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       【摘要】 
       目的观察颈性心绞痛家兔模型颈肌的病理学变化。方法选用大耳白兔，采用低头干预使家兔颈椎退变失稳并注射瘀血使其诱发出现心肌缺血性改变，建立颈性心绞痛动物模型，运用masson染色法观察颈肌的病理变化情况。结果模型组颈肌组织横断面可见肌纤维部分萎缩，粗细不均，肌纤维变性区域内有增生结缔组织长入及瘢痕形成，且颈肌肌纤维数量及横截面积均明显减少。结论颈椎失衡及局部炎症可导致颈肌本身发生明显的病理变化，而颈肌的异常又对颈椎静力平衡产生重要影响，这可能是颈性心绞痛的发病机理之一。
       【关键词】  颈性心绞痛 动物模型 颈肌 病理学
       
       Cervical Muscle Pathological Observation of Rabbit Model with Cervical Coronary Heart Disease
        TANG Dongxin, YANG  Zhu 
        （Guiyang College of Traditional Chinese Medicine,Guiyang, Guizhou 550002, China）
        Abstract：ObjectiveTo observe the cervical muscle pathological change of the rabbit model with cervical coronary heart disease. MethodsThe animal model of cervical coronary heart disease was established by injecting blood stagnation to induce the change of myocardial ischemia,and  the changes of cervical muscle was observed by masson staining.ResultsThe section atrophy of muscle fibers could be found in the neck muscle cross section of model group with caliber unevenness, hyperplasia appearance of connective tissue and cicatrization in the muscle fibers degeneration area, and the obvious decrease of the number of cervical muscle fibers and area of cross section. ConclusionThe cervical vertebrae destabilization and local inflammatory reaction can make the cervical muscle obvious pathological change, while the abnormal cervical muscle may put a great impact on the static equilibrium of cervical vertebrae which may be one of the pathological of cervical coronary heart disease.
        Key words： Cervical coronary heart disease；  Animal model；   Cervical muscle;  Pathology
        颈椎退行性变、椎体失稳，可导致支配心脏的交感神经受累而引起心肌缺血。颈椎失衡及局部炎症可导致颈肌本身发生明显的病理变化，而颈肌的异常又对颈椎静力平衡产生重要影响，这可能是颈性心绞痛的发病机理之一。为探讨交感神经如何受累，是单纯的神经因素所致还是有其他原因，颈椎失衡及瘀血阻滞的状态对颈椎结构会产生什么样的影响，我们进行了颈部肌群的病理学观察。
       1  材料与仪器
        1.1  动物健康大耳白兔40只，6个月龄，体重2.0～2.5 kg，雌雄不拘，由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(京)2005-0004。各组家兔均在贵阳中医学院实验动物研究所分笼饲养，喂标准兔饲料。
        1.2  试剂 多聚甲醛，浓甲酸:分析纯，北京益利精细化学品有限公司生产；浓盐酸，酸性品红，丽春红，橙黄G，亮绿SF，磷钨酸：分析纯，北京化工厂生产；多聚赖氨酸（粘片剂）poly-L-Lysine:ZLI-9006；苏木素：SIGMA-ALDRICH LTD，USA  Lot:074K4351；伊红：SIGMA-ALDRICH LTD，USA  Lot:064K4342。
        1.3  仪器光学显微镜：Nikon O-A-S型，日本产；石蜡切片机：AiHua QPJ-IC，中国产；生物组织自动脱水机:AiHua TSJ-IA，中国产；生物组织包埋机：AiHua BMJ-1，中国产；图象分析系统：Biomias2001图象分析系统, 四川大学图象图形研究所研制。
