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       【摘要】 
       目的研究粟米草中的化学成分。 方法采用硅胶柱色谱层析, Sephadex LH-20，PHPLC等手段对有效部位进行分离纯化，通过理化和波谱分析方法鉴定化合物结构。 结果从粟米草中位分离得到9个化合物,分别鉴定为: α-菠甾醇（α-spinasterol, Ⅰ）、5，25-豆甾二烯醇（5，25-stigmastadienol， Ⅱ）、齐墩果酸(Oleanolic acid，Ⅲ)、α-菠甾醇-β-D-葡萄糖苷(α-spinasterol-β-D-glucoside，Ⅳ)、豆甾醇-β-D-葡萄糖苷(stigmasterol -β-D-glucoside，Ⅴ)、胡萝卜苷(daucosterol，Ⅵ)、山萘酚（kaemferol，Ⅶ)、牡荆素-7-O-β-D-葡萄糖苷（Vitexin-7-O-β-D-glucoside，Ⅷ)、芦丁(rutin，Ⅸ）。结论化合物Ⅰ，Ⅱ，Ⅳ，Ⅴ，Ⅶ，Ⅸ为首次从粟米草中分得，为进一步的活性筛选奠定了基础。
       【关键词】  粟米草 化学成分 分离鉴定 波谱分析
       The Chemical Constituents Isolated from Mullugo pentaphylla L.
       LIU Keyue， LIU Haijun，GAO Chunhua,LIU Jianyun,YANG Zhibin,XIANG Zunzhong,WANG Yanzhao
       （Medical College of Jiujiang University, Jiujiang, 332000, China）
       Abstract：ObjectiveTo study the chemical constituents in Mullugo pentaphylla L. MethodsThe compounds of active fractions were isolated by column chromatography with silica gel and Sephadex LH-20 column chromatography . Their structures were identified on the basis of spectroscopic evidences and physiochemical properties.ResultsNine compounds are isolated and identified as α-spinasterol（Ⅰ)、5，25-stigmastadienol（Ⅱ)、Oleanolic acid（Ⅲ)、α-spinasterol-β-D-glucoside（Ⅳ)、stigmasterol -β-D-glucoside（Ⅴ)、daucosterol（Ⅵ)、kaemferol（Ⅶ)、Vitexin-7-O-β-D-glucoside（Ⅷ)、rutin（Ⅸ).ConclusionCompound Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ were  isolated from Mullugo pentaphylla L.for the first time.
       Key words：Mullugo pentaphylla L.;   Chemical constituents;  Extraction and identification;  Spectroscopic analysis
        粟米草是番杏科粟米草属（Mullugo）植物Mullugo pentaphylla L.，主要分布在热带亚热带地区，在我国江西省及华南大部分地区均有分布。粟米草是东南亚国家的传统草药，具有清热解毒、抗菌利湿的功效，主治腹痛泄泻、疮疖肿毒、风疹等症［1］。现代医学研究表明，粟米草具有抗心律失常、降压等药理作用 ［2～5］。但其抗心血管疾病的药效物质基础尚未确定。为了研究其有效成分,开发利用粟米草植物资源，我们对粟米草的乙醇提取物的化学成分进行了研究。本实验结合活性追踪的方法，对其有效部位的化学成分进行了系统研究。从中分离得到9个化合物,现报道如下。
       1  材料与仪器
        粟米草药材采挖自江西省九江市庐山周边,经九江学院基础医学院高春华教授鉴定为粟米草属（Mullugo）植物粟米草Mullugo pentaphylla L.。熔点用X-4显微熔点测定仪测定,温度计未校正; 质谱用VGZAB-HS质谱仪测定；IR光谱用岛津IR-480型红外光谱仪测定。NMR用Bruker DRX-400核磁共振仪测定,MS用HP5973N MSD型质谱仪。层析用硅胶为青岛海洋化工厂产品,Sephadex LH-20 柱层析填料购于美国Sigma公司。所用试剂均为分析纯。
       2  方法
        粟米草干燥全草3 kg，切成1～2 cm小段，用10倍量80%乙醇加热回流提取两次，2 h/次。合并提取液,减压回收溶剂,得乙醇提取物浸膏90.5 g。该醇提物悬浮于水中,以石油醚（60～90℃）、醋酸乙酯、水饱和正丁醇萃取, 回收有机溶剂，得各部位萃取物。
