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       【摘要】 
       目的对多被银莲花与它的两种混淆品小银莲花和黑水银莲花进行系统的生药学鉴定,为其鉴别及应用提供科学依据。方法采用原植物、性状、显微、薄层色谱的方法对3种植物进行鉴定。结果多被银莲花与它的两种混淆品在原植物形态、药材性状、显微特征、薄层色谱图上有明显区别。结论两种混淆品与多被银莲花得到很好的鉴别，且不宜与多被银莲花混用。
       【关键词】  多被银莲花; 小银莲花; 黑水银莲花; 原植物; 性状; 显微鉴定; 薄层色谱
       Pharmacognostic Identification of Anemone raddeana Regel and Two Kinds of its Adulterants
       ZHU Xiaodi, ZHAO Yazhou, FAN Xiuhua*, FU Yaning
       (Beijing Forestrial University , Beijing 100083 , China)
       Abstract：ObjectiveTo identify the traditional Chinese medicine Anemone raddeana Regel and two kinds of its adulterants (Anemone rossii Moore and Anemone amurensis(Korsh.)Kom) with pharmacognosy methods. MethodsThe original plant identification, morphological and histological identification, microscopic identification, thin layer chromatography ( TLC) were adopted. ResultsThe differences of Anemone raddeana Regel and its adulterants were obvious by using the above methods. ConclusionAnemone raddeana Regel and its adulterants can be identified completely by the methods. Furthermore, the adulterants should not mix with Anemone raddeana Regel.
       Key words：Anemone raddeana Regel; Anemone rossii Moore; Anemone amurensis(Korsh.)Kom; Original plant identification; Morphological and histological identification; Microscopic identification; TLC
       多被银莲花Anemone raddeana Regel为毛茛科银莲花属植物，其干燥根茎为常用中药两头尖，收载于《中国药典》2005版，用于治疗风寒湿痹，四肢拘挛，骨节疼痛，痈肿溃烂等症，其药用主成分以竹节香附素A计。该药材主产于东北地区及山东省等地，尤以吉林省产量为大[1]。我们在长白山地区的实地考察中，发现该地区的两头尖药材中混有同属植物小银莲花Anemone rossii Moore以及黑水银莲花Anemone amurensis(Korsh.)Kom的干燥根状茎。为确保临床用药的安全有效，我们从原植物，药材性状，显微结构，薄层色谱4个方面对多被银莲花及其两种混淆品进行了生药学鉴定。
       1 材料
       原植物植株于2008-05采于长白山地区阔叶红松林下的草本层片，经北京林业大学赵秀海教授鉴定，分别为多被银莲花Anemone raddeana Regel，小银莲花Anemone rossii Moore及黑水银莲花Anemone amurensis(Korsh.)Kom。Leica Rm 2015石蜡切片机;奥林巴斯BX51荧光显微镜(包括荧光显微镜，DP-70显微图像采集系统，IPP图像分析软件)。竹节香附素A对照品(中国药品生物制品检验所，批号111712-200501)，乙腈为色谱纯(美国Fisher Scientific公司)，其余试剂均为分析纯。
       2 方法
       取部分所采材料药用部位按常规石蜡制片法制作石蜡切片，番红-固绿法染色。
       3 结果及分析
