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       【摘要】 
       目的观察石芍护睛散对实验性干眼病角结膜细胞凋亡的影响。方法对新西兰白兔采用睑板腺开口烧灼及紫外线照射造模，造模成功后随机分组，中药组给予石芍护睛散口服，与空白组及西药组对照，取角结膜切片，记录凋亡细胞所占的比例。结果中药组细胞凋亡明显少于空白对照组，亦少于西药组。结论石芍护睛散对干眼病角结膜细胞凋亡有显著抑制作用。
       【关键词】  石芍护睛散; 干眼病; 细胞凋亡
       干眼病(dry eye syndrome)是眼科临床极为常见的眼表疾病。它是指各种原因引起泪液质和量、或动力学的异常，导致泪膜不稳定和角膜的损害并伴有一系列眼部不适，其主要特征为眼干燥、异物感、畏光、视疲劳或视物模糊、或视力波动等，重者可引起视力障碍，甚至失明，造成视力下降的主要原因是眼表角结膜细胞的凋亡。干眼病有逐年增多的趋势，已成为了眼科的研究热点，研究开发一种行之有效的药物是目前亟待解决的问题。有鉴于此，近年来我们以中医基础理论为据，选用养阴生津、清热行血的中药组方用于临床，取得了一定的疗效。本实验进一步深入研究该方对眼表组织的影响，取得试验数据，为今后的药理研究及开发新的剂型奠定基础。
       1 材料
       健康纯种新西兰白兔21只，雌雄并用，体质量2.5～3 kg，年龄4～5月，适应性喂养7 d后造模。以眼科手术用烧灼器直接烧灼睑板腺开口处，并以紫外线照射兔角结膜，用开睑器撑开实验兔眼睑使之不能闭合。紫外光源强度为400 uw/cm2,波长260～365 nm,照射15 min/次。造模室相对湿度为40%～70%，室温保持在18～20℃。造模3周即可形成干眼病模型，随机将21只兔分成空白对照组、中药组和西药组3组，每组7只，14只眼。
       2 方法
       2.1 给药方法各组连续给药4周，空白对照组予0.9%生理盐水滴眼，3次/d，2滴/次;中药治疗组予石芍护睛散，该方由石斛、白芍﹑赤芍、决明子﹑女贞子、黄精、茺蔚子组成，通过煎煮，提纯，干燥成散剂，按5 mg/kg体重灌服，3次/d;西药治疗组予泪然眼药水滴眼(美国爱尔康眼药厂比利时分厂生产，批号:970219)，3次/d，2滴/次。
       2.2 观测指标用药4周后处死实验兔，立即取角膜及角膜缘周围3 mm结膜标本以甲醛固定，常规石蜡包埋，连续4 μm切片，贴于载玻片，捞片后置于温箱中。用细胞凋亡原位检测试剂盒检测各组兔角结膜上皮细胞的凋亡情况，统计光镜下1 000个细胞，分析并记录凋亡细胞所占的比例。
       2.3 统计学处理计量资料多组均数间两两比较，用SPSS11.0统计Student Newman KeuLs(S-N-K)法;计数资料多组比较，用CHISS高智统计软件非参数检验方法的Kruskal-Wallis 法秩和检验;行平均等级间的两两比较。
       3 结果
       中药组角膜及结膜上皮细胞的凋亡数明显少于空白对照组，有极显著性差异(P<0.01);西药组角膜及结膜上皮细胞的凋亡细胞数少于空白对照组，有显著性差异(P<0.05);中药组和西药组比较，中药组角膜及结膜上皮的凋亡数略少于西药组，但无显著性差异(P>0.05)。各组角膜及结膜上皮的凋亡数见表1。表1 各组角膜及结膜上皮细胞凋亡数比较(±s)与空白对照组比较，*P<0.05，** P<0.01;与中药组比较，△ P>0.05;n=14
       4 讨论
