40.3 (C8)， 47.8 (C9)， 37.1 (C10)， 24.0 (C11)， 127.3 (C12)， 139.5 (C13)， 42.1 (C14)， 29.2 (C15)， 27.2 (C16)， 48.0 (C17)， 47.5 (C18)， 73.5 (C19)， 43.1 (C20)， 25.0 (C21)， 32.5 (C22)， 28.3 (C23)， 17.3 (C24)， 15.6 (C25)， 16.8 (C26)， 24.4 (C27)， 180.7 (C28)， 29.9 (C29)， 16.2 (C30)， 105.7 (C1 of xyl)， 83.3 (C2 of xyl)， 78.3 (C3 of xyl)， 71.0 (C4 of xyl)， 66.6 (C5 of xyl)， 106.1 (C1of glc)， 77.1 (C2 of glc)， 78.0 (C3、5 of glc)， 71.7 (C4 of glc)， 62.7 (C6 of glc)。以上数据与文献报道的ilexoside D ［2］一致，鉴定化合物1为ilexoside D。
       2.2.2  化合物 2
       白色无定形粉末(氯仿甲醇)， ESIMS m/z 525 ［M+Na ］+， 1 027 ［ 2M+Na］ +；UV (MeOH) λmax: 208 nm；IR (KBr) νmax: 3 408， 2 928， 2 875， 1 688， 1 452， 1 384， 1 260， 1 168， 1 127 cm1;1HNMR (400 MHz， Pyridined5) δ: 1.15， 1.21， 1.47， 1.73， 1.77 (5 × 3H， each s， 5 × CH3)， 1.13 (3H， d， J= 6.5 Hz， H30)， 3.07 (1H， s， H18)， 3.37 (1H， dd， J= 4.4， 11.7 Hz， H3)， 5.63 (1H， br s， H12)；13CNMR (100 MHz， Pyridined5) δ: 39.8 (C1)， 29.2 (C2)， 78.4 (C3)， 49.3 (C4)， 57.0 (C5)， 21.0 (C6)， 34.0 (C7)， 40.3 (C8)， 47.2 (C9)， 37.9 (C10)， 24.0 (C11)， 128.1 (C12)， 139.9 (C13)， 42.4 (C14)， 29.3 (C15)， 26.5 (C16)， 48.4 (C17)， 54.7 (C18)， 72.7 (C19)， 42.3 (C20)， 26.9 (C21)， 38.5(C22)， 24.2 (C23)， 180.6(C24)， 13.9 (C25)， 17.2 (C26)， 24.5 (C27)， 180.6 (C28)， 27.1 (C29)， 16.8 (C30)。以上数据与文献报道的ilexgenin A［ 3 ］一致，鉴定化合物2为ilexgenin A。
       2.2.3  化合物 3
       无色针晶(甲醇)， ESIMS m/z 411 ［MH ］；UV (MeOH) λmax: 208 nm；IR (KBr) νmax: 3 430， 2 962， 2 929， 2 870， 2 854， 1 641， 1 461，1 381， 1 101，970 cm1;1HNMR (400 MHz， CDCl3) δ: 0.53， 0.79， 0.81， 0.83， 0.84， 1.02(6 × 3H， each s， 6 × CH3)， 3.59(1H， m， H3)， 5.02(1H， dd， J= 8.6， 14.8Hz， H22)， 5.15 (1H， br s， H7)， 5.27 (1H， dd， J= 8.5， 14.8 Hz， H23)；13CNMR (100MHz， CDCl3) δ: 37.1 (C1)， 31.4 (C2)， 71.0 (C3)， 38.0 (C4)， 41.1 (C5)， 29.6 (C6)， 117.4 (C7)， 139.5 (C8)， 49.5 (C9)， 34.2 (C10)， 21.5 (C11)， 39.5 (C12)， 43.3 (C13)， 55.1 (C14)， 23.0 (C15)， 28.4 (C16)， 55.9 (C17)， 12.1 (C18)， 13.0 (C19)， 40.8 (C20)， 20.9 (C21)， 138.1 (C22)， 129.5 (C23)， 51.2 (C24)， 31.8 (C25)， 21.5 (C26)， 19.0 (C27)， 25.4 (C28)， 12.4 (C29)。以上数据与文献报道的spinasterol ［ 4 ］一致，鉴定化合物3为spinasterol。
       2.2.4  化合物 4
