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       【摘要】 
       目的优化中药三棱炮制工艺，考察影响三棱炮制的因素。方法参照《中国药典》重点考核醋制工艺，对其进行多因素考察，设计正交实验，在此基础上参考文献中其它炮制工艺，进行横向比较。考察标准以三棱的有效部位总黄酮为标准，采用紫外分光光度法（UV）进行含量测定，并对数据作统计学处理（方差分析），找出最佳优化方案。结果醋炙三棱总黄酮含量为最高，比生品含量增加29.79﹪左右，麸炒三棱含量为最低，比生品含量减少52.25﹪左右。其它炮制方法中醋烤三棱总黄酮含量比生品含量增加13.10﹪，醋煮三棱总黄酮含量比生品含量增加3.73﹪，醋蒸三棱总黄酮含量比生品增加8.63﹪，清蒸三棱总黄酮含量比生品含量增加3.05﹪；醋炙的最佳工艺为20﹪的用醋量浸润10min在150℃下炒制15min。结论炮制方法直接影响三棱总黄酮含量，该研究为优选三棱最佳炮制工艺提供参考。
       【关键词】  三棱； 炮制工艺优化； 紫外分光光度法； 总黄酮
       Optimization of the Procossing Method of the Chinese Traditional Medicine Rhizoma Sparganii
       ZHANG Jian, MA Lin, CHEN Zhijuan
       (College of Chinese Traditional Medicine in Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, 300193, China)
       Abstract:ObjectiveTo optimize the processing method of the Chinese traditional medicine Rhizoma Sparganii. MethodsTo study the vinegar roasting-processing method emphatically, which is embodied by Chinese pharmacopoeia. Review the method by multifactor study, design the orthogonal expermient and on this foundation consult other processing method recorded by literature as well as compare with one another. The review criterion is based on the valid part of gross flavone, utilize UV method to measure the content and cope with the datum by statistics so as to find out the optimal scheme.ResultsThe Rhizoma Sparganii of vinegar roasting-processing had the highest content of gross flavone, which increased by 29.79% of the raw medicine. Bran processing Rhizoma Sparganii holds the lowest content of gross flavone, which deareased 52.25% of the raw medicine. Other processing methods indicated that Rhizoma Sparganii processed by vinegar baking, steam, braising as well as steam braising severally increased by 13.10%,3.73% ,8.63%and 3.05% that of the raw medicine. The optimal processing method of vinegar toasting contained 20% vinegar usage, 10 min soakage and 15min frying. ConclusionThe processing method affects the content of gross flavone directly. The study may offer reference for optimizing the best processing method of Rhizoma Sparganii.
       Key words:Rhizoma Sparganii.；  Optimal processing method；  UV；  Gross flavone
       
