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       【摘要】 
       目的探讨温胆汤的不同配伍对大鼠纹状体多巴胺受体的影响。方法SD大鼠70只，随机分为正常对照组（A组）、模型对照组（B组）、祛痰+理气组（C组）、祛痰+健脾祛湿组（D组）、理气+健脾祛湿组（E组）、温胆汤全方组（F组）、氯丙嗪对照组（G组）。C、D、E、F组灌饲相应药液20 ml/kg，1次/d，连续灌胃21 d；G组于最后3 d腹腔注射氯丙嗪4.5 mg/kg；除A组外，其他组均于最后3 d同时腹腔注射阿朴吗啡（APO） 2 mg/kg诱发大鼠精神分裂症动物模型。分离双侧纹状体,采用放射配基结合分析方法，绘制饱和曲线，以B/F对B作Scatchard图、计算Bmax和KD值。结果温胆汤全方组、氯丙嗪组脑纹状体D2受体的Bmax及KD值较模型组明显减少（P<0.01），特异结合曲线亦明显低于模型组，说明温胆汤、氯丙嗪均有显著抗精神病作用。氯丙嗪组较温胆汤全方组降低Bmax、KD值有明显差异（P<0.01或P<0.05），说明温胆汤的抗精神病作用弱于氯丙嗪。结论温胆汤具有抗精神病的药理作用，其作用机制可能是阻断D2受体与DA结合，从而抑制过度亢盛的DA功能。
       【关键词】  温胆汤 精神分裂症 纹状体 多巴胺受体 疾病模型 动物 大鼠
       温胆汤是一首化痰经典名方，临床用治“无形之痰”所致精神分裂症的疗效十分显著，但其作用机理不甚明确。为从实证意义上理解温胆汤配伍组方的经验说理，揭示方中“祛痰”“理气”“健脾祛湿”功效的现代内涵，将长期以来该方配伍原理、功效主治的经验理解建立在科学、客观的实验基础上，为防治精神疾病提供有力的证据，我们以传统中医理论为依据，将本方拆为“祛痰+理气”“祛痰+健脾祛湿”“理气+健脾祛湿”组，观察了温胆汤的不同配伍对大鼠纹状体D2受体数目与亲和力的影响，从受体水平探讨了温胆汤的抗精神病作用机理。
       1  材料与仪器
       1.1 动物 
       SD大鼠70只，雌性，体重（220±20）g，清洁级，由湖南中医药大学实验动物中心提供。
       1.2 药物、试剂与仪器  
       温胆汤全方及各拆方剂量均按照全国高等中医院校《方剂学》教材1997年版为准，温胆汤全方：茯苓30 g，半夏10 g，竹茹10 g，枳实10 g，陈皮10 g，甘草6 g，大枣3枚，生姜3片。将全方及各拆方组所需剂量从杏林药店一次性购回，加水浸泡30 min，煎煮30 min两次，合并滤液，浓缩成1∶1药液（每毫升药液含生药1g），4℃冰箱保存备用；阿朴吗啡为沈阳第一制药厂产品（规格：5 mg/ml）；氯丙嗪为江苏金坛市制药厂生产（规格：50 mg/2 ml）。Chlorpromazine、Iodogen、Sephadex G50均购自美国Sigma公司；125I-Na购自四川成都核动力研究所；GC-300γ放射免疫计数器（中国科学技术实业总公司中佳光电仪器分公司）；MDF381/AT  -78℃低温冰箱（日本）。
       2 方法
       2.1 造模方法 
