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       【摘要】 
       目的对金莲花露毒理学安全性进行评价。方法清洁级昆明种小鼠、SD大鼠以金莲花露各按最大耐受量（MTD）等体积灌胃，记录中毒表现及死亡情况；采用平板掺入法，分加与不加S-9混合液两种；选清洁级昆明种小鼠，取胸骨骨髓制片，查其骨髓嗜多染红细胞微核发生率；选雄性小鼠，取附睾制片，查小鼠精子畸形率；30 d喂养实验，观察生长发育、食物利用率、血液学检查和生化学检查结果。结果雌雄性小、大鼠均未见明显的中毒症状及死亡；在加与不加S-9的情况下，均未呈现致突变作用；小鼠微核实验、小鼠精子畸形实验均呈阴性；30 d喂养大鼠，全部存活，且发育良好，选定各指标均未见异常。结论金莲花露对两种性别的大、小鼠的MTD均大于20 000 mg/（kg·bw），说明该产品属实际无毒物；三项致突变实验结果阴性；大鼠30 d喂养实验各项指标均无明显异常。　
       【关键词】  金莲花露； 毒理学； 安全性评价
       Safety Assessment of Trollius Beverrage
       PAN Haifeng, LI Yanrong, XIN Chunlan, LI Shouzhuo
       （Institute of Chinese Materia Medica, Chengde Medical College, Chengde 067000, China; Affiliated Hospital to Chengde Medical College, Chengde 067000, China）
       Abstract：ObjectiveTo assess the safety of Trollius Beverrage. MethodsThe experimental animals were Kunming mice and SD rats. Mice and rats were gastric infusion with MTD the same volume of Trollius Beverrage. Detoxification and death status were recorded. Flat plate incorporating method was used with 2 kinds of mixture solutions which were added S-9 or not. The sternal bone marrow of clean Kunming mice was isolated and driven film producer. A living rate of mouse bone marrow polychromatic erythrocyte micronucleus test was checked. The epididymis of the double sides in female clean Kunming mice was driven film producer. The rate of sperm teratogenicity was observed. Perform the results of the growth and development, food utilization rate, the check of blood and biochemistry after the animals were fed to keep experiment for 30 days. ResultsThe mice and rats were all not observed obvious poisoned symptom and death. Without adding S-9 condition, the mutation effect of all the animals didn"t appear. The micronucleus test and the sperm teratogenicity test in mice were negative. All rats survived after feeding for 30 days. Animals in each group growth were good. No abnormal phenomenon was observed. ConclusionThe Trollius Beverrage"s MTD of mice and rats was greater than 20000mg/(kg.bw). It was concluded that the product had no toxicity. The result of mutagenic test was negative and no abnormal phenomenon was observed after feeding for 30 days.
       Key words：Trollius Beverrage;  Toxicology;  Safety assessment
       