       3.1 原植物鉴定多被银莲花Anemone raddeana Regel为毛茛科银莲花属植物，系多年生草本，高15～30 cm，根状茎横走，纺锤状或圆柱形，长2～3 cm，直径3～8 mm，暗褐色。基生叶1片，有长柄，长7～15 cm，无毛或疏被长毛;三出复叶，小叶具柄，长约3 cm，叶片广卵形，2～3深裂，裂片近倒卵形，基部广楔形，先端再2～3浅裂或不分裂，边缘具圆齿，两面无毛或近基部疏被长毛。花葶近无毛，苞片3枚，轮生，有短柄，形似基生叶，较小，长圆形，先端具圆齿或近全缘，花梗1～1.3 cm，花单生。萼片10～15，白色，长圆形或线状长圆形，长1～2 cm，宽3～6 mm，两面无毛;雄蕊多数，长8-10 mm，花丝细丝状，花药椭圆形;心皮约30，子房密被柔毛，花柱短。花期4～5月，果期6月。生长于阔叶林下，常聚生成片(图1A)。
       小银莲花Anemone rossii Moore为毛茛科银莲花属植物，系多年生草本，高15～30 cm，根状茎圆柱形，长2～3 cm，直径3～5 mm。基生叶1片，有长柄，长8～20 cm，无毛;叶片近圆形，长2～3 cm，宽约4 cm，3全裂，中裂片倒卵形，3中裂到深裂，小裂片具2～3缺裂状齿牙，侧裂片为不等2深裂，亦具缺裂状齿牙，表面被稀疏伏毛，背面无毛。花葶纤细，无毛，苞片3枚，形似基生叶，长1.5 cm，无柄。花径约2 cm，萼片5～7，白色，狭长状倒卵形，长8～12 mm，宽4～7 mm，无毛或外面疏被柔伏毛;雄蕊多数，长约3 mm，花丝细线形，花药长圆形;心皮7～8，子房密被白色长柔毛，花柱短。花期5～6月，果期6～7月。生长于阔叶林下及林缘，常聚生成片(图1B)。
       黑水银莲花Anemone amurensis(Korsh.)Kom为毛茛科银莲花属植物，系多年生草本，高20～30 cm，根状茎横走，细长圆柱形，直径2～4 mm。基生叶1～2枚，二回三出复叶，有长柄，长7～12 cm，小叶具柄，柄长1.5～2 cm，3全裂，中裂片近菱形，长约3 cm，宽2.5～3.5 cm，近羽状分裂，侧裂片歪卵形，不等2深裂，裂片再羽状分裂，边缘呈不规则锯齿状，两面近无毛或沿叶脉被疏毛。花葶纤细，下部无毛，上部疏被柔毛，苞片3枚，形似基生叶，有柄，柄长1.5～2 cm，具狭翼。花径2～3.5 cm，萼片6～9，白色，长圆形或倒卵状长圆形，长约14 mm，宽约5 mm;雄蕊多数，长4～6 mm，花丝细丝状，花药椭圆形;心皮10～12，子房被柔毛，瘦果卵形，花柱宿存，柱头外弯。花期5月，果期6～7月。生长于阔叶林下及林缘，常聚生成片。该种在长白山阔叶红松林早春植物群落中具有最大的重要值[2～4]。(见图1C)。
       图1 多被银莲花(A)，小银莲花(B)，黑水银莲花(C)的原植物图
       3.2 性状鉴定多被银莲花干燥根状茎呈纺锤形，中部膨大，两端尖细，无分支，长1～3 cm，直径2～6 mm。表皮深褐色或灰黑色，有细微纵褶皱，偶见不明显分节(3～5节)，膨大处常见鱼鳞状根痕。质脆而硬，易折断，断面角质样，略平坦，中心灰白色或灰褐色，边缘灰黑色。气微，味先淡而后苦，微麻辣[5]。
       小银莲花干燥根状茎呈圆柱形，偶见分支和细小不定根，长1～3 cm，直径3～5 mm。表皮黄棕色，一端有明显的黄色芽鳞，分节明显(粗而短)，节间长1～2 mm，茎节处有交互状排列的叶痕。质脆而硬，易折断，断面粉性，淡黄色。气香，味苦而微辣。
       黑水银莲花干燥根状茎呈长圆柱形，偶见细小不定根，长2～6 cm，直径2～4 mm。表皮红棕色，略光滑，分节较明显(细而长)，节间长3～5 mm，茎节处有交互状排列的叶痕。质脆而硬，易折断，断面略带粉性，平坦，类白色或棕黄色。气香，味微辣。
       3.3 显微鉴定多被银莲花根茎横切面：表皮为一列扁平的类方形细胞，紧密排列，切向延长，外壁增厚，木栓化。皮层由约10列近圆形的薄壁细胞构成。维管束外韧型，8～12个呈环状排列。韧皮部细胞拥挤皱缩，木质部导管8～26个，数个成群，多切向排列，形成层不明显。射线宽阔，髓部较大，由近圆形的薄壁细胞构成。薄壁细胞内含有较多淀粉粒(见图2A,B)。
       小银莲花根茎横切面：表皮细胞一列，排列紧密，切向略有延长，外币增厚，木栓化。皮层由约20列近圆形的薄壁细胞紧密排列而成，皮层中偶见螺纹导管。维管束外韧型，4～8个，常2至数个联合成弧形排列。韧皮部细胞拥挤皱缩，木质部导管14～50个，数个集合，排列成弧形，形成层不明显。射线不甚明显，髓部较小，由近圆形的薄壁细胞构成。薄壁细胞内含有较多淀粉粒(见图3A,B)。
       黑水银莲花根茎横切面：表皮为一列扁平的类方形细胞，紧密排列，切向延长，外壁增厚，略木栓化。皮层由6～8层近圆形或椭圆形的薄壁细胞构成，皮层中偶见石细胞。维管束外韧型，8～10个呈环状排列。韧皮部细胞拥挤皱缩，木质部导管10～40个，单个散生或数个成群集合成团状，形成层不明显。射线宽阔，髓部宽广，由近圆形或近六边形的薄壁细胞构成。薄壁细胞内充满淀粉粒(见图4A,B)。
       图2 多被银莲花根状茎横切面(A)，维管束及皮层细胞(B)
