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       【摘要】 
       目的建立加味烂积丸的质量标准。方法采用薄层色谱法对制剂中的当归、吴茱萸、木香及川木香、白术进行了定性鉴别，并采用高效液相色谱法测定了制剂中大黄有效成分大黄素、大黄酚的含量。结果样品中均能检出当归、吴茱萸、木香及川木香、白术的特征斑点；大黄素在0.015 63～0.390 75 μg范围内呈线性关系（r=0.999 9），平均加样回收率为100.0%；大黄酚在0.034 48～0.862 μg范围内呈线性关系（r=1.000 0），平均加样回收率为99.8%。结论该法操作简便，结果准确，重复性好，可以控制加味烂积丸的质量。
       【关键词】  加味烂积丸；质量标准；大黄素；大黄酚； 高效液相色谱法
       Study on Quality Standard of Jiaweilanji Pill
       YU Xiaoqin，LI Ou，DONG Lin
       1.Sichuan Provincial Institute for Drug Control, Chengdu 610036, China； 2.Chengdu Jiuzhitang Jinding Pharamaceutical Co.，Ltd，Chengdu 610051，China
       Abstract：ObjectiveTo establish the quality standard of BaiJiang Tablet.MethodsRadix Aangelicae Ssinensis，Fructus Evodiae，Radix Aucklandiae and Radix Vladimiriae，Rhizoma Atractylodis Macrocephalae were identified by TLC.The contents of chrysophanol and emodin were determined by HPLC.ResultsThe linear range of chrysophanol was 0.015 63～0.3907 5 μg , and the average recovery was 100.0%; the linear range of emodin was 0.0344 8～0.862 μg, and the average recovery was 99.8%.ConclusionThe method is simple，accurate and with a good reproducibility and may be used for quality control of Jiaweilanji Pill.
       Key words：Jiaweilanji Pill；Quality standard；Chrysophanol and emodin；HPLC
         
       加味烂积丸由大黄、木香、川木香、当归、白术、吴茱萸等中药组成，具有消积化滞功效，可用于饮食积聚，胸满痞闷，腹胀坚结，消化不良。为了有效控制其内在质量，笔者采用薄层色谱（TLC）法分别对处方中当归、吴茱萸、木香及川木香、白术进行定性鉴别，并采用高效液相色谱（HPLC）法对有效成分大黄素、大黄酚进行含量测定。
       1  仪器与试药
       1.1 仪器
       Waters2695高效液相色谱仪, Waters2487紫外检测器，Empower色谱工作站。
       1.2 试药
       乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余所用试剂均为分析纯；大黄素对照品（批号110756-200210）、大黄酚对照品（批号110796-200309）、当归对照药材（批号120927-200310）、吴茱萸对照药材（批号120909-200307）及吴茱萸次碱对照品9110801-200203）、去氢木香烃内酯对照品（批号111525-200103）、白术对照药材（批号120925-200407）均由中国药品生物制品检定所提供。
       2 方法与结果
       2.1 薄层定性鉴别
       2.1.1 当归的鉴别
       取本品5 g，研细，加乙醚20 ml，超声处理15 min，滤过，滤液用1%氢氧化钠溶液5 ml洗涤，弃去水层，分取乙醚液，挥干，残渣加乙醚1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.3 g，加乙醚10 ml，同法制成对照药材溶液。再取缺当归的加味烂积丸同法制备成阴性对照溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述3种溶液各4 μl ，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上。显相同颜色的荧光斑点。结果见图1。
       2.1.2 吴茱萸的鉴别
       取本品5 g，研细，加乙醇10 ml，静置30 min，超声处理30 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取吴茱萸对照药材0.4 g，同法制成对照药材溶液。再取吴茱萸次碱对照品，加甲醇制成每毫升含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺吴茱萸的加味烂积丸同法制备成阴性对照溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述4种溶液各4 μl ，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｇ薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯-甲醇-三乙胺（19∶5∶1∶1） 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的两个荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果见图2。
       2.1.3 木香、川木香的鉴别
       取本品10 g，研细，加三氯甲烷30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至约5  ml，作为供试品溶液。另取去氢木香内酯对照品，加三氯甲烷制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺木香、川木香的加味烂积丸同法制备成阴性对照溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述3种溶液各5 μl ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷-环己烷（5∶1） 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图3。
       2.1.4 白术的鉴别
       取本品5 g，研细，加正己烷10 ml，超声处理15 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取白术对照药材0.5 g，加正己烷2 ml，同法制成对照药材溶液。再取缺白术的加味烂积丸同法制备成阴性对照溶液。照薄层色谱法实验，吸取上述3种溶液各5μl ，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以石油醚（60～90℃）-醋酸乙酯（50：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图4。
       2.2 大黄素、大黄酚的含量测定
       2.2.1 色谱条件
       色谱柱为Waters Symmetry shield RP18 （150 mm×3.9 mm，5 μm）；流动相为乙腈-甲醇-水-乙酸铵（70∶10∶20∶0.5）；流速1.0 ml·min-1；柱温30℃；检测波长215 nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3 000。
       2.2.2  测定波长的选择 以甲醇为溶剂，在波长范围200～400 nm对大黄素、大黄酚溶液进行光谱扫描，结果表明大黄素和大黄酚在（254±1）nm处均有最大吸收，与《中国药典》规定一致，因此选择254 nm为本品高效液相色谱法的测定波长。
       2.2.3 对照品溶液的制备
       精密称取经过五氧化二磷减压干燥12 h的大黄素对照品5.21 mg，置100 ml的量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密称取经过五氧化二磷减压干燥12 h的的大黄酚对照品8.62 mg，置100 ml的量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取上述大黄素对照品溶液 15 ml，大黄酚对照品溶液 20 ml，置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升含大黄素0.015 63 mg和大黄酚0.034 48 mg）
       2.2.4 供试品溶液的制备
       取本品，研细，取约1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液5 ml，置烧瓶中，水浴蒸干，加2.5 mo/L的硫酸溶液10 ml，超声处理5 min，再加三氯甲烷10 ml,置水浴中加热回流1 h，取出,放冷,移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器,洗液并入分液漏斗中，分取三氯甲烷液，酸液再用三氯甲烷提取两次，10 ml/次，合并三氯甲烷液，用2 g无水硫酸钠脱水，再用少量三氯甲烷洗涤容器及滤器，洗液并入三氯甲烷液中，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。
       
