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       【摘要】 
       目的建立罐组式动态逆流提取蛹虫草多糖的方法。方法通过单罐单因素实验，正交设计分析提取时间、提取温度和料液比对蛹虫草多糖提取的影响；设计罐组式动态逆流提取装置，重点探讨料液比和提取级数对多糖提取得率的影响。结果罐组式动态逆流提取虫草多糖的条件为：提取时间150 min，温度90℃，料液比1∶15和级数为5级，提取率88.8%，显著高于单罐提取率79.5%。结论蛹虫草多糖的罐组式动态逆流提取工艺节省能源，缩短生产时间，提取率较高。
       【关键词】  蛹虫草 多糖 逆流提取
       Study on Processing Technology of Pot Groups Dynamic Refluence in Extracting Polysaccharide from Cordyceps militaris (Fr) Link
       GUO Maixi, LI Zaixin*, PAN Ming, LEI Yunling, XIAO Zhenghua, XIE Wanru
       Department of Bioengineering, Sichuan University of Science and Engineering, Zigong 643000, China
       
       Abstract：ObjectiveTo establish processing technology of pot groups dynamic refluence in extracting polysaccharide from Cordyceps militaris (Fr) Link.MethodsEffects of extraction time , temperature and ratio of dosage liquor and number of pots on generation of polysaccharide was studied in single factor test, orthogonal design. ResultsThe optimal extraction conditions of polysaccharide was 150 minutes, 90℃ and 1∶50 of the ratio of dosage liquor，5 pots in the pot groups dynamic refluence. The difference was significant between the extracted polysaccharide of polysaccharide in the dynamic countercurrent and that of single pot(P<0.01).ConclusionThe extracting process of pot group dynamic refluence extraction can get more effective components, save energy and shorten the time of manufacturing.
       Key words：Cordyceps militaris(Fr)Link；  Polysaccharide；  Countercurrent extraction
       蛹虫草Cordyceps militaris(Fr)Link属子囊菌亚门(Ascomyxotina)麦角菌科(Clavicipitaceae)虫草属［1］。因其药效成分与冬虫夏草Cordyceps sinensis相似，现已逐渐成为其替代品入药。虫草多糖是蛹虫草菌丝体主要生物活性成分，大量医学实验证实，虫草多糖可活化巨噬细胞，刺激抗体产生，提高人体免疫能力，抑制肿瘤细胞的生长和扩散［2］。蛹虫草多糖一般采用水法提取，但蛹虫草多糖黏度非常高，因而单罐提取中，随着多糖不断溶出，体系黏度迅速增加，使传质推动力削弱，多糖提取效率较低，且单罐提取时间长、溶剂耗量大，后序浓缩阶段负荷较高。为提高蛹虫草多糖的提取效率、降低提取成本，本文利用耐高温三角锥瓶（提取瓶）组合，形成连续逆流提取装置，开展蛹虫草多糖的提取实验，分析提取率、提取罐数和料液比等影响因素。
       
       1  材料
       采收后的蛹虫草大米固体培养基，由四川理工学院生物制药实验室提供。乙醇、葡萄糖 、浓硫酸、丙酮和苯酚等试剂均为分析纯。
       2 方法
       2.1  单罐提取工艺取蛹虫草采收后的固体培养基，50℃烘干粉碎，过100目筛，单罐回流装置提取蛹虫草多糖。采用不同温度、时间和料液比,重复3次，正交实验回归分析［3］。
       2.2 连续逆流提取方法称取上述烘干的虫草粉3 g，加入到500 ml耐高温的三角锥瓶(提取瓶)中，编号，加入适量的去离子水，90℃水浴。30 min后，纱布过滤，将药渣留原提取瓶，药液转入下一级提取瓶，逐次转瓶，经多级转移后，收集药液，淘汰起始提取瓶药渣，在末尾增加药粉［4］。设置料液比分别为为1∶15，1∶30和1∶60，罐数为4，5和6。
       2.3 提取滤液的处理提取滤液冷却后，在6 000 r/min离心10 min，加入3倍95%乙醇。4℃静置24 h，在6 000 r/min离心10 min，去除上清液，依次再加入一定量的无水乙醇、乙醚和丙酮洗涤2次, 60℃下真空干燥得粗多糖。
       2.4 多糖含量及其提取率分析采用蒽酮-硫酸法测定总糖,3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖；多糖=(总糖含量-还原糖含量)×100 %, 以葡萄糖为标准品(校正系数0.9)。多糖总提取率(%) = 粗多糖量/（原料粗多糖总含量×投料量）×100%
       3 结果
       3.1  单罐提取正交实验分析，溶媒水量、提取温度和次数对蛹虫草多糖提取的影响最大,提取时间次之，最佳提取条件：温度90℃，溶媒水量20倍，分3次提取，每次3 h。经醇沉，两次粗多糖的得率为79.5%，3次得率88.2%。
       3.2 逆流提取温度的选择蛹虫草多糖的罐组式连续逆流提取，料液比在1∶15 较为适宜，可以达到单罐两次提取的效果。料液比高，有利于多糖的透出，提取得率也较高（如表1）。当料液比低于1∶10 时，提取率显著降低，且提取液粘度高,后处理过滤、离心操作困难。根据多次实验，并结合提取工艺的后处理浓缩、沉淀操作，以1∶15 的料液比进行蛹虫草多糖的逆流提取，具有良好的操作性和经济性。同时对该设置的不同提取瓶数组合，对虫草多糖的提取率比较。结果发现，采用5罐组合, 料液比为1∶15情况下，得到的虫草多糖提取率88.8%（如表1）。罐数过少可能会导致提取不完全；罐数过多，虫草多糖提取率更高，但与5罐组合其无显著性差异，也增加了工作量、时间和能量消耗。表1  连续逆流提取不同料液比和提取罐数的多糖得率（略）
       3.3 提取工艺比较连续逆流提取与单罐二次提取比较，提取率提高了8.5 % ,提取时间缩短了3 h，每克原料能够减少溶媒水用量9g，同时也相应地降低了浓缩过程的蒸发水量(表2) ，从而表明连续逆流提取具有提取得率高、提取时间短、溶媒水少、后续处理简化等优点。表2  单罐和连续逆流提取工艺参数比较（略）
       4 讨论
       本实验在特殊环境条件下，采用耐高温的三角锥瓶作为提取罐，组合形成连续逆流提取装置,实现了蛹虫草与水的逆流接触，产生较高的传质推动力，节省时间，减小溶媒水，显著提高提取率，显著优于单罐提取。本装置的设计节省成本，结构简易，实验原料可多可少，提取液药效成分稳定，提取效率高，适于实验室连续逆流提取工艺的研究，为较大规模连续逆流提取工艺的研究和生产奠定了基础。
       【参考文献】
         　　［1］魏景超.真菌鉴定手册［M］.上海：上海科学技术出版社，1979：331.
       
       ［2］Li SP, Yang FQ, Tsim KWK. Quality control of Cordyceps sinensis, a valued traditional Chinese medicine［J］. J. pharm. biomed. Anal, 2006, 41: 1571.
       
       ［3］来永斌，王琦，孙月.蛹虫草多糖含量的测定与分析［J］.中成药，2001，23（7）:517.
       
       ［4］季艳艳，常新全，赵润怀，等.罐组式动态逆流提取技术及其在中药提取中的应用［J］.中国现代中药，2006，8（12）：27.