文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的鉴定广西玉林产肉桂挥发性成分，并分析其对ADP诱导的血小板聚集的活性成分。方法采用GC-MS法对肉桂挥发性成分进行鉴定，应用比浊法测定肉桂挥发油、桂皮醛、肉桂酸的体外抗ADP诱导的血小板聚集率。结果检测了肉桂挥发油中78个化学信号，鉴定出37个化学成分，占挥发油总量的93.48%;血小板聚集试验结果表明桂皮醛、肉桂油均有显著的抑制血小板聚集活性，而肉桂酸对抑制血小板聚集作用不明显。结论采用GC-MS分析与效应评价相结合的方法，研究了广西玉林产肉桂挥发油抑制ADP诱导的血小板聚集的效应成分，为进一步阐明肉桂活血通经的效应物质及作用机理提供依据。
       【关键词】  肉桂; 挥发油; 气相色谱-质谱联用; 血小板聚集
       肉桂为樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl 的干燥树皮。多于秋季剥取阴干，气香浓烈，味甜辣[1]。肉桂在我国主要分布于广西、广东，其次是海南、云南、福建，而四川、江西、贵州、湖南、浙江、台湾南部也有少量的栽培。国外主要分布于越南、印度、斯里兰卡、印尼和柬埔寨等国[2]。肉桂性味辛、甘、热;归肾、脾心、肝经，具有补火助阳，散寒止痛，活血通经的功效[1]。现代药理学研究表明肉桂挥发油具有镇痛解痉、解热、降血压、抗菌、升高白血球、抗肿瘤、抗溃疡健胃、壮阳等作用[3，4]。对于肉桂挥发油化学成分的分析虽已有文献报道[5，6]，但由于肉桂挥发油成分较复杂，且不同产地也导致了肉桂挥发油成分明显的差异。本文采用GC-MS分析与效应评价相结合的方法，研究了广西玉林产肉桂挥发油、桂皮醛、肉桂酸对ADP诱导的血小板聚集的影响及产生影响的效应成分，为进一步阐明肉桂活血通经的效应物质及作用机理提供依据。
       1 仪器与材料
       1.1 仪器挥发油提取器(常规玻璃仪器);Agilent 6890 Network GC System;检测器：Agilen5973 Network Mass Selecter Detector ;自动进样器：Agilent 7683 Series Injector;SHANDA PA-196型血小板聚集仪(上海杉达实业有限公司);Heraeus离心机(Megafuge 1.0R型，德国Kendro公司)。
       1.2 材料与试剂肉桂购自广西玉林，经南京中医药大学段金廒教授鉴定为樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl 的干燥树皮，符合2005版《中国药典》规定;桂皮醛(中国药品生物制品检定所，批号：111710-200513);无水乙醚(中国医药集团上海化学试剂公司，批号：CY030618) ;无水硫酸钠(上海久亿化学试剂有限公司，批号：20060801);枸橼酸钠(BDH公司);二甲基亚砜(DMSO，Sigma公司);腺苷二磷酸(ADP，Sigma公司);PBS缓冲液(pH 7.2～7.4，含137 mmol·L -1 NaCl，217 mmol·L-1 KCl, 10 mmol·L-1 Na2HPO4 和2 mmol·L -1KH2 PO4)
       1.3 动物新西兰家兔，由南京中医药大学动物实验中心提供，SPF级。
       2 方法
       2.1 样品制备称取一定量肉桂粉碎后，加10倍量蒸馏水浸泡5 h，按照2005版《中国药典》Ⅰ部附录XD下挥发油测定方法甲法提取测定挥发油，收油率为2.04%。以乙醚为溶剂配制成浓度为10 μl/ml的样品溶液，备用。血小板聚集实验样品的制备。
       2.2 GC-MS分析色谱条件: 石英毛细管柱(DB-1701，中极性0.25 mm×30 m×0.25 m);载气：N2(高纯氮，含量≥99.999%);程序升温条件：初始温度90℃，保持1 min 后，以4℃·min-1的速率升温至175 ℃并保持5 min ，以 1℃·min-1的速率升至180℃，保持2min后以8℃·min-1的速率升至210℃，保持10 min。分流比100∶1 ;进样口温度：200℃;检测器温度：250℃。　　质谱条件:离子源温度:200 ℃;电离电压:70 Ev;扫描质量范围:35～400 Amu;扫描方式: EI 源;扫描间隔：0.1 s。
       2.3 血小板聚集实验以ADP为诱导剂，按比浊法测定血小板聚集率。家兔全血与抗凝剂(3.8%枸橼酸钠)9∶1混匀，1 000 r/min离心8 min，取得上层富血小板血浆(PRP)，余血再以3 500 r/min离心10 min，得贫血小板血浆(PPP)。取350 μl PRP置于比浊管内， 然后加入受试样品(做4个复管)，37℃温育5 min，随后在PRP中加入7 μl的ADP(使其终浓度为10 mmol/L)，在血小板聚集仪上检测最大聚集率，观察样品对血小板聚集率的影响作用。以生理盐水及阿司匹林分别作空白对照和阳性对照。
       3 结果
       3.1 GC-MS 分析结果按“2.2”项下GC - MS 条件对挥发油进行分析，得其总离子流图(见图1)，共检测到78个信号峰，总离子流图中的各峰经NIST05 标准谱库的检索，并根据质谱裂解规律进行核对，参考标准图谱和相关文献确定其化学结构，结果列于表1，鉴定了其中37种成分，占挥发油总量的93.48%，其中含量最高的为反式肉桂醛，含量高达62.16% ，并首次鉴定出β-水芹烯、茴香酮、茴香脑、β-榄香烯、α-佛手柑油烯、-古芸烯等10种成分。图1肉桂挥发油的TLC图
       3.2 血小板聚集试验结果空白对照以及供试样品对血小板聚集的影响结果见表2，其中肉桂油、桂皮醛对血小板聚集具有显著的抑制作用，抑制率分别为76.6%和82.5%(P<0.01)，而肉桂酸对血小板聚集的抑制作用较弱。表1 肉桂挥发油化学成分分析结果表2 血小板聚集试验结果
       4 讨论
       从表1可以看出已鉴定出的化合物中含量最高的是反式肉桂醛，相对含量为62.16%，可见桂皮醛是肉桂油的主要成分，肉桂入药之所以具有镇痛解痉、解热、扩张血管、缓解肢体疼痛、抗菌、抗肿瘤作用，与其含有较多量的桂皮醛有关[7～9]。在已鉴定出的成分中苯甲醛、苯丙醛、顺式肉桂醛、-荜澄茄烯、γ-衣兰油烯、-衣兰油烯、β-杜松烯、咕巴烯等的含量较高，与文献报道基本一致[4，5]。本次实验还首次鉴定出β-水芹烯、茴香酮、茴香脑、β-榄香烯、α-佛手柑油烯、-古芸烯等10种成分，这可能是肉桂产地不同或提取方法不同所致，挥发油的活性是否与这些成分相关，有待进一步研究。
       【参考文献】
         [1] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社,2005：91
       