       干眼病是目前最为常见的眼表疾病，近年来，随着电脑、空调的应用，以及准分子激光削切术在近视眼手术治疗中的运用等的普及，本病的发病率更有上升趋势，严重危害人们的视觉质量和生活质量。目前公认的干眼病是以泪液产生减少、粘液分泌异常和睑板腺功能障碍等各种原因引起的泪膜液性成分的绝对和相对缺乏、眼表泪液分布异常、泪液蒸发增加为共同特征的综合征。干眼病加重将引起眼表角膜与结膜的损伤，尽管造成干眼的原因不同，但有共同的组织病理学改变，主要表现为角膜与结膜上皮细胞的凋亡，最终导致角膜混浊和视力丧失。细胞凋亡(apoptosis)又称程序性死亡(programmed cell death，PCD)，是指有核细胞在一定的生理或者病理条件下，通过启动自身内部机制，遵循自身程序，主要通过内源性DNA内切酶的激活而发生的细胞主动死亡，是在基因调控下的一种生理死亡。细胞凋亡在干眼病发病机制中的作用主要表现在两方面：一是对泪腺、角膜和结膜杯状细胞的影响;二是对炎症细胞(淋巴细胞)的影响。Krenzer KL等[1]发现正常角结膜极少发生细胞凋亡，而角结膜干燥症狗结膜上皮细胞和泪腺腺泡细胞凋亡增加。马轶群[2]等在对去势雄兔干眼症动物模型的研究发现细胞凋亡是干眼症兔泪腺、角膜及结膜组织损伤破坏的原因。
       面对众多干眼患者，国内外尚无特殊有效的治疗对策。既往西医主要采用泪液替代疗法，但作用时间短，而且大多眼药水都含有防腐剂和添加剂，长期使用对眼表组织有损害;或力图减少泪液的丢失，如封闭泪点[3]，但是泪液循环受阻，极易造成眼部感染;或作腺体移植手术，主要是移植自身的口腔周围的腺体,但是移植腺体的分泌物的成分不等同于自然泪液，而且口腔周围腺体移植后会造成口干等不适症状;其次，一些免疫抑制剂也有应用，如环孢霉素A等[4]，但是毒副作用较大。故本课题旨在探讨临床用于干眼病行之有效的石芍护睛散对干眼病眼表组织的保护与修复作用。
       根据干眼病的临床特征，可归属于中医眼科学“神水将枯”范畴。其病机主要为肝肾阴虚，泪液生化无源，同时虚热伤津，因虚致瘀。治宜养阴生津为基，辅以清热行血。石芍护睛散方中石斛为滋养阴液之要药;白芍养阴敛血，对阴虚生热，血燥液亏者有良效;赤芍凉血化瘀;决明子明目而有清热作用，既能补阴，又能清阴虚所生燥热;女贞子滋补肝肾，明目;黄精补阴补血;茺蔚子养阴并有活血作用具有养阴行血之功。本实验结果显示，各组实验兔角结膜上皮均出现凋亡细胞，但中药组细胞凋亡数明显少于空白对照组，亦少于西药组，说明石芍护睛散对干眼病角结膜上皮细胞的凋亡有着显著的抑制作用，能较好地促进角结膜上皮细胞的修复，对维护角结膜上皮的完整性有着良好的效果。
       【参考文献】
         　[1] Krenzer KL,Reza DM,Ullman MD,et al.Effect of androgen deficiency on the human meibomian gland and ocular surface[J].J Clin Endocrinol Metab,2000，85:4874.
       
       [2] 马轶群，王传富，刘光美.去势雄兔干眼病模型角膜上皮细胞凋亡及相关基因表达的研究[J].眼科研究，2004，22(3):286.
       
       [3] Sridhr MS,TernandesM,Rao GN.Dry eyes bi agnosi and nagent[J]. 美中国际眼科杂志,2002，2(1):4.
       
       [4] 杨志强.环孢霉素A滴眼液治疗干眼症的临床观察[J].实用诊断与治疗杂志,2005，19(1)：52.