       白色无定形粉末(甲醇)， ESIMS m/z 589 ［ M+Na ］+， 1155 ［2M+Na］+；UV (MeOH) λmax: 207， 234， 280 nm；IR (KBr) νmax: 3 406， 2 938， 2 875， 1 614， 1 510， 1 462， 1 428， 1 365， 1 273， 1 217， 1 116， 1 080， 1 037 cm1；1HNMR (400 MHz， CD3OD) δ: 2.88 (1H， m， H5)， 3.01 (1H， m， H5 of glc)， 3.32 (1H， s， H2)， 3.37 (1H， dd， J= 2.2， 12.8 Hz， H6a of glc)， 3.48 (1H， dd， J= 5.6， 8.0 Hz， H4a)， 3.66 (1H， dd， J= 2.2,12.8  Hz， H6b of glc)， 3.81 (6H， s， OCH33′， 5′)， 3.86 (3H， s， OCH33″)， 3.94 (1H， d， J= 10.4 Hz， H8a)， 4.33 (1H， d， J= 7.6 Hz， H1 of glc)，4.39 (1H， d， J= 10.4 Hz， H8b)， 4.47 (1H， t， J= 8.0 Hz H4b)， 4.68 (1H， s， H6)， 6.74 (2H， eachd， J= 1.5 Hz， H2′， 6′)， 6.78 (1H， d， J= 8.0 Hz， H5″)， 6.85 (1H， dd， J= 1.5， 8.0 Hz， H6″)， 7.01 (1H， d， J= 1.5 Hz， H2″)；13CNMR (100MHz， CD3OD) δ: 56.6 (OCH33″)， 56.9 (OCH3 3′， 5′)， 60.3 (C5)， 62.4 (C6 of glc)， 71.2 (C4 of glc)， 72.2 (C4)， 73.2 (C8)， 74.9 (C2 of glc)， 78.0 (C5 of glc)， 78.3 (C3 of glc)， 86.9 (C6)， 89.9 (C2)， 99.2 (C1)， 100.0 (C1 of glc)， 107.4 (C2′， 6′)， 110.7 (C2″)， 116.2 (C5″)， 119.9 (C6″)， 127.7 (C1′)， 133.1 (C1″)， 136.4 (C4′)， 147.3 (C4″)， 148.6 (C3′， 5′)， 149.3 (C3″)。以上数据与文献报道的(+)fraxiresinol1OβDglucoside ［5 ］一致，鉴定化合物4为(+)fraxiresinol1OβDglucoside。
       2.2.5  化合物 5
       白色无定形粉末(甲醇)， ESIMS m/z 765 ［ M+Na ］+；UV (MeOH) λmax: 209， 237， 271 nm；IR (KBr) νmax: 3 531， 3 389， 2 938， 2 858， 1 596， 1 509， 1 485， 1 425， 1 381， 1 330， 1 236， 1 127， 1 076，1 036， 993，820，732，639 cm1；1HNMR (400 MHz， Pyridined5) δ: 3.78 (12H， s， 4 × OCH3)， 5.80 (2H， d， J= 6.4 Hz， H1′， 1″of glc)， 6.9 (4H， br s， H2′， 6′， 2″， 6″)；13CNMR (100 MHz， Pyridined5) δ: 54.8 (C1， 5)， 56.7 (4 × OCH3)， 62.6 (C6′， 6″ of glc)， 71.6 (C4′， 4″ of glc)， 72.2 (C4， 8)， 76.0 (C2′， 2″of glc)， 78.3 (C5′， 5″ of glc)， 78.7 (C3′， 3″ of glc)， 86.1 (C2， 6)， 104.9 (C2′， 6′， 2″， 6″)， 105.0 (C1 of glc)， 136.0 (C1′， 1″)， 138.2 (C4′， 4″)，153.9 (C3′， 5′， 3″， 5″)。以上数据与文献报道的liriodendrin ［ 6 ］一致，鉴定化合物5为liriodendrin。
       2.2.6  化合物 6