       金莲花露［1，2］是以金莲花为原料提取而制成的功能性饮品，具有清咽润喉、清热解毒之功效。目前，金莲花的药品和产品很多，本实验仅对金莲花露的毒理学安全性评价实验进行研究。现报道如下。
       1   材料与方法
       1.1   样品由承德颈复康药业集团提供，外观为淡黄色液体，推荐量每人600 ml/d。因推荐量较大，本实验采用喷雾干燥粉剂，外观为黄色，推荐量为每人1.0 g/d。
       1.2   实验动物选用河北医科大学实验动物学部提供的清洁级昆明种小鼠（批准号为医动字第04056号）及SD大鼠（批准号为医动字第04057号）。
       1.3   小鼠急性毒性实验选用清洁级昆明种小鼠20只，体重18～22 g，雌雄各半，按最大耐受量（MTD）法进行试验，剂量为20 000 mg/(kg·bw)，采用等体积灌胃法［0.2 ml/(10g·bw)］24 h内两次灌胃，连续观察两周。记录中毒表现及死亡情况。
       1.4  大鼠急性毒性实验选用SD大鼠20只，体重180～220 g，雌雄各半，按最大耐受量（MTD）法进行试验，剂量为20 000mg/(kg·bw)，采用等体积灌胃法［2 ml/(100 g·bw)］24 h内两次灌胃，连续观察两周。记录中毒表现及死亡情况。
       1.5   遗传毒性实验
       1.5.1   Ames实验本实验采用平板掺入法，分加与不加S-9混合液两种。剂量分别为：0.005，0.025，0.25，1.0，5.0 mg/皿，另设空白对照和阳性对照组。阳性对照组使用2-AF 20 μg/皿、2，4，7-TNFone 1 μg/皿、NaN3 2.5 μg/皿、丝裂霉素C 4.0 μg/皿、1，8二羟基蒽醌50 μg/皿，每个剂量组做3个平皿，重复做两次。菌种为TA97(a)、TA98、TA100和TA100和TA102四株菌，由中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所提供，S9购自中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所，试剂从北京化学试剂公司购进。
       1.5.2   小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验选用清洁级昆明种小鼠50只，体重25～30 g，随机分为5组，每组10只，雌雄各半；设3个计量组：2 500，5 000，10 000 mg/kg体重，同时设阴性对照组（蒸馏水）和阳性对照组（CP 40mg/kg），各组均间隔24 h两次给样，第2次给样后6 h取胸骨骨髓制片，每只动物计数1 000个嗜多染红细胞，查微核发生率。
       1.5.3   小鼠精子畸形实验选用清洁级昆明种雄性小鼠25只，体重30～35 g，随机分为5组，每组5只，雌雄各半；设3个剂量组：2 500，5 000，10 000 mg/kg体重，同时设阴性对照组（蒸馏水）和阳性对照组（CP 40 mg/kg）。连续经口给样5 d，从首次给样计第35天处死动物，取双侧附睾制片，每只动物计数1 000个精子，查畸形率。
       1.5.4  30 d喂养实验选用清洁级SD大鼠80只，体重50～70 g，随机分成4组，每组20只，雌雄各半，单笼饲养。受试物设3个试验剂量，分别为0.84，1.67，3.34 g/kg体重（最高剂量相当于推荐量的200倍），另设一个阴性对照组。将受试物分别掺入到基础饲料中喂饲各组动物，连续30 d。大鼠的进食量按其体重的10%计算，饲料中所含受试物分别为0.84%，1.67%，3.34%，阴性对照组只给基础饲料。喂养期间各组动物均自由进食和饮水，每周称鼠体重并记录饲料消耗量一次，实验末期采尾血进行血液学和生化学检查。观察指标有生长发育、食物利用率、血液学检查（采用血球计数仪测定）、生化学检查（分离血清后采用相应试剂盒及AutohumalyzerF1全自动生化分析仪测定）。实验末期处死大鼠，解剖取肝、脾、肾、睾丸（卵巢）称重，计算脏器系数，然后对肝、肾、胃、肠进行病理组织学检查（石蜡切片）。
       2  结果
       2.1   小鼠急性毒性实验金莲花露在20 000 mg/kg.bw的剂量条件下，两种性别的小鼠均未见明显的中毒症状及死亡。雌雄小鼠MTD的摄入量均大于20 000 mg/(kg·bw)。
       2.2   大鼠急性毒性实验金莲花露在20 000mg/(kg·bw)的剂量条件下，两种性别的的大鼠均未见明显的中毒症状及死亡。雌雄大鼠MTD的摄入量均大于20 000mg/(kg·bw)。根据急性毒性分级，金莲花露属无毒物。
       2.3   遗传毒性实验
       2.3.1   Ames实验金莲花露对TA97(a)，TA98，TA100，TA102四株试验菌株，在加与不加S-9的情况下，均未呈现致突变作用。
       2.3.2   小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验金莲花露3个剂量组的微核发生率均在正常范围内，经统计学处理与阴性对照组比较无显著性差异，与阳性对照组比较差异性显著。该产品小鼠微核实验阴性。
       2.3.3   小鼠精子畸形实验金莲花露3个剂量组的精子畸形率均在正常范围内，经统计学处理与阴性对照组比较无显著差异，与阳性对照组比较差异显著。该产品小鼠精子畸形实验阴性。
       2.4   30 d喂养实验一般状况：经过30 d喂养，大鼠全部存活，各组动物发育良好，未见异常特征。
       2.4.1   对大鼠体重的影响金莲花露对大鼠体重无显著性差异。
       2.4.2   对大鼠食物利用率的影响各组大鼠食物利用率与其对照组比较无显著性差异。
       2.4.3   血液学检查实验结束时，各组动物红细胞、血红蛋白、白细胞及分类均在正常范围内。
       2.4.4   末期生化检验结果实验结束时，各组动物谷丙转氨酶（速率法）、血糖（己糖激酶法）、尿素氮（紫外法）、总胆固醇（酶法）、甘油三酯（酶法）、肌酐（苦味酸两点法）、总蛋白（双缩脲法）、白蛋白（溴甲酚氯法）等指标均在正常范围内波动。
       2.4.5   金莲花露对大鼠脏器系数的影响各组脏器系数均无显著性差异。
       2.5   解剖及病理组织学检查大体解剖各组大鼠各脏器未见异常。病理组织学检查各组大鼠的肝小叶结构正常，肝细胞无变化、坏死，小叶间无炎细胞浸润和纤维组织增生；肾小球、肾小管结构正常，肾小管肾上皮细胞无变性、坏死，管腔内无异常物质，间质无炎细胞浸润、出血和纤维组织增生；胃壁及十二指肠壁结构清晰完整，无出血、炎细胞浸润，胃上皮细胞及肠黏膜上皮细胞无变性、坏死、缺损。未见金莲花露对受试物组动物肝、肾、胃及肠产生特异性的病理改变。
       3  小结
       
       本实验结果表明，金莲花露对两种性别的大、小鼠的MTD均大于20 000mg/（kg·bw），说明该产品属实际无毒物；三项致突变实验结果阴性；大鼠30 d喂养实验各项指标均无明显异常。
       【参考文献】
         　　［1］ 辛春兰，潘海峰，李守拙，等. 金莲花露中总黄酮和荭草苷的测定［J］.中草药，2005，36（9）：1340.
       
       ［2］ 辛春兰，潘海峰，李守拙，等. 正交设计优选金莲花的提取工艺［J］. 中草药，2005，36（12）：1818.