文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的观察赤雹根水提取物对人白血病细胞K562的抑制作用。方法采用MTT法和细胞形态学观察的方法, 观察不同浓度赤雹根水提取物对人白血病细胞K562的抑制作用。结果赤雹根水提物对人白血病细胞K562的增殖有剂量依赖性的抑制作用,其中浓度1，0.5 ，0.25，0.125，0.062 5 mg/ml的赤雹根水提物对人白血病细胞K562的抑制率分别为85.61%，69.78%，37.98% ，32.09%，15.68%。结论赤雹根水提物在体外对人白血病细胞K562的增殖有显著的抑制作用。
       【关键词】  赤雹　水提取物　白血病细胞
       Inhibitory Effect of Water Extract from the Roots of  Thladiantha Dubia on the Human Leukemic Cell K562 in vitro
       ZHANG Yuling,ZHAO Bo,LIU Yongping,TONG Jiming*
       Institute of Chinese Materia Medica of Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000，China
       Abstract：ObjectiveTo observe the inhibitory  effect of Water extract from the roots of Thladiantha dubia on the human leukemic cell K562 in vitro.MethodsMorphological and MTT assays in vitro were used to explore the inhibitory effect of the water extract of the Thladiantha dubia Bunge roots on the human leukemic cell K562.ResultsThe water extract of the Thladiantha Dubia Bunge roots of different concentrations could obviously inhibit the growth of the human leukemic cell K562, and the inhibition ratio of the water extract of the Thladiantha dubia Bunge roots at the concentrations of 1，0.5，0.25，0.125，0.062 5 mg/ml was 85.61%,69.78%,37.98% ,32.09% and 15.68% respectively.ConclusionThe water extract of the Thladiantha Dubia Bunge roots has obvious inhibitory effect.
       Key words： Thladiantha dubia Bunge;   Water extract ;   Leukemic cell　
        赤雹(Thladiantha dubia Bunge, TDB) 为葫芦科多年蔓生草本植物［1］ , 赤雹根为赤雹的干燥成熟块根,主要分布于华北、东北、内蒙等地区,为满族民间长期沿用的药材，多为民间自种备用。赤雹根味苦性寒，活血祛淤，清热解毒，且具通乳作用。主要用于瘰疬、痈肿及产后血淤、乳汁不通等症［2］。有研究报道赤雹根中含有赤雹苷A、B、C、D、E、F, ［3，4］，而近年的研究表明中药中的总皂苷成分具有广泛的抗肿瘤作用［5］，目前国内外尚无关于赤雹根抗肿瘤作用研究的报道，所以本文对赤雹根的体外抗白血病细胞活性进行了实验研究, 旨在为对其进行进一步的研究和开发奠定基础。
       1  仪器与材料
       1.1  仪器与试剂洁净工作台(上海净化设备厂) ; 1815TC型CO2 培养箱(美国SHELLAB产品) ; MK3型酶联免疫检测仪(Thermo Labsystems)  。
        RPMI1640培养液（批号307964），GIBCO产品，常规溶解，过滤除菌，分装后4℃保存，使用时加入10%FCS、青链酶素各100 μg/ml ,5%NaHCO3调pH 7.2,成为RPMI1640完全培养液;溴化二甲噻唑二苯四氮(MTT) ( Sigma产品，批号AM0793)
       1.2  试药干燥赤雹根 ，采自青龙满族自治县，药材经承德医学院中药研究所赵春颖副研究员鉴定为葫芦科草本植物赤雹的干燥成熟块根。
        取干燥洁净赤雹根粗粉，先加适量水浸泡过夜，然后加足10倍量水煎煮两次，第1次1 h，第2次40 min，四层纱布过滤，合并两次滤液，置离心机中3 000r/min离心15 min，取上清液置旋转蒸发仪中80℃减压浓缩，得棕黄色的稠膏，再置80℃烘箱中烘干得干燥粉末。取0.1 g干燥粉末置玻璃瓶中，加5 ml生理盐水，超声5 min使全部溶解，以0.14MP压力,高压灭菌30 min，使用前在洁净工作台中用灭菌生理盐水分别稀释成10，5，2.5，1.25，0.625 mg/ml的溶液备用。
       1.3  细胞株 人白血病细胞K562,由承德医学院附属医院郝长来教授惠赠，本室常规传代培养。
       2  方法
       2.1  MTT实验［6］   取对数生长期的人白血病细胞K562 (2×105 个/ml)接种于96孔平板上（100μl/孔）,孵育24 h,每孔加入80μl含10%胎牛血清的RPMI 1640完全培养液,然后加入不同浓度的药物各20μl，每一浓度设4 个复孔，对照组加等量灭菌生理盐水，吹打均匀，置培养箱内（37 ℃, 5% CO2饱和湿度）培养24   h后，小心吸去各孔内培养液，于每孔中加入 5mg/ml的MTT溶液100μl，吹打均匀，置培养箱内培养4 h，吸去上清液,每孔加二甲基亚砜(DMSO) 100 μl，振荡10 min，应用酶联免疫检测仪于490 nm波长处检测各孔吸光度(A值) ，按公式计算其抑瘤率。抑瘤率IR(% ) =对照组A值
       实验组A值/对照组A值×100%。
       2.2  细胞形态学观察取对数生长期的人白血病细胞K562，调整浓度为2×105 个/ml，接种于25 ml培养瓶中，分为对照组和实验组，培养24 h后，实验组加入终浓度分别为1，0.5，0.25，0.125，0.062 5 mg/ml的赤雹根水提物，继续培养24 h，置于倒置显微镜下观察活细胞形态。
       3  结果  
       3.1  MTT法结果显示不同浓度的赤雹根水提物均能显著抑制人白血病细胞K562的生长,诱导细胞凋亡,且具有明显的剂量依赖性。各样品组与空白对照组相比,吸光度值的差异有统计学意义( P< 0.01) 。不同浓度的赤雹根水提物对人白血病细胞K562的抑制率见表1，图1。表1  不同浓度的赤雹根水提物对K562人白血病细胞的体外作用(略)
       3.2  细胞形态学观察镜下可见对照组细胞数量较多，细胞已长满整个瓶壁，且生长状态良好，界限清楚，形态饱满透明，胞膜完整，而不同浓度的赤雹根水提物组细胞数量较少，生长状态较差，细胞形态不规则，收缩变窄，瓶中漂浮有细胞碎片。
       4  讨论
            　　
       白血病是造血系统的恶性疾病之一,是由于造血干细胞分化异常, 血液或骨髓内白细胞及其幼稚细胞(即白血病细胞)不正常地过度增生造成的。白血病好发于儿童和青年, 男性患者较女性多。据世界卫生组织2002年统计, 全球每年新发病例约30万, 死亡人数约22万, 高居致命恶性肿瘤第9位［7］。20世纪80年代以来, 国内外有些研究者以中医理论为基础, 结合现代科学技术, 从中药中提取研制了较多的抗白血病制剂, 并对中药及天然药物的抗白血病作用进行了实验研究, 发现中药及天然药物不仅副作用小, 还具有注重整体、攻补兼施的优点, 这是一些化疗药物所不能比拟的。因此, 从中药及天然药物中提取有效制剂, 已经成为抗白血病的重要途径。
       