        取石油醚部位萃取物15 g，硅胶柱层析，以石油醚-醋酸乙酯系统（20:1→1:1）梯度洗脱，得9个组分(Fr.1-9)。Fr.3组分经减压回收溶剂浓缩，有白色片状结晶析出，经重结晶纯化的化合物Ⅰ（25mg）；Fr.5 组分浓缩后，再次以石油醚-醋酸乙酯系统（10:1→ 1:1）梯度洗脱，得化合物Ⅱ（12mg）。
        取醋酸乙酯部位萃取物26 g，硅胶柱层析，以石油醚-醋酸乙酯系统（5:1 →0:1）梯度洗脱，得8个组分(Fr.1-8)。Fr.1 和Fr.6组分经减压回收溶剂浓缩分别出现颗粒状沉淀，经Sephadex LH-20 柱色谱，以甲醇洗脱，得化合物Ⅶ（25 mg）、Ⅲ（55 mg）。
        取正丁醇萃取物30 g，硅胶柱层析，以氯仿-甲醇系统（100:1 →0:100）梯度洗脱，得6个组分。Fr.2，Fr.3分别经氯仿-甲醇系统（100:1 →0:100）再次洗脱，得白色沉淀，重结晶纯化得化合物Ⅳ（22 mg）、Ⅴ和Ⅵ混合物（38 mg）；Fr.4，Fr.5分别经Sephadex LH-20 柱色谱和PHPLC柱层析，以甲醇洗脱，得化合物Ⅷ（25 mg），Ⅸ（22 mg）。 
       3  结果
        化合物Ⅰ: 白色片状结晶（石油醚：醋酸乙酯 3：1）, mp153～154℃，硫酸显色呈绿色，与α-菠甾醇对照品薄层色谱Rf值及显色行为一致。13C-NMR (100 MHz,CDCl3): 37.20 (C-1),38.06 (C-2),71.21 (C-3), 31.90 (C-4),40.51 (C-5),29.72 (C-6), 117.52 (C-7), 139.56 (C-8), 49.66 (C-9), 34.55 (C-10), 21.61 (C-11), 39.60 (C-12)，43.51 (C-13), 55.22(C-14), 23.12 (C-15), 28.51 (C-16), 55.99 (C-17), 12.15 (C-18), 13.21 (C-19)，40.87 (C-20), 21.25(C-21),138.36 (C-22), 129.50 (C-23), 51.36 (C-24), 31.90 (C-25), 21.41 (C-26)，19.10 (C-27), 25.39 (C-28), 12.32 (C-29)。以上波谱资料与文献［6］报道一致，确认其为α-菠甾醇。
        化合物Ⅱ: 无色针晶（醋酸乙酯），mp136～138℃,硫酸显色呈绿色,Molish反应阴性。13C-NMR (100 MHz,CDCl3): 36.6(C-1),31.3(C-2),71.2(C-3), 37.3(C-4),140.3(C-5),120.9(C-6), 33.7(C-7), 29.6(C-8), 49.8(C-9), 35.2(C-10), 29.7(C-11), 40.6(C-12)，43.3(C-13), 55.5(C-14), 23.9(C-15), 28.4(C-16), 55.9(C-17), 12.0(C-18), 21.2(C-19)，35.7(C-20), 19.7(C-21),33.8(C-22), 29.5(C-23), 49.8(C-24), 147.6(C-25), 19.2(C-26)，111.0(C-27), 26.5(C-28), 13.2(C-29)。查阅波谱资料显示与文献［7］报道一致，确认为5，25-豆甾二烯醇。
        化合物Ⅲ :白色粉末(甲醇), mp309～310℃,Liebermann反应阳性，Molish反应为阴性。ESI-MS m/z(%):457［M+1］+。1H-NMR(CD3OD)δ：0.86(3H,s，CH3), 0.87(3H,s，CH3),0.98(3H,s，CH3),0.96(3H,s，CH3),1.10(3H,s，CH3), 1.18(3H,s，CH3),0.90～2.10(24H，m),3.71 (1H,dd, J= 4.0,2.0 Hz，H-3),5.36(1H,brs, H-12)。 13C-NMR (CD3OD)δ:40.52(C-1),29.22(C-2), 84.66(C-3),40.26(C-4),69.36 (C-5), 19.12(C-6), 33.81(C-7),40.52(C-8),56.83 (C-9), 39.62(C-10), 24.82(C-11),123.62(C-12)，145.70 (C-13),43.66(C-14),29.02(C-15), 24.36 (C-16), 49.32(C-17),42.51(C-18),48.10(C-19)，31.22(C-20),34.13(C-21), 33.62 (C-22), 29.82(C-23),17.26(C-24),17.40(C-25), 17.56 (C-26)，26.26(C-27), 181.70 (C-28), 33.32(C-29)，23.32(C-30)。与对照品齐墩果酸薄层色谱Rf值及显色行为一致, 1H-NMR (CD3OD)δ与13C-NMR（CD3OD )δ数据与文献报道［8］一致,鉴定化合物为齐墩果酸(Oleanolic acid)。
