文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的建立姜连止泻片中盐酸小檗碱的高效液相色谱（HPLC）含量测定方法。方法采用HPLC法，色谱柱:Waters Symmetry ShieldTM RP18 柱（150 mm×3.9 mm，5 μm），流动相:乙腈-0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至2.0）（22∶78），检测波长:270 nm，流速:1.0 ml·min-1，柱温：30℃。结果盐酸小檗碱在0.12～0.59 μg范围内呈现良好的线性关系（r=0.999 7），加样回收率为98.30％，RSD为1.19％（n=6）。结论该方法快速、简便、准确、重复性较好，结果可靠，可用于控制姜连止泻片制剂的质量。
       【关键词】  姜连止泻片　盐酸小檗碱　高效液相色谱法
       Determination of Berberine Hydrochloride in Jianglianzhixie Tablets by HPLC
       MENG Lei1, SHEN Shengmin, ZHANG Haiming, LI Baolin，DU Shushan
       1.School Hospital of Beijing Normal University ;2.College of Resources Science & Technology, Center for Natural Medicine Engineering，China Ministry of Education, Beijing Normal University, Beijing 100875,China
       Abstract：ObjectiveTo establish an accurate method for the determination of berberine hydrochloride in Jianglianzhixie Tablets.MethodsWaters Symmetry ShieldTM RP18 column (150 mm×3.9 mm，5 μm) in an oven at 30℃ was need，with a mobile phase consisting of acetonitrile-0.05mol·L-1 potassium dihydrogen phosphate(phosphate regulation pH value to 2.0) (22:78) and a UV detector at 270 nm, the flow rate was 1.0 ml·min-1. ResultsThe linear range of berberine hydrochloride was  within 0.12～0.59 μg. The average recovery was 98.30% and RSD was 1.19%(n=6).ConclusionThe method is simple and accurate, and can be used for the quality control of Jianglianzhixie tablets.
       Key words：Jianglianzhixie Tablets;   Berberine hydrochloride;   HPLC
        姜连止泻片是由炮姜、黄连、益智仁、诃子（肉）、麦芽（炒）、白术（炒）、补骨脂（盐）等组成的纯中药制剂，具有补肾健脾，清肠止泻之功效，用于治疗慢性腹泻或五更泄泻，肠鸣，腹胀、腹冷隐隐作痛，口淡、纳食减少，伴形寒肢冷，腰膝酸软等。姜连止泻片是北京中医药大学附属东直门医院姜良铎教授多年临床经验方。黄连为本品方中的君药，盐酸小檗碱是该药的主要有效成分，故以盐酸小檗碱为指标进行含量测定，控制成品的质量。参照《中国药典》2005年版Ⅰ部［1］，我们建立了姜连止泻片中盐酸小檗碱的HPLC含量测定方法，该方法快速、简便、准确、重现性较好，结果可靠，可用于姜连止泻片制剂的质量控制。
       1   仪器与试药
        LC-2010C高效液相色谱仪（日本岛津公司）；KQ250型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），Mettler Toledo AG135十万分之一电子分析天平(瑞士Mettler公司）。
        盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：110713-200208，供含量测定用)；姜连止泻片（自制，批号：20070311、20070313、20070315）；乙腈为色谱纯，水为纯净水，其他试剂均为分析纯。
       2   方法与结果
       2.1   色谱条件色谱柱: Waters Symmetry ShieldTM RP18 柱（150 mm×3.9 mm，5 μm），流动相：乙腈∶0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至2）（22∶78），检测波长:270 nm，流速:1.0 ml·min-1，柱温：30℃，进样体积：10 μl。
       2.2   溶液制备
       2.2.1   对照品溶液的制备 
