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       【摘要】 
       目的测定冬凌草各部位及不同产地冬凌草叶中总二萜的含量。方法采用紫外分光光度法测定冬凌草提取物中总二萜的含量。结果建立了测定冬凌草中总二萜含量的方法，并对冬凌草不同部位及不同产地冬凌草叶中总二萜含量进行了测定，叶中含量最高，不同产地叶的含量也有差异。结论该方法简便、稳定、可靠，可用于冬凌草提取物中总二萜含量的测定。
       【关键词】  冬凌草; 总二萜; 紫外分光光度法
       Determination of Total Diterpenoids in Rabdosia rubescens by Ultraviolet Spectrophotometry
       KE Yu,YUAN Dongdong,XU Yonggang,LIU Hongmin*
       (New Drug Research & Development Center,Zhengzhou University, Zhengzhou 450001, China)
       Abstract：Objective To determine the total diterpenoids of different parts of Rabdosia rubescens and its leaves from different localities. MethodsThe content of total diterpenoids was determined by ultraviolet spectrophotometry. ResultsBy determining the total diterpenoids of Rabdosia rubescens, the content was different in different parts and high in the leaves. ConclusionThis method is simple, stable and reliable, and can be used to determine the total diterpenoids of Rabdosia rubescens.
       Key words： Rabdosia rubescens; Total diterpenoids; Ultraviolet spectrophotometry
       冬凌草Rabdosia rubescens (Hemsl.) Hara，又名冰凌草，为唇形科香茶菜属多年生草本植物，以地上部分入药，广泛分布于黄河流域及其以南地区，主产于河南太行山区,味甘苦，性微寒，具清热解毒，消炎止痛、健胃活血及抗肿瘤之功效[1]。冬凌草中的活性成分主要是二萜类[2～6]，而冬凌草中的二萜类骨架主要有对映-贝壳杉烷型、对映-6，7-螺断-贝壳杉烷型和对映松香烷型二萜化合物，它们都是具有抗癌活性的化合物[7]，有相似的分子结构式和发色团，所以二萜类化合物在同一波长处具有相似的紫外吸收特征和相同的吸收系数，而且最大吸收波长都在238 nm左右。因此以冬凌草甲素为对照品，采用紫外分光光度法测定冬凌草提取物的总二萜含量[8]，该法简便、稳定、可靠，可作为冬凌草总二萜含量的控制方法。
       1 仪器和材料
       1.1 仪器Jasco V550紫外/可见分光光度计;梅特勒AL104型分析天平。
       1.2 材料和试剂冬凌草的不同部位(S1-种子，S2-花，S3-茎，S4-叶)，不同产地冬凌草叶由本课题组采摘，分别为S5-济源大峪乡叶，S6-山西绛县叶，S7-济源下冶乡叶;冬凌草甲素对照品由本实验室制备，纯度符合要求;95%乙醇(分析纯)。
       2 方法与结果
       2.1 冬凌草不同部位和不同产地冬凌草叶提取物的制备取经50℃真空干燥后S1～S7各2 g，精密称定，分别置于50 ml的锥形瓶中，加入15倍量的95%乙醇，密封，在50 ℃下浸泡3 h，浸泡两次，合并浸泡液，残渣再以10 ml相应的溶剂洗涤3次，合并滤液滤过，准确计量其体积，密封冷藏，待测。
       2.2 标准品溶液的制备精密称取冬凌草甲素标准品6 mg，用95%乙醇溶解，定容至50 ml，即得对照品储备液;分别量取0.5，1，2，3，4 ml置于10 ml容量瓶中用95%乙醇定容至刻度，得浓度分别为6，12，24，36，48 μg·ml-1的系列冬凌草甲素标准液。
       2.3 测定波长的选择取浓度为36 μg·ml-1冬凌草甲素标准品溶液，以95%乙醇为空白溶媒，在200～400 nm范围内扫描。见图1，确定其最大吸收波长为238 nm。
       图1 冬凌草甲素标准品溶液200～400 nm扫描图
       2.4 标准曲线的绘制取上述系列浓度标准品溶液，以95%乙醇为空白，在238 nm处测定吸光度A。以测定的吸收度(A)对溶液浓度(C)进行回归，得线性方程A=0.016 7C+0.010 7，线性相关系数r=0.999 8。测定浓度6～48 μg·ml-1范围内吸光度和浓度呈良好线性关系。
       2.5 稳定性实验将样品S3每隔1.5 h测定1次，连续测定4次，记录吸光度值，计算相对标准偏差。结果见表1。RSD为0.47%，表明供试品溶液在6 h内稳定。表1 稳定性实验结果
       2.6 精密度实验取样品S3，连续测定5次，记录吸光度值，计算相对标准偏差。结果见表2。RSD为0.07%，表明本方法精密度良好。表2 精密度实验结果
       2.7 加样回收率实验精密量取一定量的已知总二萜含量的冬凌草提取物溶液，加入一定量的冬凌草甲素标准品，按“2.1”项下方法制得样品液，测定其吸光度，根据标准曲线计算其含量，用测定量除以实际量，计算得回收率。结果见表3。表3 回收率实验结果
       2.8 样品的测定将稀释后的样品溶液经0.45μm 微孔滤膜过滤，分别在238 nm处测定其吸光度A，按回归方程计算总二萜含量。结果见表4。
       3 讨论
       不同部位含量测定的样品(S1-种子，S2-花，S3-茎，S4-叶)都来自于济源下冶乡，从样品测定结果可以看出，叶子中的总二萜含量最高，其次是花、茎和种子。叶子分别为S5-济源大峪乡叶、S6-山西绛县叶、S7-济源下冶乡叶，结果显示S5-济源大峪乡叶的总二萜含量最高。表4 冬凌草提取物中总二萜的含量
       由于样品原始浓度较大，直接测定时会超出线性范围，将种子和茎提取液稀释10倍，花提取液稀释50倍，叶提取液稀释200倍，可将其稀释到线性范围内。
       回收率实验、精密度实验和稳定性实验结果均表明，用紫外分光光度法测定冬凌草总二萜含量，结果标准偏差较小，重现性好，精密度较高，实验条件容易控制，简单方便，是测定冬凌草提取物中总二萜含量的一种容易操作、稳定可靠的方法。
       【参考文献】
         　[1] 刘 净，梁敬钰，谢 韬.冬凌草研究进展[J].海峡药学，2004，16(2)：1.
       
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       [7] 闫学斌，雷 萌，可 钰，等.冬凌草的化学成分研究[J].时珍国医国药，2006，17(3)：80.
       
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