        化合物Ⅳ : 无色片状结晶（醋酸乙酯）,化合物经酸水解得苷元与糖部分。与已知苷元α-菠甾醇及葡萄糖TLC对照Rf值一致，显色行为相同。1H-NMR  (400 MHz, C5D5N)δ: 0.58 (3H,s), 0.71 (3H,s), 0.98 (3H, d, J =6.5 Hz ), 1.1 (3H, d, J＝6.5 Hz), 4.0 (1H,ｍ), 4.41 (1H, dd, J = 11.7 Hz, 5.3 Hz), 4.58 (1H, dd, J = 11.7, 1.6 Hz), 5.03 (1H, d, 7.9 Hz), 5.05 (1H, dd, J = 15.1, 8.8 Hz) 。以上波谱数据与文献［6］报道的一致，确认其为 α-菠甾醇-β-D-葡萄糖苷。
        化合物Ⅴ和Ⅵ: 白色粉末(氯仿-甲醇) ,mp 269 ℃～ 274 ℃。从1H-NMR 谱上的烯氢比例可以分辨出该粉末为2 个化合物的混合物。将该混合物采用盐酸水解后，薄层色谱检出葡萄糖。其苷元的13CNMR 数据与文献［9，10］报道的β-谷甾醇和豆甾醇的混合物基本一致, 故该混合物鉴定为胡萝卜苷和豆甾醇-β-D-葡萄糖苷葡萄糖苷的混合物。
        化合物 Ⅶ : 黄色针晶（石油醚-醋酸乙酯）。盐酸-镁粉反应呈阳性。紫外光谱显示具有黄酮类化合物的特征峰。与山奈酚对照品共薄层为同一斑点，三种展开系统Rf值一致。1H-NMR波谱数据与文献［11］报道一致，确认其为山萘酚。
        化合物 Ⅷ :黄色无定形粉末， 1H NMR (400MHz, CD3OD) δ:7.83(2H, J=7.6Hz, H-2′, 6′) , 6.73(1H,d, J=7.6Hz, H-3′, 5′) , 6.65(1H, s,H-6 ) ,6.56(1H,br s,H-3) , 5.03(Glc H-1″) .13C NMR (100MHz, CD3OD) δ: 167.9 (C-2) , 100.8 (C-3) , 183.2(C-4 ) , 161.9( C-5) , 99.2(C-6) , 162.2(C-7) ,106.9(C-8) , 156.6(C-9) ,106.8(C-10) , 129.1(C-1′),130.2(C-2′,6′),119.8(C-3′,5′),161.7(C-4′), Glc(C:1-6) :75.3,73.2,80.3,72.3,83.0,63.2,Glc(C:1″-6″) : 102.3, 75.6, 77.8,71.3, 78.6, 62.5。以上波谱数据与文献［12］报道的一致，确认其为牡荆素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
        化合物Ⅸ: 黄色粉末,mp195℃, ESI-MS m/z(%):611［M+1］+。13C-NMR (DMSO-d6)δ: 156.55（C-2）, 133.86（C-3）, 177.58（C-4）,161.24（C-5）, 98.88（C-6）, 164.23（C-7）, 93.89（C-8）,156.83（C-9）, 103.98（C-10）,121.58（C-1′）, 115.62（C-2′）, 144.78（C-3′）, 148.92（C-4′）, 116.23（C-5′），121.03（C-6′）；葡萄糖信号: 104.21(C-1″), 74.56(C-2″),76.88(C-3″),69.89(C-4″),76.32(C-5″)，67.82(C-6″)，鼠李糖信号：101.21(C-1″), 70.56(C-2″),70.96(C-3″),71.23(C-4″),68.92(C-5″)，17.96(C-6″)。 以上数据与文献报道［11］一致,鉴定为芦丁(rutin)。
       4   讨论
        从粟米草石油醚醋酸乙酯及正丁醇萃取部位分离得到9个化合物,经理化与波谱分析,分别鉴定为: α-菠甾醇（α-spinasterol,Ⅰ）、5，25-豆甾二烯醇（5，25-stigmastadienol， Ⅱ）、齐墩果酸(Oleanolic acid，Ⅲ)、α-菠甾醇-β-D-葡萄糖苷(α-spinasterol-β-D-glucoside，Ⅳ)、豆甾醇-β-D-葡萄糖苷(stigmasterol -β-D-glucoside，Ⅴ)、胡萝卜苷(daucosterol，Ⅵ)、山萘酚（kaemferol，Ⅶ)、牡荆素-7-O-β-D-葡萄糖苷（Vitexin-7-O-β-D-glucoside，Ⅷ)、芦丁(rutin，Ⅸ）。化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ为首次从粟米草中分得。通过以上的研究，发现粟米草含有较丰富的黄酮类和甾体类化学成分, 这可能作为粟米草抗心血管疾病的药效物质基础，下一步工作将对分得的成分进行药理活性筛选。
       【参考文献】
         　　［1］全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编.第一版［M］. 北京：人民卫生出版社，1973：597.
       
