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       【摘要】 
       目的研究脱蛋白和未脱蛋白银杏外种皮粗多糖（GBEP）对免疫功能低下小鼠的免疫调节作用。方法采用药物方法建立免疫抑制小鼠动物模型，利用腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、血清溶血素抗体生成实验及脏器系数的变化，研究银杏外种皮粗多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。结果银杏外种皮粗多糖可增强免疫抑制小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素抗体水平以及能对抗环磷酰胺引起的脾脏萎缩。结论 银杏外种皮粗多糖具有增强小鼠免疫功能的作用，脱蛋白粗多糖的免疫活性稍好于未脱蛋白多糖。
       【关键词】  银杏外种皮 多糖 环磷酰胺 免疫调节
       Effects of the Crude Polysaccharides from Ginkgo biloba Sarcotesta on Immune Function in Mice
        YANG Liuqing1，         MAO Guanghua2，WU Xiangyang3*，FAN Qunyan2，ZHU Xiaohuan2
        (1.School of Pharmacology,Jiangsu University, Zhenjiang,212013，China;2 School of Food and Biological Engineering,Jiangsu University, Zhenjiang,212013，China;3.School of Chemistry and Chemical Engineering, Jiangsu University, Zhenjiang, 212013，China)
        Abstract：ObjectiveTo study immune regulatory activity of the crude polysaccharides with or without protein from Ginkgo biloba Sarcotesta in immune depressive mice. MethodsThe model of immune depressive mice was established with cyclophosphamide.The function of macrophage in abdominal activity was measured. Spectrophotometric determination was adopted to evaluate the ability of antibody producing cell. The index of immune organ was used to observe the changes of immune organ"s weight. ResultsIt showed the GBEP could enhance mouse macrophage to swallow chicken erythrocytes，significantly enhanced the content of haemolysin in mouse body and significantly increased spleen index in immuno  suppression mice.ConclusionGBEP can enhance immune function of  immune deficient mice, and the crude polysaccharides without protein has much better immune activity than that with protein.
        Key words：Ginkgo biloba Sarcotesta ；  Polysaccharide；  Cyclophosphamide；  Immune adjustability
        植物活性多糖具有多种重要的生理功能，主要有诱导体内免疫物质产生、提高机体的免疫作用、抑制肿瘤的生长和扩散、降血糖和降血脂等作用。近年来研究表明，银杏外种皮未脱蛋白粗多糖具有杀死肿瘤细胞、增加SOD的形成、提高机体免疫细胞活性和增强机体免疫功能等作用［1～4］，但是关于脱蛋白银杏外种皮多糖的活性研究未见报道。本文研究了银杏外种皮粗多糖和脱蛋白多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响，以期为银杏外种皮多糖的研究开发提供科学理论依据。
       1  器材
        1.1  仪器贝克曼DU640型紫外分光光度计，美国贝克曼库尔特公司；隔水式电热水浴箱，杭州蓝天化验仪器厂；BH-2型OLYMPUS显微镜，日本奥林巴斯；蔡氏荧光显微镜，德国蔡氏公司。
        1.2  材料与试剂银杏外种皮未脱蛋白粗多糖，用GBEP-1表示，多糖含量为38.49%；脱蛋白银杏外种皮粗多糖，用GBEP-2表示，多糖含量为42.80%，两者均为本实验室制备；小鼠（清洁级KM小鼠），购于上海斯莱克实验动物有限责任公司, 合格证号:SCXK（沪）2002-0010号,饲养环境为清洁级，合格证号:SYXK（苏）2002-0007；环磷酰胺粉剂（CTX），江苏恒瑞医药股份有限公司；黄芪注射液，成都地奥九泓制药厂；生理盐水（氯化钠注射液），南京小营制药厂；肝素钠注射液，江苏万邦生化医药股份有限公司；姬姆萨染液，南京建成生物工程研究所。
        5%鸡红细胞悬液：由市售肉鸡采血约10 ml，以肝素生理盐水抗凝，再按1∶1加入注射用0.9% NaCl溶液，充分混匀洗涤后，3 000 r/min离心15 min，弃去上清液，余下的红细胞再洗涤2～3次。取洗净离心后的红细胞4 ml，用0.9% NaCl溶液配制成5%浓度，现配现用［5～7］。10%补体：取5只不同窝的豚鼠血，分离并合并血清，用生理盐水将血清配成10%浓度保存备用。
       2  方法