       [2] 韦如萍, 黄永芳, 胡德活，等.肉桂的研究现状及发展趋势[J]. 经济林研究，2006,24(3):65.
       
       [3] Mounia Oussalah , Stéphane Caillet, Linda Saucier, et al. Inhibitory Vects of selected plant essential oils on the growth of fourpathogenic bacteria: E. coli O157:H7, Salmonella Typhimurium, Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes[J]. Food Control，2007,18:414.
       
       [4] M.N. Somchit, I. Reezal, I. Elysha Nur, et al. In vitro antimicrobial activity of ethanol and water extracts of Cassia alata[J]. Journal of Ethnopharmacology， 2003,84:1.
       
       [5] 邱 琴,崔兆杰,韦栋梁，等.肉桂挥发油化学成分的研究[J].上海中医药大学学报，2003,17(3):49.
       
       [6] 董 岩,魏兴国,刘明成.肉桂挥发油化学成分的GC/MS分析[J].齐鲁药事，2004,23(3):34.
       
       [7] K. Hayashi, N. Imanishi, Y. Kashiwayama, et al. Inhibitory effect of cinnamaldehyde, derived from Cinnamomi cortex,on the growth of influenza A/PR/8 virus in vitro and in vivo[J]. Antiviral Research，2007,(74):1.
       
       [8] Eun-Yi Moon, Mi-Ran Lee, Ai-Guo Wang,et al. Delayed occurrence of H-ras12V-induced hepatocellular carcinoma with long-term treatment with cinnamaldehydes[J]. European Journal of Pharmacology，2006，530:270.
       
       [9] 郭建友,霍海如,刘洪斌，等.桂皮醛对IL21刺激下脑微血管内皮细胞COX-1、COX2活性及释放PGE2 的影响[J].中药药理与临床，2005，21 (6)：16.