       ［2］刘可越. 粟米草属植物资源、成分及药理作用研究进展［J］.时珍国医国药，2009，20（2）：397.
       
       ［3］姚果原, 卢琦华，李 丽，等. 粟米草提取物(MP876)的抗乌头碱及其对大鼠血浆和心肌cAMP的影响［J］.中药药理与临床,1991,7（S）：11.
       
       ［4］李雪芹，高春华，刘建云，等.粟米草提取物对自发性高血压大鼠的降压作用［J］.山东医药，2005,17 (6 )8
       
       ［5］汪开治. 埃及科学家发现星毛粟米草根含抗癌化合物［J］.浙江林业科技，2006，26（2）：33
       
       ［6］陈昌祥，叶海亚，申永乐等.红木荷树皮的化学成分［J］.云南植物研究，1997，19（2）：201.
       
       ［7］张 桢，刘光明，任艳丽，等.算盘子的化学成分研究［J］.天然产物研究与开发，2008，20(3):447.
       
       ［8］曾建伟,钱士辉,吴锦忠,等.薄荷非挥发性成分研究［J］.中国中药杂志，2006，31（5）：400.
       
       ［9］金 丽, 卢 嘉,金永生，等. 海南狗牙花化学成分［J］.中国天然药物，2008, 6(4): 271.
       
       ［10］赵天增.核磁共振碳谱［M］.郑州: 河南科学出版社,1982：232.
       
       ［11］刘可越，刘海军，吴家忠，等.款冬花中抑制肺癌细胞增殖活性成分研究［J］.复旦学报（自然科学版），2009，（1）：122.
       
       ［12］冯卫生，李红伟，郑晓珂，等. 构树叶的化学成分［J］.药学学报, 2008, 43 (2) : 173.