       70只雌性大鼠按随机化原则分为7组，每组10只，分别为：A为正常对照组；B为模型对照组；C为祛痰+理气组；D为祛痰+健脾祛湿组；E为理气+健脾祛湿组；  F为温胆汤全方组；G为氯丙嗪对照组。造模方法及给药方法：参照徐叔云制作精神分裂症模型的方法［1］，按2 mg/kg剂量给予大鼠腹腔注射阿朴吗啡（APO），诱发大鼠精神分裂症动物模型。置大鼠于室温（19±2）℃，12∶12 h昼夜循环光照条件下生活，自由取水、饮食，稳定2周。A组每天灌胃生理盐水20 ml/kg，连续灌胃21 d；B组每天灌胃生理盐水20 ml/kg，连续灌胃18 d，于最后3 d腹腔注射APO 2 mg/kg；C、D、E、F组按大鼠与人的体表面积折算，等效剂量灌胃，灌饲相应药液20 ml/kg，1次/d，连续灌胃21 d，在最后3 d同时腹腔注射APO 2 mg/kg；G组于最后３d腹腔注射氯丙嗪4.5 mg/kg，同时腹腔注射APO 2 mg/kg。
       2.2 样本处理及观测指标 
       各组大鼠均于末次给药60 min后，在清醒状态下被断头取脑，并立即在冰台上分离双侧纹状体，称重，按1∶10(W/V)比例，加入预冷的50 mmol/L  Tris-HCl缓冲液（含50 mmol/L Tris，120 mmol/L NaCl, 5mmol/L KCl, 1 mmol/L MgCl2, 2 mmol/L CaCl2，pH 7.4），冰浴中内切式匀浆器匀浆1 min；离心（500 g，10 min，4℃）；取上清液，离心（20 000×g，20 min，4℃）；弃上清液，收集沉淀，用1ml反应液悬浮，置-78℃冰箱备用。蛋白质定量测定采用Lowry法；125I-Chlorpromzine的标记用Iodogen法；采用放射配基结合分析方法观测多巴胺D2受体数目与亲和力，均在中南大学湘雅校区核医学教研室完成。
       2.3 统计方法 
       结果以±s表示。各组间比较，先进行方差齐性检验，方差齐则采用方差分析及两两比较q检验；方差不齐则作完全随机设计的多组样本秩和H检验，进而作秩和t检验。
       3 结果
       温胆汤的不同配伍对D2受体的影响的饱和曲线图、Scatchard图分别见图1～2。温胆汤及其不同配伍对大鼠纹状体D2受体数量表达与亲和力的影响见表1。表1  温胆汤及其不同配伍对大鼠纹状体D2受体数量表达与亲和力的影响（略）
       结果表明，大鼠造模后Bmax、KD值明显升高（P<0.01或P<0.05），说明造模成功。温胆汤全方组、氯丙嗪组脑纹状体D2受体的Bmax及KD值较模型组、正常组明显减少（P<0.01），温胆汤全方组、氯丙嗪组的特异结合曲线亦明显低于模型组、正常组，提示温胆汤、氯丙嗪均有显著抗精神病作用。氯丙嗪组较温胆汤全方组降低Bmax、KD值有明显差异（P<0.01或P<0.05），提示：温胆汤的抗精神病作用弱于氯丙嗪。与模型组比较，祛痰+理气组能明显降低Bmax值（P<0.05），对KD值无明显影响，祛痰+健脾祛湿组、理气+健脾祛湿组对Bmax、KD值均无显著性影响（P>0.05），提示祛痰+理气组可能有部分抗精神病作用，而其它两配伍组无明显抗精神病作用。
       4 讨论
        近三十年来，多巴胺假说一直是精神分裂症病理机制的重要学说之一，该假说认为精神分裂症是由大脑某条多巴胺能的神经通路亢进所引起的。多巴胺能通路亢进可能由于DA或DA受体的密度增加所致［2］。随着现代医学的发展，发现D2受体与精神分裂症存在重要联系，多数典型抗精神病药能与DA受体尤其是D2受体以极高的亲和力结合，传统抗精神病药在治疗量时有70%～90%的D2受体被阻断［3］，其抗精神病效能一般与它们结合D2受体的亲和力呈线性相关，而D2受体主要分布于脑纹状体区。在病理情况下，D2受体的过度激活则可引起DA功能亢进，从而导致精神分裂症的发生。
       