       三棱是常用的活血化淤中药，具有破血行气，消积止痛的作用，临床上用于心血管疾病以及子宫肌瘤、子宫内膜异位症等妇科疾病的治疗。目前三棱主要炮制方法以醋制法居多，部分地区尚有麸炒或酒麸炒等方法。醋制法中又包括炙、炒、煮、蒸等不同炮制工艺。本实验重点以目前最常用的醋炙法［1］为突破口，考察影响醋炙法的因素和水平，探索最佳炮制工艺，并在此基础上与文献收载的其它炮制方法进行横向比较。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器紫外分光光度仪（UV-2401PC），电子天平（Mettler toledo）。
       1.2  试药  三棱药材由河北安国药材市场购入，经鉴定为黑三棱科植物黑三棱Sparganium stoloniferum Buch.-Ham.的干燥块茎。芦丁标准品（本校药化教研室提供，纯度>98%）、95﹪乙醇（分析纯）、5﹪亚硝酸钠、10﹪硝酸铝、0.025 g/ml氢氧化钠、蒸馏水、醋(市售)。
       2  方法和结果
       2.1  对照品溶液的制备精密称取减压干燥至恒重的芦丁对照品（自制）0.011 2 g置100 ml的容量瓶中，加60﹪乙醇适量使其完全溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（0.112 mg/ml）。
       2.2  供试品溶液的制备按照提取方法考察的结果（见“2.3”项）对不同炮制样品（见“2.5”项和“2.6”项）进行提取，得到供试品溶液。具体操作方法为取炮制样品粉末5 g，置于100 ml圆底烧瓶中，加入12倍量75﹪的乙醇溶液水浴加热，每次提取1 h，提取3次,过滤，合并滤液，置于100 ml的容量瓶中，并用75﹪的乙醇溶液定容至刻度，摇匀，即为供试品溶液。
       2.3  标准曲线的考察
       2.3.1  最大吸收波长的选择分别用对照品（芦丁）和供试品（三棱醇提物）在紫外－可见分光光度仪上进行全波长扫描（200～700 nm），比较两者的最大吸收峰，结果在250 nm和502.8 nm处各有一个吸收峰，考虑在250 nm左右很多成分都有吸收，会干扰实验结果，故选择502.8 nm为最大吸收波长。
       2.3.2  标准曲线的绘制精密吸取0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml上述标准液分别置于25 ml容量瓶中，再精密加入5﹪NaNO21 ml摇匀，放置6 min；加入10﹪Al（NO3）31 ml摇匀，放置6 min；加入NaOH溶液10  ml摇匀，用蒸馏水标定至刻度摇匀，放置15min，配制成含芦丁0，4.48，8.96，13.44，17.92，22.40，26.88 μg/ml的标准溶液。以第一瓶溶液作为空白对照，在波长502.8 nm处测定其它浓度下的吸收率。以芦丁的浓度（μg/ml）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线（见图1），回归方程：Y=4.48X，r=1，表明芦丁在4.48～26.88 μg/ml线性关系良好。
       图1  芦丁标准曲线（略）
       2.4  三棱提取方法的考察选用回流法提取三棱，考察乙醇浓度、提取时间、提取次数、乙醇用量倍数4个因素，每个因素考察3个水平，设计正交实验（见表1），考虑误差的影响，每次实验进行三次平行实验。具体方法是按照正交表L9（34）设计实验，每次称取三棱粉末5 g（过40目筛），置于100 ml圆底烧瓶中，按照实验设计进行回流提取，后放冷过滤到100 ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀，然后通过分光光度仪在502.8 nm处进行含量测定，以确定最佳提取方法。由实验结果（见表2）可知，提取因素主次为A>C>D>B，结合比位级可知最佳组合为A2B1C3D3。方法学考察显示ABCD均为极显著因素（见表3）［F值均大于临界值，F0.01(2,18)=6.01］，故最佳提取工艺为A2B1C3D3。即用12倍量的75﹪的乙醇溶液，每次提取1 h，提取3次，即为供试品溶液。
       表1  三棱提取工艺实验因素和水平（略）
       表2  三棱不同提取方案和实验结果（略）
       表3  提取工艺方差分析（略）
       **示非常显著性差异
       2.5  三棱醋炙工艺的考察参照文献［2］选用减压冷浸方法净制三棱药材，切片备用。考察醋炙温度、醋炙时间、浸润时间和用醋量4个因素，各设3个水平，建立正交实验表L9（34）（见表4）。考虑误差的影响，每次实验进行3次平行实验。炮制后按照优选后的方法提取（具体提取方法见供试品溶液的制备）。实验结果（见表5）显示炮制因素的主次为D>A>B>C，结合比位级最佳组合为A2B2C1D2。方差分析（见表6）显示因素A、B 为显著因素［F值>F0.05(2,18), F0.05(2,18)=3.55］，而B、C对实验影响不显著［F值< F0.05(2,18)］，故将B、C列入误差项处理。考虑实验最终测得含量和饮片形性状特征，最终选择最佳工艺为D2A2B3C1，即用20﹪的用醋量浸润10 min于150℃下炒制15 min即得。
       表4  三棱醋炙工艺实验因素和水平（略）
       表5  三棱不同醋炙方案和实验结果（略）
       表6  醋炙工艺方差分析（略）
       *示显著性差异
       2.6  三棱不同炮制品的制备及结果 参考文献收载的三棱其它炮制工艺［2］，分别测定含量，并与本实验中醋炙优化工艺进行横向比较，考察各方法的优劣（结果见表7）。由结果可知优化后的醋炙方法在黄酮含量上明显高于其它方法，说明优化后的醋炙工艺确实提高了炮制饮片的质量。
       表7  三棱不同炮制品总黄酮含量比较（略）
       3  方法学考察
       3.1  精密度实验 精密量取浓度为0.112 mg/ml的对照品溶液3 ml定容，重复测定5次,测定芦丁含量，计算RSD。RSD为0.62%。
       3.2  重现性实验 精密量取浓度为0.112 mg/ml的对照品溶液3  ml定容，重复测定5次,测定芦丁含量，计算RSD。RSD为0.53%。
       3.3  稳定性实验 精密量取浓度为0.112 mg/ml的对照品溶液3 ml定容，每隔10 min测定芦丁含量1次，计算RSD。RSD为1.23%。
       3.4  加样回收率实验 采用加样回收法，取已知含量的三棱粉末5份，精密称定5 g，置于100 ml的容量瓶中，分别精密吸取0.112 mg/ml的芦丁对照品溶液2 ml，置于上述100 ml的容量瓶中，按供试品溶液制备及测定法操作,计算结果。芦丁的加样回收率为103.57％，RSD为1.31％。
       4  讨论
       
       三棱目前有效成分不明确，可能的有效部位有黄酮类、甘露醇、皂苷、挥发油［3］。由于黄酮多具有活血化淤的作用，故本实验选用三棱总黄酮作为可能的有效部位，并以总黄酮为主要指标对其炮制方法进行考察。
       
       优化后的醋炙法总黄酮含量明显的比其它方法高，说明醋炙法比其它方法好，这和目前三棱主流炮制工艺相吻合。此外，本实验考察三棱的最佳醋炙工艺为20﹪的用醋量浸润10 min在150℃下炒制15 min，可以为三棱最佳醋炙工艺提供参考。
       【参考文献】
         　　［1］ 国家药典委员会.中国药典［S］.北京：化学工业出版社，2005：11.
       
       ［2］ 毛淑杰，沈 鸿，解静萍.三棱不同炮制品黄酮成分含量测定［J］.中国中药杂志，1999，24（1）：29.1.
       
       ［3］ 张淑运.三棱化学成分研究［J］.中国中药杂志，1995，20（8）：486.