       精密称取盐酸小檗碱对照品3.96 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，精密吸取1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得(每1 ml含盐酸小檗碱39.6 μg)。
       2.2.2   供试品溶液的制备
       取本品适量，粉碎成细粉，称取细粉约0.15 g，置50 ml的容量瓶中，加入盐酸甲醇（1→100）45 ml，超声处理 (功率250 W，频率40 kHz) 30 min，取出，放冷至室温，用盐酸甲醇（1→100）定容至刻度，摇匀，滤过，即得。
       2.2.3  阴性供试品溶液的制备按姜连止泻片制备工艺制得缺黄连的阴性样品制剂，再按供试品溶液的制备方法制得阴性样品溶液。
       2.3   线性关系考察分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液（0.039 6 mg·ml-1)3，5，8，10，13，15 μl。在上述色谱条件下，分别注入液相色谱仪测定，以盐酸小檗碱峰面积为纵坐标（Y），盐酸小檗碱对照品的进样量为横坐标（X），得回归方程为：Y= 3.219×106X+ 8.196×104，r =0.999 7。以上结果表明，样品进样量在0.12～0.59 μg范围内，盐酸小檗碱峰面积与进样量呈现良好的线性关系。
       2.4   专属性实验吸取盐酸小檗碱对照品溶液、姜连止泻片供试品溶液及缺黄连的阴性对照溶液各10 μl，分别注入色谱仪。按上述方法进行测定，结果表明，盐酸小檗碱对照品与姜连止泻片中盐酸小檗碱的保留时间基本一致，阴性供试品溶液在盐酸小檗碱色谱峰位置处无相应的峰出现，说明本品中盐酸小檗碱来自姜连止泻片中的黄连，制剂中其他成分对盐酸小檗碱的测定不产生干扰。所得盐酸小檗碱对照品、供试样品及阴性供试品色谱图。见图1。
       2.5   精密度实验精密吸取25 μg·ml-1盐酸小檗碱对照品溶液10 μl，重复进样6次，计算得盐酸小檗碱峰面积的RSD为0.88％（n=6），精密度良好。
       2.6   稳定性实验精密吸取同一供试品溶液（批号:20070311），分别于0，2，4，6，8，12 h进样测定，记录峰面积，结果盐酸小檗碱峰面积的RSD为1.29％（n=6），表明姜连止泻片供试品溶液在12 h内稳定性良好。
       2.7   重复性实验精密称取同一批姜连止泻片（批号:20070311）6份，按“2.2.2”项下方法制备供试液，并在上述色谱条件下进行测定。结果样品中盐酸小檗碱平均含量的RSD为1.37％（n=6），重现性较好。
       2.8   加样回收率实验取本品已知准确含量的样品(批号：20070311)0.075 g，精密称定6份，置50 ml量瓶中。再分别精密加入盐酸小檗碱对照品溶液(1.511 0 mg·ml-1) 1 ml，按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，进样10 μl，在上述色谱条件下测定。结果见表1。
       2.9   样品测定在上述色谱条件下，分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，计算3批9个样品中盐酸小檗碱的含量。结果见表2。表1  加样回收率实验（略）
       3   讨论
       3.1  提取时间的考察本实验采用了超声处理的方法，考察了不同提取时间(10，30，60 min)对含量测定的影响，结果表明选择超声提取30 min盐酸小檗碱已提取完全。表2  3批姜连止泻片中盐酸小檗碱的每片含量（略）
       3.2   检测波长的确定经二极管阵列检测器180～400 nm扫描，盐酸小檗碱紫外扫描图见图2。由图2可以看出盐酸小檗碱分别在270.0 nm和349.2 nm两个波长处有吸收，但考虑到在测定过程中使用乙腈作为流动相，在低波长处有紫外吸收，而349.2 nm响应不如270.0 nm，因此检测波长选择为270.0 nm。
       3.3   流动相的选择
       根据文献报道［2，3］，选用乙腈﹕0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至2）（22∶78）为流动相对本品进行试验，色谱柱为Waters Symmetry ShieldTM RP18 柱（150 mm×3.9 mm，5 μm），所得色谱图的分离度好，保留时间较合适，故本实验选用的流动相为乙腈∶0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至2.0）（22∶78），并将该条件的色谱图记录下来，以被测组分盐酸小檗碱峰计算理论塔板数为6 554.7，同时计算盐酸小檗碱与相邻峰的分离度为1.74，根据实验结果，考虑到仪器、色谱柱、流动相的配制和温度等系统因素的影响，规定理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于6 500。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社，2005:214.
       
       ［2］黄海燕，薛 漓.高效液相色谱法测定三黄片中盐酸小檗碱的含量［J］.中国药业，2006， 15（8）:18.
       
       ［3］刘鹏翰，陆来祥，韦庚龙，等.双黄消炎片质量标准的研究［J］.时珍国医国药，2007，18（1）:156.