       分别精密吸取对照品溶液5 μl与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，按照上述测定方法，对大黄素及大黄酚对照品、加味烂积丸样品、缺大黄的阴性对照品进行了测定，结果阴性对照品在相应的保留时间无吸收峰出现，且大黄素、大黄酚对照品色谱峰峰形尖锐，对称性好；供试品中的大黄素、大黄酚色谱峰对称性好，与前后其它峰分离度大于1.5，达到基线分离。
       2.2.5 稳定性实验
       供试品溶液中大黄素、大黄酚的稳定性实验：取新制备的供试品溶液，每间隔2 h进样1次（10 μl），按上述色谱条件分别测定，，记录其大黄素、大黄酚色谱峰面积的变化，结果供试品10 h内稳定，RSD分别为0.92%和RSD=0.30%（n=6）。
       
       大黄素、大黄酚对照品溶液的稳定性试验：将新制备的的大黄素、大黄酚混合对照品溶液，每间隔2 h进样1次（5 μl）进行测定，结果，大黄素峰面积积分值的RSD=0.34%，大黄酚峰面积积分值的RSD=0.96%（n=6），表明在10 h内稳定。
       2.2.6 线性关系
       考察配制系列不同浓度（0.003 126，0.009 378，0.015 63，0.021 88，0.031 26，0.046 89，0.078 15 μg/μl）的大黄素对照品溶液，分别精密吸取5 μl注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积积分值A为纵座标，对照品量X为横坐标，作线性回归，得回归方程A = 7 191 076.5 X -11 981.4 (r=0.999 9,  n=7)。结果表明，大黄素在0.015 63～0.390 75 μg范围内线性关系良好。
        配制系列不同浓度（0.006 896，0.020 69，0.034 48，0.048 28，0.068 96，0.103 44，0.172 4 μg/μl）的大黄酚对照品溶液，分别精密吸取5 μl注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积积分值A为纵坐标，对照品量X为横坐标，作线性回归，得回归方程Y=11 073 892.6X -8 511.5  ( r=1.000 0,  n=7)。结果表明，大黄酚在0.034 48～0.862 μg范围内线性关系良好。
       2.2.7 重复性实验
       取同一批号加味烂积丸样品（060001）6份，分别按样品测定方法测定大黄素、大黄酚总含量。结果平均含量为0.72mg/g，RSD为1.22%（n=6）。
       2.2.8 加样回收实验
       大黄素：精密称取已知大黄素含量的样品（批号060001，大黄素含量0.288 3 mg/g）6份，置锥形瓶中，按样品测定方法操作，进行加样回收实验，测定大黄素峰面积并计算加样回收率。实验结果见表1。表1  大黄素加样回收率考察结果（略）
       结果大黄素平均加样回收率为100.0%，RSD= 0.95%（n=6），表明在95%～105%之间，本方法回收率良好。
        大黄酚：精密量取已知大黄酚含量的样品（批号060001，大黄酚含量0.431 6 mg/g）6份，置锥形瓶中，按样品测定方法操作，进行加样回收实验，测定大黄酚峰面积并计算加样回收率。结果见表2。表2  大黄酚加样回收率考察结果（略）
       结果大黄酚平均加样回收率为99.8%，RSD=0.93 %（n=6），表明在95%～105%之间，本方法回收率良好。
       2.2.9 样品含量测定
       按样品测定方法，测定3批加味烂积丸样品中的大黄素、大黄酚总量。结果见表3。表3  样品含量测定结果（略）
       3 讨论
          
       实验结果表明，采用TLC法对加味烂积丸中当归、吴茱萸、木香及川木香、白术等药材进行薄层色谱鉴别，经过多次实验，均能检出各药材的特征斑点，且阴性样品无干扰，表明本法具有良好的专属性和重复性。
       
       供试品溶液制备中，曾比较选用了8%盐酸溶液与2.5 mol/L硫酸溶液两种水解试剂，结果发现，8%盐酸溶液所水解的样品对所测得的色谱峰要产生干扰，分离效果不理想，因此本文选用2.5 mol/L硫酸溶液作为水解试剂。
       
       含量测定实验中，通过精密度、稳定性、重复性、加样回收率等方法学的相关指标考察，表明该方法操作简便、准确、重复性好，可作为加味烂积丸中大黄的含量测定方法，有效控制其内在质量。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：328.