       2  方法
        2.1  颈性心绞痛动物模型制备［1］40只家兔适应性饲养1周后，随机分为对照组和模型组。模型组家兔用3％戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，并取俯卧位固定于操作台上，常规术野碘酒、酒精消毒，C臂X光机引导下穿刺，抵达家兔左侧第7颈椎横突，选择小关节下角处为进针点，向深面进针至针尖抵达骨质，用制备好的3ml瘀血注入，瘀血浸润模型组家兔左侧颈夹肌，横突间肌与横突棘肌的肌内与肌间隙。待家兔苏醒后，送回笼养。次日，将模型组家兔放置于特制的低头位框架中以改变颈部正常应力分布，每只家兔的低头角度为45。，1次/d，每次低头5 h，松解后笼中自由饲养。2周后重复注射1次。低头饲养12周。对照组不做任何处理。
        2.2  观察指标与方法
        2.2.1  组织学观察造模后12周取材，采用空气栓塞法处死家兔，即刻取颈前胸锁乳突肌，生理盐水冲洗后放入已准备好的4%多聚甲醛固定液瓶中。经脱水、脱钙、石蜡包埋、切片,HE及masson染色，进行组织病理学检查。
        2.2.2   显微镜观察及图像分析显微镜的物镜固定为：40×。光栅孔径：0.25。光源电压：9 mV。曝光时间：0.1 ms。色温为5 500 K。分辨率：1 600×1 200。图像采集程序为：Biomias2001。
        2.2.3  肌纤维计数图像采集显微镜下，每张横断面切片随机取放大200×的5个视野， 利用图像采集程序计数每张切片所含的肌纤维数目。
        2.2.4  肌纤维横截面积的测量图像采集显微镜下，每张横断面切片随机取放大（400×）的5个视野，利用图像分析程序测量该片肌纤维总横截面积，肌纤维横切面积(μm2)=所测总横截面积/显微镜放大倍数。
        2.2.5   统计学处理实验结果用±s表示，采用t检验。
       3  结果
        3.1  大体标本观察对照组可见肌组织标本颜色一般为淡红色，表面光滑。模型组肌组织颜色暗，部分标本呈暗褐色，表面不平，组织扭曲。
        3.2  光镜观察结果对照组肌组织横断面(见图1)可见，肌纤维排列整齐，着色均匀，粗细相近，横纹清晰，肌核细长位于细胞膜下，肌纤维少见间质组织。
        模型组肌组织横断面(见图2)可见肌纤维部分萎缩，粗细不均，少量肌纤维着色淡，呈肌浆疏松状，核增多，分布紊乱，肌纤维变性区域内有增生结缔组织长入及瘢痕形成，Maaaon染色标本显示结缔组织内含较多胶原纤维。
        3.3  图像分析测量结果造模12周后，模型组与对照组肌纤维数量及横截面积变化见表1。表1  模型组与对照组肌纤维数量及横截面积变化(±s)与模型组比较，*P＜0.05
       4  讨论
        该实验模型采用低头干预使家兔颈椎退变失稳并注射瘀血使其诱发出现心肌缺血性改变。由于长期异常应力及炎症刺激使颈部肌肉的收缩力成倍增高，同时颈部伸肌的拉应力也显著增长。若长期处于这种状态下，会出现肌肉劳损、肌肉痉挛、肌肉张力下降，结果就会发生动态平衡失调。就肌组织本身而言，模型组出现了肌纤维部分萎缩，粗细不均，肌纤维变性，区域内有增生结缔组织长入及瘢痕形成，肌横纹模糊或消失，个别纤维呈节段性坏死，肌纤维间大量间质增生等病理变化。可见，长期颈部肌肉处于高负荷状态下，可导致肌组织本身发生明显的病理变化。由此证明，颈椎动力失衡和颈肌的异常互为因果，有着密切的关系，同时又对颈椎静力平衡产生重要影响。
        通过对颈肌组织标本的图像结果分析，发现实验前后肌纤维的数量及横截面积均较对照组明显下降。一般认为，肌纤维的横截面积和数量可反映肌肉的功能状态。Mac Dougal［2］等认为肌纤维的横截面积与肌肉的使用有关，锻炼则增加，反之则减少。通常，肌纤维增粗以适应强壮的肌肉活动，即使用性肥大;反之，若肌肉长期不活动，骨折的治疗期，肌纤维则变细，即所谓的废用性萎缩。而且肌肉运动后的变粗是由肌浆的增多和肌纤维间结缔组织增多所致。Wharton等［3］对颈椎病患者和正常人的颈部浅部肌肉和深部肌肉组织进行检查发现，颈椎病研究组肌纤维萎缩，且部分肌肉已经遭受慢性的部分去神经作用。可见，颈椎失衡及局部炎症可导致颈肌本身发生明显的病理变化，而颈肌的异常又对颈椎静力平衡产生重要影响，这可能是颈性心绞痛的发病机理之一。
        
       【参考文献】
         ［1］ 唐东昕，杨 柱，金亚弦.应用气血理论建立颈性心绞痛动物模型的探讨［J］.辽宁中医杂志,2008，35（3）：364.
       
       ［2］ Mac Dougall JD, Elder GC, Sale DC，et al. Effects of strengthtraining and immobilization on human muscle fiber ［J］.Eur J Appl Physiol Occup Physiol, 1980, 43(1):25.
       
       ［3］ Wharton SB，Chan KK，Pickard JD, et al. Paravertebral muscles indisease of the cervical spine［J］.J Neurol Neurosurg Psychiatry，1996，61(5):461.