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       【摘要】 
       目的研究鹿筋胶原的抗炎免疫作用。方法通过大鼠足肿胀模型和大鼠棉球肉芽肿模型研究鹿筋胶原的抗炎作用;通过观察小鼠对2，4二硝基氯苯(DNCB)所致的迟发型超敏反应(DTH)的影响和网状内皮系统吞噬功能的影响研究鹿筋胶原的免疫调节作用。结果鹿筋胶原能有效地抑制角叉菜胶引起的足肿胀;减轻棉球肉芽肿产生的炎症反应;提高二硝基氯苯所致小鼠迟发型超敏反应和小鼠巨噬细胞吞噬功能。结论鹿筋胶原具有明显的抗炎、免疫调节作用。
       【关键词】  鹿筋胶原; 抗炎; 免疫调节
       鹿筋作为鹿产品的一种,是鹿科动物梅花鹿Cervus nippon Temminck或马鹿C.elaphus L.的四肢干燥筋，始载于《唐本草》,用于治疗肾虚手足无力、风湿关节痛、劳损、转筋等症[1]，而鹿筋中的主要成分是胶原蛋白[2]。胶原是结缔组织极其重要的的结构蛋白，起着支撑器官、保护机体的功能，是决定结缔组织韧性的主要因素。胶原与组织的形成、成熟、细胞间信息的传递、细胞增生、分化、运动、细胞免疫、肿瘤转移以及关节润滑等有密切关系，也与一些结缔组织胶原病的发生密切相关[3]。胶原蛋白对关节症等胶原病具有很好的预防及治疗作用[4]。目前研究鹿筋胶原的相关报道很少，本研究主要研究鹿筋胶原的抗炎免疫调节作用，以期待为新药开发提供理论依据。
       1 材料与仪器
       1.1 鹿筋胶原制备梅花鹿鹿筋(市售)去肉、皮、毛后，采用醋酸浸提使其膨胀，水煮提取，胃蛋白酶酶解，离心，上清液冻干，即得鹿筋胶原蛋白，胶原蛋白含量为80%。
       1.2 动物Wistar大鼠，雄性，体质量180～220 g，由吉林大学实验动物中心提供(SCXK-吉-2008-0005);昆明种小鼠，雌雄兼用，体重18～22 g，由吉林大学基础医学院实验动物中心提供(SCXK-2008-0001)。
       1.3 试剂1%角叉菜胶，实验室配置;丙酮(分析级)、乙酸(分析级)、2, 4-二硝基氯苯(DNCB)(分析级)，上海佘山化工厂产品;一得阁墨汁(一得阁∶生理盐水=1∶5，过滤)。
       1.4 仪器AEL-200型电子天平，日本岛津株式会社产品;DT100型和DT2000型电子天平，美国双杰产品; 751-G型紫外分光光度计，上海分析仪器厂产品; S658电热恒温水温箱, 吉林农安产品;GZX-9076MBE数显鼓风烘干箱，上海博讯实业有限公司医疗设备厂产品;电子秒表，上海手表厂产品。
       2 方法
       2.1 鹿筋胶原抗炎作用的药理实验研究
       2.1.1 鹿筋胶原对角叉菜胶所致大鼠足肿胀的影响取雄性大鼠40只，按体质量随机分为4组，即模型对照组，鹿筋胶原高、中、低剂量组。模型对照组按10 ml·kg-1剂量灌胃蒸馏水，鹿筋胶原组按0.4，0.2，0.1 g·kg-1·10 ml-1剂量灌胃给予鹿筋胶原，连续灌胃7 d，末次给药30 min后，在大鼠右后足掌腱膜下注射1%角叉菜胶0.1 ml/只，分别于致炎后0.5，1，2，4，6，8，24 h测量致炎足跖周长，计算给药前后足跖周长的差值，即为肿胀度。
       2.1.2 鹿筋胶原对大鼠棉球肉芽肿的影响取雄性大鼠40只，腹腔注射戊巴比妥钠35 mg/kg，麻醉，消毒，于腋下左右两侧埋入重量(20±1)mg的无菌棉球(青霉素0.2 mg/ml，浸泡，烘干)各一个。于术后2h按体质量随机分为4组，即模型对照组，鹿筋胶原高、中、低剂量组。给药剂量与方式同“2.1.1”，灌胃给药1次/d。7 d后，处死大鼠，仔细剥离并取出棉球，在60℃、12 h烘干，称重。肉芽肿重量(mg)=术后棉球的重量(mg)-术前棉球的重量(mg)。
       2.2 鹿筋胶原免疫调节作用的药理实验研究
       2.2.1 鹿筋胶原对DNCB致小鼠迟发性超敏(DTH)反应的影响取小鼠40只(雌雄各半)，在小鼠背部皮下注射1.25%二硝基氯苯丙酮液0.02 ml/只以致敏，24 h后，按体质量随机分为4组，即模型对照组，鹿筋胶原高、中、低剂量组。模型对照组按10 ml·kg-1剂量灌胃蒸馏水，鹿筋胶原组按0.6，0.3，0.15g·kg-1·10ml-1剂量灌胃给鹿筋胶原，1次/d，连续给药9 d，第10天以0.25%二硝基氯苯丙酮液作对照，38 h后以踝关节处剪下两足，于电子天平上称重，以两足的重量差值为肿胀度作为迟发型超敏反应(DTH)的指标。