       精神分裂症属中医“癫狂”范畴。对于精神分裂症的发病机制，诸多医家认为胆虚与痰气郁结为本病的主要病机。因此运用具有理气化痰，清胆和胃之功的温胆汤治疗本病，使痰热消，胆胃和，则癫狂自愈。从组方可以看出温胆汤具有鲜明的两大特色，一是理气（陈皮、枳实）以祛痰，一是健脾祛湿（茯苓、甘草）以化痰，其遣方的根本点均在于“祛痰”。从温胆汤的临床应用可以看出，温胆汤治疗精神分裂症以无形之痰为多见。
       
       温胆汤全方组、氯丙嗪组Bmax、KD值明显低于模型组，提示二者可下调DA受体的数目，与DA受体结合位点的亲和力增高，DA受体处于激活状态。由于氯丙嗪是D2受体的阻滞剂［4］，氯丙嗪与DA竞争参与受体结合，但是氯丙嗪与D2受体结合后并不产生生理效应，反能阻断DA与D2受体的结合，从而对抗DA的生理效应，即起到阻滞受体的功能。因此，温胆汤的抗精神病作用机理，可能与氯丙嗪一样，也是通过阻滞D2受体起作用。温胆汤全方组的特异结合曲线及Bmax、KD值明显低于模型组，由此我们初步推断温胆汤可能与D2受体以较大容量结合，下调D2受体的数目，使得与D2受体结合的DA减少，从而发挥抗精神病的作用，这与我们同期进行的实验研究中发现温胆汤组DA含量明显增高是一致的，也与Creese［5］初步观察到I型精神分裂症患者伴有脑内DA受体数目增加的现象是吻合的。但温胆汤抑制效应弱于氯丙嗪，这可能是因为氯丙嗪是一种化学纯品，进入体内后，迅速作用于靶器官，起效迅速，作用较集中，而温胆汤是一中药复方，成分复杂，有效成分浓度相对较低，作用较分散，故对中枢神经系统的抑制效应弱于氯丙嗪。
       温胆汤拆方配伍的3个组与模型组比较，祛痰+理气组能明显降低D2受体Bmax值，对KD值无明显影响，而其他两配伍组对Bmax，KD值均无显著影响，提示祛痰+理气组与D2受体结合不具备高亲和力，但可减少神经细胞膜上D2受体数目，可能有部分抗精神病作用。这正说明，祛痰理气是温胆汤的精髓所在，也是该方治疗癫狂的主要机理。因癫狂主要是由于气郁痰阻，蒙蔽心窍或扰乱心神引起的精神障碍，这势必影响到大脑中枢神经系统的功能，而化学递质在整个神经系统中起着传播神经冲动，传递信息的作用，温胆汤通过半夏、竹茹燥湿化痰，泄浊散结，陈皮、枳实疏理气机，通滞解郁作用，以影响中枢神经递质或受体的数量，来达到调节中枢神经系统，解除精神障碍，治疗癫狂的作用。
       从温胆汤全方与配伍的关系来看，祛痰+理气组与全方一样可下调D2受体数目，而祛痰+健脾祛湿、理气+健脾祛湿组既不能下调D2受体数目，也不能与D2受体的结合位点以高亲和力结合，这表明祛痰药（半夏、竹茹）与理气药（陈皮、枳实）在整首方剂中起着主导作用，但在下调受体数目强度方面，祛痰+理气组不及温胆汤全方，又表明了祛痰、理气、健脾祛湿三方面应互相配合，共同作用，才能达到最佳治疗效果。三拆方组之间无显著差异，亦说明温胆汤的三种不同配伍是密切联系，不可分割的，只有在组成了一个完整的方剂后才能充分发挥抗精神病作用，体现了温胆汤全方的整体的完整性。
       我们通过本实验初步推断，温胆汤的抗精神病作用机制可能是通过阻断D2受体与DA结合，从而抑制亢进的DA功能，这也可能是温胆汤祛无形之痰的物质基础。如果DA功能亢进为中医癫狂无形之痰的病理生化机制，那么温胆汤治疗精神分裂症的实质可能就是现代医学中阻断D2受体与DA结合的概念。这也可以说是为精神分裂症的多巴胺假说提供了中医方剂学方面的部分实验支持依据。
       【参考文献】
         　　［1］徐叔云,卞如濂，陈修.药理实验方法学［M］.北京:人民卫生出版社，2002：856.
       
       ［2］崔东红,姚华,刘开泰，等.精神分裂症的分子遗传学进展［J］.健康心理学杂志，2001,9(6):403.
       
       ［3］姜佐宁.非典型抗精神病药治疗精神分裂症的研究进展［J］.中华精神科杂志，1999,32(2):121.
       
       ［4］张德昌. 医学药理学［M］. 北京：北京医科大学，中国协和医科大学联合出版社，1998：445.
       
       ［5］Creese I, Morrow AL, Leff SE, et al. Dopamine receptors in the central nervous system［J］. Int Rev Neurobiol. 1982,23:255.