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       【摘要】 
       目的建立蒙药那如三味丸中胡椒碱的含量测定方法 。方法采用高效液相色谱法测定胡椒碱的含量。色谱柱为Diamonsil-C18 (250 mm×4.6mm，5 μm)，流动相为甲醇-水(77∶23)，流速为0.5 ml/min，检测波长为343 nm，柱温为25℃ 。结果经过方法学考察，胡椒碱含量测定方法具有一定的专属性、准确性、重复性和可行性，样品在0.106～2.120 μg范围内呈良好的线性关系，平均加样回收率为100.0%, RSD为0.11%。结论实验方法简便、准确、分离效果好、线性范围宽、灵敏度高，可用于那如三味丸的质量控制。
       【关键词】  高效液相色谱法 那如三味丸 胡椒碱
        蒙药那如三味丸由制草乌、诃子、荜茇组成，具消“粘”，消肿，燥“协日乌素”，祛风、止痛、散寒的功效［1］。荜茇虽不是方中君药，但其具有温中散寒、行气止痛之功效，因此对治疗疾病同样起到重要的辅助作用。荜茇中含有胡椒碱、棕榈酸、氨基酸、挥发油及多种无机元素，现代药理研究表明，荜茇具有抗胃溃疡、抗惊厥、镇静、抗炎杀菌及降血脂等药理作用［2］。因此本文以胡椒碱为荜茇的定量指标进行含量测定，建立本品的质量控制标准。
       1   仪器和试药
        Waters 2695高效液相色谱仪，包括二级管阵列检测器、进样器、柱温箱；胡椒碱对照品(批号：0775-9702，供含量测定用，购于中国药品生物制品检定所)；那如三味丸(内蒙古民族大学附属医院制剂室提供)；所用试剂甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他为分析纯。
       2   方法与结果
       2.1   对照品溶液的制备
       准确称取胡椒碱对照品1.06 mg，置于10 ml量瓶中，加无水乙醇溶解，定容，即得。
       2.2   供试品溶液的制备
       称取蒙药那如三味丸2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加无水乙醇30 ml，密塞，摇匀，超声处理30 min，取出， 滤过,溶剂蒸干，用无水乙醇定容至10 ml量瓶中，即得。
       2.3   阴性对照溶液的制备
       按处方比例及制备工艺，制备无荜茇药材的阴性样品，按供试品溶液方法制备。
       2.4   色谱条件［
       3］色谱柱为Diamonsil-C18 (250 mm×4.6mm，5 μm)；流动相为甲醇-水(77∶23)；流速0.5 ml／min；检测波长343 nm；柱温25℃。色谱详见图1。
       2.5   方法学考察
       2.5.1   线性关系考察分别精密吸取对照品溶液 1.0，6.0，10.0，16.0，20.0 μl注入液相色谱仪，按色谱条件测定其峰面积，分别为1 234 707，9 308 843，16 152 055，26 248 719，33 250 480，以峰面积值(Y)为纵坐标，进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归，得回归方程为：Y=2×106X+638 567,r=0.999 8；结果表明，在0.106～2.120 μg范围内胡椒碱的吸收峰面积与进样量呈良好的线性关系。
       2.5.2   精密度实验精密吸取对照品溶液 1.0 μl，注入液相色谱仪，连续进样5次，依法测定，记录峰面积积分值，分别为1 097 543，1 047 294，1 015 764，1 044 684，1 042 985，RSD=2.82％，精密度良好 。
       
       2.5.3   稳定性实验精密吸取同一供试品溶液各5.0 ml，每隔4 h注入液相色谱仪，依法测定，吸收峰面积积分值分别为27 629 473，27 390 403，27 748 052，27 142 865，27 526 222，27 236 888，RSD=0.85％，结果表明，样品在24 h内稳定。
       2.5.4   重复性实验取同一批号蒙药那如三味丸6份，精密称定质量分别为2.003 2，2.002 2，2.002 3，2.001 8，2.003 1，2.003 3 g，按供试品溶液项下制备，依法独立测定，计算样品含量。结果含量分别为1.402，1.455，1.491，1.456，1.459，1.489 mg·g-1，平均值为1.459 mg·g-1， RSD为2.21％，表明重复性较好。
       2.5.5   回收率实验精密称取已知胡椒碱含量的供试品6份, 每份分别加入胡椒碱对照品适量,按“2.2”项下方法进行制备，依法测定，计算回收率。结果详见表1。表1  回收率实验结果（略）
       
       2.6   样品测定取3批那如三味丸，精密称定质量分别为2.048 4，2.047 3，2.029 2 g按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.4”项下色谱条件进样测定，峰面积分别为27 594 325，27 568 796，27399876，根据胡椒碱的线性回归方程，计算蒙药那如三味丸提取液中的胡椒碱含量，结果分别为1.461，1.461，1.465 mg/g，平均值为1.462 mg/g，RSD为0.16%。
       3  小结
        采用高效液相色谱法测定蒙药那如三味丸中胡椒碱的含量，胡椒碱在0.106～2.12 μg范围内呈良好的线性关系，加样平均回收率为100.0％，RSD为0.1101％。本法简单、快速、结果准确，可作为该制剂的质量控制方法。
       【参考文献】
         　　［1］中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药品标准［S］.蒙药分册,1998：98.
       
       ［2］李瑞和,苏日纳,郭林云，等.荜茇化学成分与药理作用研究概况［J］.中国民族医药杂志,2006，13（3）:73.
       
       ［3］李海生,贾宗才,张敏和,等. 荜茇中胡椒碱的反相HPLC测定法［J］.药物分析杂志，1986，6(6):347.