       白色无定形粉末(甲醇)， ESIMS m/z 603 ［M+Na］+；UV (MeOH) λmax: 210， 237， 270 nm；IR (KBr) νmax: 3 388， 2 936， 2 875， 1 594， 1 506， 1 464， 1 423， 1 333， 1 235， 1 132， 1 073， 811， 637 cm1；1HNMR (400 MHz， DMSOd6) δ: 3.75 (6H， s， 2 × OCH3)， 3.76 (6H， s， 2 × OCH3)， 4.61 (1H， d， J= 4.0 Hz， H6)， 4.66 (1H， d， J= 4.0 Hz， H2)， 4.88 (1H， d， J= 5.5 Hz， H1 of glc)， 6.60 (2H， d， J= 1.4 Hz， H2′， 6′)， 6.66 (2H， d， J= 1.4 Hz， H2″， 6″)；13CNMR (100 MHz， DM SOd6) δ: 53.5 (C5)， 53.6 (C1)， 56.0 (OCH33″， 5″)， 56.4 (OCH33′， 5′)， 60.9 (C6 of glc)， 69.9 (C4 of glc)，71.1 (C8)，71.2 (C4)，74.1 (C2 of glc)， 76.4 (C5 of glc)， 77.1 (C3 of glc)， 85.0 (C6)， 85.3 (C2)， 102.6 (C1 of glc)， 103.7 (C2′， 6′)， 104.2 (C2″， 6″)， 131.3 (C1′)， 133.7 (C1″)， 134.8 (C4′)， 137.1 (C4″)， 147.8 (C3′)， 5′))， 152.5 (C3″， 5″)。以上数据与文献报道的tortoside A ［ 7 ］一致，鉴定化合物6为tortoside A。
       2.2.7  化合物7
       白色无定形粉末(甲醇)， ESIMS m/z 619［M+Na］+；UV (MeOH) λmax: 209， 231， 304 nm；IR (KBr) νmax: 3 394， 2 942， 2 887， 1 644， 1 599， 1 512， 1 462， 1 426， 1 379， 1 335， 1 238， 1 167， 1 123， 820， 754 cm1；1HNMR (400 MHz， DMSOd6) δ: 3.41 (1H， dd， J= 11.6， 5.8， H6a of glc)， 3.6 (1H， dd， J= 10.0， 4.8 Hz， H6b of glc)， 3.75 (6H， s， OCH33″， 5″)， 3.83 (6H， s， OCH33′， 5′)， 4.20 (1H， m， H4)， 4.59 (1H， d， J= 11.2 Hz， H2)， 4.88 (1H， d， J= 7.2 Hz， H1 of glc)， 6.67 (2H， each bls， H 2′， 6′)， 7.31 (2H， each bls， H2″,6″)；13CNMR (100 MHz， DMSOd6) δ: 48.6 (C4)， 53.2(C3)， 56.0 (OCH33″， 5″)， 56.3 (OCH33′， 5′)， 60.1 (C6)， 60.8 (C6 of glc)， 69.8 (C5 of glc)， 69.9 (C5)， 74.1 (C3 of glc)， 76.4 (C4 of glc)， 77.0(C2 of glc)， 82.7 (C2)， 102.7 (C1 of glc)， 104.6 (C2′， 6′)， 106.4 (C2″， 6″)， 126.6 (C1″)，133.7 (C4′)，137.5 (C1′)， 141.0 (C4″)， 147.6 (C3″， 5″)， 152.4 (C3′， 5′)， 197.4 (C7)。上述数据与文献报道的magnolenin C ［8 ］一致，鉴定化合物7为magnolenin C。
       2.2.8  化合物 8
       白色无定形粉末(甲醇)， ESIMS m/z 395［ M+Na ］+；UV (MeOH) λmax: 208， 240， 267 nm，IR (KBr) νmax: 3 388， 2 928， 1 589， 1 511， 1 489， 1 421， 1 326， 1 240， 1 120， 1 075 cm-1；1HNMR (400 MHz， DMSOd6) δ: 3.02～3.19 (5H， m ， H2～5 of glc)， 3.76 (6H， s， 2 ×OCH3)， 4.11 (2H， br s， H9)， 4.96 (1H， d， J= 5.5 Hz， H1 of glc)， 6.35 (1H， m， H8)， 6.47 (1H， d， J= 15.9 Hz， H7)， 6.72 (2H， each bls， H2， 6)；13CNMR (100 MHz， DMSOd6) δ: 56.3 (OCH33， 5)， 60.9 (C6 of glc)， 61.4 (C9)， 69.9 (C4 of glc)， 74.1 (C2 of glc)， 76.5 (C5 of glc)， 77.2 (C3 of glc)， 102.6 (C1 of glc)， 104.5 (C2， 6)， 128.4 (C7)， 130.1 (C8)， 132.6 (C1)， 133.7 (C4)， 152.7 (C3， 5)。以上数据与文献报道的丁香苷［7 ］一致，鉴定化合物8为丁香苷(syningin)。