        2.1  小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验  取小鼠70只，体重18～22 g，随机分为7组，每组10只，♀♂各半，分别为正常组和CTX模型组（蒸馏水20 ml/kg），阳性药黄芪注射液组（0.1 ml/只），GBEP-1大、小剂量组（300，100 mg/kg），GBEP-2大、小剂量组（300，100 mg/kg）。除阳性药组（肌肉注射）外，各组动物灌胃（ig）给药，给药剂量均为20 ml/kg，每日ig 1次，连续给药7 d，第5天除正常对照组外，每组动物腹腔注射CTX 40 mg/kg(0.1 ml/10 g),第6天各重复注射1次。于最后1次给药后1 h，每鼠腹腔注射5% 鸡红细胞混悬液0.5 ml/只，给鸡红细胞后2 h，处死小鼠。按文献［5，6］方法测腹腔巨噬细胞吞噬功能，按如下公式计算得吞噬百分率和吞噬指数。
        吞噬百分率（%）=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数200个巨噬细胞×100%
        吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞数200个巨噬细胞
        2.2  小鼠溶血素抗体生成实验及对免疫器官的影响取小鼠70只，体重18～22 g，随机分为7组，每组10只，♀♂各半。分别为正常组和CTX模型组（蒸馏水20 ml/kg）、阳性药黄芪注射液组（0.1 ml/只）、GBEP-1大、小剂量组（300，100 mg/kg）,GBEP-2大、小剂量组（300，100 mg/kg）。除阳性药组（肌肉注射）外，各组动物灌胃（ig）给药。给药剂量均为20 ml/kg，每日ig 1次，连续给药12 d，于给药后第5天各组动物腹腔注射5%鸡红细胞悬液0.2 ml /只进行免疫，于给药后10 d除正常对照组外，每组动物腹腔注射CTX 40 mg/kg(0.1 ml/10 g)，第11天重复注射1次，末次给药后2 h，小鼠眼眶后静脉丛取血，按文献［5～7］方法测溶血素形成。脱颈处死取血后的小鼠，称其体重，然后取其胸腺和脾脏称重，计算胸腺系数和脾脏系数。
       3  讨论
        3.1  对小鼠吞噬细胞吞噬功能的影响由表1可见，CTX构建的模型组，其吞噬百分率、吞噬指数比正常组低（P<0.01）,说明环磷酰胺能显著降低小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，对非特异性免疫功能有较强的抑制作用；阳性药组的吞噬百分数、吞噬指数高于模型组（P<0.01或P<0.001），说明所选用的阳性药黄芪注射液能显著增强免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，并使其恢复到正常水平；银杏外种皮粗多糖（GBEP-1）小剂量组、银杏外种皮脱蛋白多糖（GBEP-2）小剂量组的吞噬百分数、吞噬指数与模型组均没有显著性差异，而GBEP-1大剂量组、GBEP-2大剂量组的吞噬百分数、吞噬指数与模型组有显著差异（P<0.05或P<0.01）。GBEP-1，GBEP-2给药组的吞噬百分数、吞噬指数都有进一步增强的趋势，并有一定的量-效关系。表1  GBEP-1和 GBEP-2对小鼠吞噬细胞吞噬功能的影响
        3.2  对小鼠溶血素水平的影响由表2可见，CTX构建的模型组的溶血素水平比正常组降低（P<0.001）,说明环磷酰胺能显著降低小鼠的血清溶血素水平，对体液免疫功能有较强的抑制作用；阳性药组的溶血素水平高于模型组（P<0.001）,说明所选用的阳性药黄芪注射液能显著增强免疫抑制小鼠的血清溶血素水平，并使其恢复到正常水平；GBEP-1，GBEP-2小剂量组的溶血素水平与模型组没有显著的差异，而GBEP-1，GBEP-2大剂量组的溶血素水平与模型组有较大显著差异（P<0.001）。随着剂量的增加，GBEP-1，GBEP-2给药组的血清溶血素抗体水平都有进一步增大的趋势，并具有一定的量-效关系。
        3.3  对小鼠免疫器官脏器系数的影响由表3可见，CTX构建的模型组，其胸腺系数、脾脏系数比正常组降低（P<0.001或P<0.05），说明环磷酰胺能引起小鼠的免疫器官萎缩；阳性药组的胸腺指数与模型组的无统计学意义，但其脾脏系数与模型组的有显著性差异（P<0.01）,说明阳性药黄芪注射液不能对抗环磷酰胺引起的胸腺萎缩，但能对抗环磷酰胺引起的脾萎缩。GBEP-1大、小剂量和GBEP-2小剂量组对于胸腺指数与模型组无显著差异，GBEP-2大剂量组对于胸腺指数与模型组有显著差异（P<0.05）；GBEP-1 和GBEP-2的大、小剂量组脾脏系数与模型组均有显著差异（P<0.05或P<0.01 或P<0.001）。表2  GBEP-1和 GBEP-2对小鼠溶血素水平（OD值）的影响表3  GBEP-1和 GBEP-2对小鼠免疫器官的影响(±s)与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；=10
        植物多糖近年来日益受到国内外学者的重视。在探讨中药补益作用及其物质基础的过程中，植物多糖被看作是有广泛免疫活性的有效成分。对银杏外种皮多糖免疫活性的实验结果表明，银杏外种皮粗多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用一方面促进免疫器官的修复，另一方面通过增强腹腔巨噬细胞活性和通过体液免疫途径来实现，表明其免疫活性较为广泛。实验结果为银杏外种皮粗多糖的补益作用提供了重要的实验依据，也为银杏外种皮粗多糖补益作用的机理研究提供了重要线索。
       【参考文献】
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       ［2］ 吴向阳，茆广华，仰榴青，等.银杏外种皮粗多糖提取工艺研究［J］.食品科学，2006，27（10）：372.
       
       ［3］ 贾玲昌，许爱华，宋根萍，等.2种银杏外种皮多糖的成分及药效学比较研究［J］.中国新药杂志，2001,10(8):532.
       
       ［4］ 陈华圣，许爱华，王 翊，等.银杏外种皮多糖对免疫功能低下小鼠IL-2活性及sIL-2R的影响［J］.中药药理与临床,2001,17(4):18.
       
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