       3.4 薄层鉴定按照《中国药典》2005版两头尖“薄层鉴定”的规定制备多倍银莲花及其两种混淆品的供试品。分别取3种植物的干燥根状茎粉末(过3号筛)约5 g,置于索氏提取器中，加甲醇适量，回流提取3 h后，回收溶剂至干，残渣用10 ml水溶解，并用乙醚振摇提取2次(20,10 ml)，弃去醚层。水液再用水饱和正丁醇振摇提取5次(20,20,15,15,15 ml)，合并正丁醇液，并减压回收溶剂至干。残渣用甲醇溶解并定容至10 ml,摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。取竹节香附素A对照品10 mg，用甲醇溶解并定容至10 ml，作为对照品溶液。按照《中国药典》2005版薄层色谱法(附录ⅥB)实验[5]。
       图3 小银莲花根状茎横切面(A)，维管束及皮层细胞(B)
       图4 黑水银莲花根状茎横切面(A)，维管束及皮层细胞(B)
       3.4.1 展开系统1取对照品溶液和3种供试品溶液各2 μl, 分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(7∶3∶1)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液, 105℃加热5 min,显色。可见多被银莲花的供试品与对照品在相同位置均有紫色的斑点，而小银莲花和黑水银莲花的供试品在该位置没有斑点(见图5A)。
       3.4.2 展开系统2取对照品溶液和3种供试品溶液各2 μl, 分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-乙酸-水(4∶1∶5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液, 105℃加热5 min,显色。可见多被银莲花的供试品与对照品在相同位置均有紫色的斑点，而小银莲花和黑水银莲花的供试品在该位置没有斑点(见图5B)。
       4 讨论
       通过原植物，药材性状，显微结构，薄层色谱4个方面，可以很好地鉴别多被银莲花与它的两种混淆品。原植物特征主要区别在于：多被银莲花根状茎多为纺锤形，三出复叶，叶片广卵形，2～3深裂，裂片倒卵形，萼片10～15，雄蕊长8～10 mm;小银莲花根状茎为圆柱形，叶片近圆形，三全裂，裂片又具缺裂状齿牙，萼片5～7，雄蕊长约3 mm;黑水银莲花根状茎为长圆柱形，二回三出复叶，小叶三全裂，中裂片近菱形，侧裂片歪卵形，苞片具狭翼，萼片6～9，雄蕊长4～6 mm。药材性状主要区别在于：多被银莲花干燥根状茎呈纺锤形，表皮深褐色或灰黑色，有细微纵褶皱，分节不明显，断面中心灰白或灰褐色，边缘灰黑色，气微;小银莲花干燥根状茎呈圆柱形，表皮棕黄色，一端有黄色鳞芽，分节粗而短，断面淡黄色，气香;黑水银莲花干燥根状茎呈长圆柱形，表皮棕红色，较光滑，分节细而长，断面类白色或棕黄色，气香。显微组织特征主要区别在于：多被银莲花皮层细胞约10列，维管束8～12环列，木质部导管多切向排列，髓部较大;小银莲花皮层细胞约20列，皮层中偶见螺纹导管，维管束4～8，常联合成弧形排列，木质部导管较多，亦联合成弧形，髓部较小;黑水银莲花皮层细胞约6～8列，皮层中偶见石细胞，维管束8～10环列，木质部导管多集合成团状，髓部宽广。薄层层析实验：在两个展开系统中，多被银莲花供试品与竹节香附素A对照品在相同位置出现斑点，而小银莲花与黑水银莲花的供试品在此位置无斑点，说明两种混淆品均不含竹节香附素A，与多被银莲花不宜混用。
       最后，我们按照《中国药典》(2005版)两头尖“含量测定”的标准对采集的多被银莲花根状茎部分进行了竹节香附素A的含量测定(HPLC法)，结果其平均含量为0.1964%(n=3，RSD=2.34%)，接近于药典规定的含量标准0.2%，但略低于文献所报道吉林地区两头尖中竹节香附素A的含量，原因可能与采收时节有关。
       【参考文献】
         　[1] 刘大有，李 勇，赵 博，等.两头尖地上部分化学成分及其含量测定分析[J].长春中医学院学报, 2005，21(1)：43.
       
       [2] 傅立国，陈潭清，郎楷永，等.中国高等植物，第3卷 [M].青岛:青岛出版社，2000: 486.
       
       [3] 周 繇，朱俊义，于俊林. 中国长白山观赏植物彩色图志[M].吉林：吉林教育出版社，2005：340.
       
       [4] 于凤英,周永斌,安云全，等.长白山阔叶红松林早春植物群落特征研究[J].沈阳农业大学学报, 2003，34(6):430.
       
       [5] 国家药药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社， 2005:42.