       2.2.2 鹿筋胶原对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响取小鼠40只(雌雄各半)，按体质量随机分为4组，即模型对照组，鹿筋胶原高、中、低剂量组。给药剂量与方式同“2.2.1”，1次/d，连续灌胃7d，于末次给药后1 h，做碳粒廓清功能实验。小鼠尾静脉注射一得阁墨汁，于注射后2，10 min分别从内眦静脉丛取血20μl，并立即将其加到2ml 0.1%Na2CO3溶液中。用721分光光度计在600 nm处测光密度值(OD)，以Na2CO3溶液做空白对照，计算单位时间内血清中碳粒廓清速度，同时摘取肝脏和脾脏称重以校正K值。吞噬指数计算方法：k=(1gOD1-1gOD2)/(t2-t1,)，吞噬指数(α)=体质量/(肝重+脾重)×k1/3，数据采用t检验。
       2.3 统计方法计算资料均采用表示，模型对照组与正常对照、各给药组与模型对照组之间差异采用t检验。
       3 结果
       3.1 鹿筋胶原抗炎作用
       3.1.1 鹿筋胶原对大鼠角叉菜胶引起的足肿胀的影响由表1得知，致炎后模型对照组大鼠足跖明显肿胀，与鹿筋胶原组相比有显著性差异(P<0.05，P<0.01)，提示鹿筋胶原具有减轻大鼠足跖肿胀作用。药物起效时间在致炎30 min后，4 h作用最强，8 h后作用逐渐降低，说明鹿筋胶原有较好的抗炎作用。
       3.1.2 鹿筋胶原对大鼠棉球肉芽肿的影响从表2得知，与模型对照组比较，鹿筋胶原中、高剂量组能显著抑制棉球引起的肉芽肿(P<0.05，P<0.01)。
       3.2 鹿筋胶原免疫调节作用
       3.2.1 鹿筋胶原对DNCB致小鼠迟发性超敏(DTH)反应的影响由表3可知，鹿筋胶原中、低剂量组与模型对照组比较，肿胀度有不同程度的升高。说明鹿筋胶原在一定剂量上可促进二硝基氯苯所致小鼠迟发型超敏反应，增强小鼠的免疫力。表1 鹿筋胶原对大鼠角叉菜胶引起的足肿胀的影响表2 鹿筋胶原对大鼠棉球肉芽肿的影响表3 鹿筋胶原对小鼠超敏反应足肿胀的影响
       3.2.2 鹿筋胶原对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响 由表4可知，与模型对照组比较，鹿筋胶原组显著提高小鼠巨噬细胞吞噬功能(P<0.05，P<0.01)，且不同剂量间存在一定的量效关系。
       4 讨论
       免疫与炎症虽是机体对异物的两种不同反应,但有着内在的联系,某些作用机制实为两者所共有[5]。这是因为它们涉及了许多共同的细胞类型、细胞因子、化学介质、发病机理和神经内分泌调节机制等。免疫不仅可使炎症反应增强或起始加速,还可调节炎症过程[6]。因此本实验在观察受试药物抗炎作用的同时,还初步研究了该药物对免疫功能的影响,以便更好地阐明鹿筋胶原的抗炎免疫药理作用。表4 鹿筋胶原对小鼠碳廓清实验的影响
       在本实验研究中，鹿筋胶原对急性抗炎实验角叉菜致大鼠足肿胀、慢性抗炎实验大鼠棉球致肉芽肿都有显著的治疗作用;在免疫调节作用中，能提高二硝基氯苯所致小鼠迟发型超敏反应和单核—巨噬细胞的吞噬功能，从而提高小鼠的自身免疫功能。本实验的研究结果，为鹿筋胶原的临床应用提供了药理学参考。
       【参考文献】
         　[1] 苏 敬.唐本草[M].上海：上海卫生出版社, 1957:210.
       
       [2] 蒋挺大,张春萍.胶原蛋白[M].北京:化学工业出版社,2006：3.
       
       [3] 刘邦强，卢 振，高 音，等.三品同名异物鹿筋的代替使用鉴别及应用[J].中国民族民间医药杂志，2005，14(3)：173.
       
       [4] 卞如濂.抗炎免疫药理学与临床应用[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1992.
       
       [5] 于海玲，曲香芝，陈正爱，等.通鼻胶囊抗炎免疫药理作用的实验研究[J].时珍国医国药，2006,17(5):694.
       
       [6] 徐叔云,魏 伟,梁君山.中药抗炎免疫药理的研究思路[J].药学进展, 1992, 16(2): 65.