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       【摘要】 
       目的建立薄层-紫外分光光度（TLC-UV）法测定天山岩黄芪根中芒柄花素的含量。方法在25℃，最大吸收波长248 nm 处测定芒柄花素的吸收度。结果此法线性范围1.6～9.6 μg/ml内，r=0.999 6，平均回收率96.68%，RSD=2.6%（n=6）。结论用此方法可测定天山岩黄芪根中芒柄花素的含量。方法简便，灵敏和准确，结果可靠。
       【关键词】  天山岩黄芪； 芒柄花素； 薄层－紫外分光光度法
       Determination of Formononetin in Hedysarum semenovii Regelet Herd by TLCUV Spectrophotometry
       HAI Liqian·taoerdahong，HE Jian，AI  Niwa er
       (School of Pharmaceutical Sciences，Xinjiang Medical Univesrsity,Urumqi 830054,China)
       Abstract：ObjectiveTo study the content of Formononetin in Hedysarum semenovii Regelet Herd by TLCUV Spectrophotometry.MethodsThe Formononetin was extracted by methanol and was separated with TLC,the content of Formononetin was determined at 248 nm with UV spectrophotometry method. ResultsThe average recovery was 96.68% and RSD=2.6%, and there was a good linear relationship between mass of Formononetin and absorbance within the range of 1.6～9.6 μg/ml(r=0.999 6).ConclusionThe method is simple,sensitive and accurate.
       Key words：Hedysarum semenovii Regelet Herd；   Formononetin；  TLCUV Spectrophotometry
       
       豆科岩黄芪属Hedysarum Linn的植物以根入药，具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功能。药理研究证明其有强心、利尿、降压、护肝、抗肾炎作用［1］，已载入2005年版《中国药典》的中药红芪为豆科植物多序岩黄芪的干燥根。天山岩黄芪Hedysarum semenovii Regelet Herd与中药红芪属于同科同属植物，两者药理作用相近，通常作为其代用品，主要分布于新疆乌鲁木齐、伊犁、阿勒泰、塔城等地区。据报道，岩黄芪属植物富含黄酮类化合物，其中芒柄花素是天山岩黄芪根中的一种异黄酮类化合物［2］，已报道其具有雌激素样作用，促骨细胞生长作用，预防和治疗肿瘤等作用，用TLCUV法测定天山岩黄芪根中芒柄花素的含量目前尚未见报道，笔者首次用此法对天山岩黄芪根中芒柄花素含量进行测定。
       1  仪器与试剂
       
       S54型紫外光光度计（上海棱光）； 微量注射器（上海高鸽工货有限公司）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；硅胶G薄层板（青岛海洋）。芒柄花素对照品（中国药品生物制品检定所）； 所用试剂均为分析纯。天山岩黄芪根，采自新疆乌鲁木齐哈熊沟，由北京大学药学院天然药物学系杨虎彪教授鉴定为天山岩黄芪。
       2  方法与结果
       2.1  对照品溶液的制备精密称取芒柄花素对照品20 mg,置于50 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.4 mg/ml的对照品溶液，贮存备用。
       2.2  供试品溶液的制备精密称取天山岩黄芪根粉2.0 g，置于100 ml容量瓶中，加适量甲醇，超声提取60 min(温度为50℃)，过滤，残渣用甲醇洗涤多次，与初滤液混和，在水浴锅上浓缩至一定体积，转至10 ml容量瓶中，加甲醇定容，即得供试品溶液，贮存备用。
       2.3  芒柄花素的薄层层析展开吸取天山岩黄芪提取液与芒柄花素对照品同时点在薄层板上，以石油醚∶醋酸乙酯（1∶1）为展开剂展开，距前沿一定距离时取出，晾干，在紫外灯下观察。其色谱图见图1。由图1可见，天山岩黄芪中存在芒柄花素和其它化学成分。
       图1  芒柄花素的薄层色谱图（略）
       2.4  芒柄花素波长的选择精密吸取1 ml芒柄花素对照品溶液置于25 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以甲醇为空白溶液，在S54紫外分光光度计上扫描吸收光谱图，扫描波长范围200～400 nm，可见芒柄花素在214，248，302 nm处有吸收峰，248 nm处吸收峰最大，则选择248 nm为测定波长。见图2。
       图2  芒柄花素紫外吸收光谱图（略）
       2.5  标准曲线的绘制精密分别吸取0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 ml的芒柄花素对照品溶液置于25 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，然后以甲醇为空白对照，置于紫外分光光度计下，在248 nm处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程A=0.078 8C+0.013 3，相关系数r=0.999 6，可知芒柄花素在1.6～9.6 μg/ml间呈线性关系。
       2.6  精密度实验精密吸取芒柄花素对照品溶液（0.4 mg/ml）和供试品溶液各20 μl，同时点于一薄层板上，以石油醚∶醋酸乙酯（1∶1）为展开剂展开，距前沿一定距离时取出，晾干，在紫外灯下观察并定位斑点位置，刮下对照品和与对照品相同位置的供试品斑点的硅胶，置于容量瓶中，加适量甲醇，超声洗脱15 min，过滤滤液至10 ml的容量瓶中，用甲醇定容，于波长248 nm处连续测定5次吸光度， 计算RSD值为0.3%。结果表明，本方法精密性较好。
       2.7  稳定性实验精密吸取供试品溶液10 μl与对照品溶液品点于薄层板上，按“2.6”项下方法处理，于波长248 nm处连续测定0，0.5，1，2，3，4，5，6 h范围内的吸光度，计算RSD值得4.2%，说明样品在6 h内芒柄花素的吸收度较稳定。
       2.8  重复性实验精密吸取供试品溶液10 μl点于薄层板上，共6份，按“2.6”项下方法处理，于波长248 nm处测定吸光度，计算RSD值得3.9%，说明样品重复性较好。
       2.9  回收率实验分别精密吸取芒柄花素对照品溶液5，10，20 μl加到已知含量的1 g样品中。每个浓度值3份，共9份，按“2.6”项下方法处理，于波长248 nm处测定吸光度，根据回收率公式计算，平均回收率96.68%，RSD=2.6%（n=6）。
       2.10  样品的含量测定用微量注射器精密吸取供试品溶液20 μl与对照品同时点于薄层板上，共6份，按“2.6”项下方法处理，于248 nm处测定吸光度，计算含量，结果是天山岩黄芪根中芒柄花素的百分含量为0.499%。
       3  讨论
       
       TLC-UV法测定天山岩黄芪根中的芒柄花素含量，方法简便快速，精密度、稳定性和重复性均良好，可作为准确含量测定用。
       【参考文献】
         　　［1］ 徐建军，海力茜，王小青，等.新疆红芪的化学成分研究［J］.华西药学杂志，2005，20（3）：214.
       
       ［2］ 海力茜，张 烜，徐建军，等.HPLC法测定新疆红芪中芒柄花素的含量［J］.华西药学杂志，2005，20（5）：433 .