       2.2.9  化合物 9
       白色无定形粉末(甲醇)， ESIMS m/z 393 ［M+Na ］+；1HNMR (400 MHz， DMSOd6) δ: 3.04～3.19 (5H， m， H2～5 of glc)， 3.38 (1H， dd， J= 11.9， 5.4 Hz， H6a of glc)， 3.58 (1H， dd， J= 5.5， 11.6 Hz， H6b of glc)， 3.81 (6H， s， 2×OCH3)， 4.90 (1H， d， J= 4.7 Hz， H1 of glc)， 6.88 (1H， dd， J= 7.7， 15.8 Hz， H8)， 7.09 (2H， s， H2， 6)， 7.63 (1H， d， J= 15.8 Hz， H7)， 9.64 (1H， d， J= 7.8 Hz， H9)；13CNMR (100MHz， DMSOd6) δ: 56.5 (OCH33， 5)， 60.8 (C6 of glc)， 69.9 (C4 of glc)， 74.1 (C2 of glc)， 76.6 (C5 of glc)， 77.3 (C3 of glc)， 102.0 (C1 of glc)， 107.2 (C2， 6)， 127.9 (C7)， 129.3 (C1)， 136.9 (C4)， 152.7 (C3， 5)， 153.3 (C7)， 194.1 (C9)。 以上数据与文献报道的sinapic aldehyde 4OβDglucopyranoside ［ 7 ］一致，鉴定化合物9为sinapic aldehyde 4OβDglucopyranoside。
       2.2.10  化合物 10
       白色无定形粉末(甲醇)， ESIMS m/z 515［ MH ］；UV (MeOH) λmax: 246， 300， 330 nm；1HNMR (400 MHz， DMSOd6) δ: 1.772.13 (4H， m， H2， 6)， 4.92 (1H， dd， J= 2.9， 8.8 Hz， H4)， 5.43 (1H， ddd， J= 5.0， 9.1， 11.7 Hz， H5)， 6.15， 6.22  (1H each， d， J= 15.9 Hz， H8′， 8″)， 6.72， 6.74 (1H each， d， J= 8.0 Hz， H5′， 5″)， 6.94， 6.96 (1H each， dd， J= 2.0， 8.0 Hz， H6′， 6″)， 7.00， 7.01 (1H each， d， J= 2.0 Hz， H2′， 2″)， 7.42， 7.46 (1H each， d， J= 15.9 Hz， H7′， 7″)；13CNMR (100 MHz， DMSOd6) δ: 37.7 (C2)， 38.4 (C6)， 67.5 (C5)， 67.4 (C3)， 74.2 (C4)， 74.6 (C1)， 113.7， 113.8 (C8′， 8″)， 114.8 (C2′， 2″)， 115.7 (C5′， 5″)， 121.2， 121.3 (C6′， 6″)， 125.4 (C1′， 1″)， 145.3 (C3′， 3″)， 145.5 (C7′， 7″)， 148.4 (C4′， 4″)， 165.7， 166.0 (C9′， 9″)， 175.1 (C7)。以上数据与文献报道的4，5diOcaffeoylquinic acid ［9 ］一致，鉴定化合物10为4，5diOcaffeoylquinic acid。
       2.2.11  化合物 11
       无色片状结晶(甲醇)，mp 141～142 ℃ (石油醚)。溶于石油醚、氯仿、醋酸乙酯。LiebermannBurchard反应呈阳性，薄层色谱Rf值与β谷甾醇对照品一致，且与β谷甾醇对照品混合后熔点不下降，因此鉴定化合物11为β谷甾醇(βsitosterol)。
       2.2.12  化合物 12
       白色无定形粉末(甲醇)，mp 280 ～ 281 ℃(甲醇)，溶于DMSO、吡啶、难溶于CHCl3、 CH3OH等，LiebermannBurchard反应和Molish反应均呈阳性，薄层色谱的Rf值与β胡萝卜苷对照品一致，且与β胡萝卜苷对照品混合后熔点不下降，因此鉴定化合物12为β胡萝卜苷(βdaucosterol)。
       【参考文献】
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