       满药赤雹为葫芦科多年蔓生草本植物，有研究报道赤雹根中含有赤雹苷A、B、C、D、E、F［3，4］，而近年的研究表明中药中的总皂苷成分具有广泛的抗肿瘤作用［5］，本文通过体外抗肿瘤实验MTT法,亦证明了赤雹根水提物对人白血病细胞K562具有一定抑制作用,且具有明显的剂量依赖性。但其对白血病细胞具有抑制作用的活性成分及机制还有待进一步研究。
       【参考文献】
         　　［1］宋立人， 红 恂，丁绪亮，等. 现代中药大辞典(上册)［M］.北京: 人民卫生出版社, 2001： 1022.
       
       ［2］河北省革命委员会.河北中草药［M］.石家庄：河北人民出版社，1977：741.
       
       ［3］Nagao T,Okaba H,Mihashi K.Studies on the constituents of T hladiantha Dubia Bunge.Ⅰ.The structure of dubiosides A,B and C,The quillaic acid glucuronide saponins isolated from the tuber［J］.Chem Pharm Bull,1989,37(4):925.
       
       ［4］Nagao T,Tanaka R,Okaba H.Studies on the constituents of T hladiantha Dubia Bunge.Ⅱ.The structure of dubiosides D,E andF,neutral saponins of quillaic acid isolated from the tuber［J］.Chem Pharm Bull,1990,38(2):378.
       
       ［5］宿树兰，李永辉. 中药中三萜皂苷成分抗肿瘤活性研究概况［J］. 时珍国医国药,2006,17(7):3511.
       
       ［6］徐叔云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学，第3版［M］.北京: 人民卫生出版社, 2003： 1785.
       
       ［7］曹志成. 白血病的综合治疗与新进展［J］. 现代肿瘤医学, 2007,15(8):1051.